《工业微生物学》第三章 氧程度越高 对厌氧菌培养必需创造更严格的无氧环境。一种方法是在斜面接种后,将培养管棉 塞上部截去或用火点着烧掉,用玻璃棒将管内部分的棉花压至离培养基lcm处,棉塞上 方再压入一含水的脱脂棉,加入1:1比例混合的焦性没食子酸和碳酸钠粉末,立即加上 橡胶塞。焦性没食子酸和碳酸钠在有水的情况下,缓慢作用,吸收氧气,放出CO2,造 成无氧环境,见图3.3.3。也可将厌氧微生物固体培养物放在真空干燥器内,用泵排出其 中的空气,并可进一步向其中充入氮气或95%氮气和5%二氧化碳的混合气体,再放置 一定的温度环境中培养 在划线起点 长出菌苔 在划线末端 单菌落 (b) 图33.2.平板划线培养方法 (a)平板划线的过程:1用接种针蘸取菌样;2在平板固体培养基表面划线;(b)平板 划线培养结果:在划线的起点,菌落相互重叠,在划线的末端,逐渐出现单菌落 未折前铝帽 升丁基橡胶塞 棉塞璃棒 橡胶塞 折后铝帽 塞入的橡胶塞 焦性没食子酸 湿棉球 厌氧培养物 无氧气相 固体培养基 吸氧反应 厌氧菌单菌落 图333一种厌氧菌的斜面培养法 图334 Hungate滚管技术 中的厌氧试管的剖面图 针对厌氧微生物有人采用一些专用的培养装置,如 (1) Hungate滚管技术主要原理是利用除氧铜柱来制备高纯氮,并用高纯氮驱除小环 境中的空气,使培养基的配制、分装、灭菌和储存,以及菌种的接种、培养、观察、分 离、移种和保藏等过程始终处于高度无氧的条件下,从而保证了厌氧菌的存活。用这种 方法制备的培养基称为预还原无氧灭菌培养基。将菌接种到融化的培养基中,然后将特 制的试管(见图3.34)用丁基橡胶塞严密塞住后平放,置冰浴中均匀滚动,使含菌的培 养基布满在试管的内表面,犹如好氧菌在培养基平板表面一样,最后长出许多单菌落。 (2)厌氧培养皿用于厌氧培养的培养皿有几种设计:有的利用皿盖创造了一个狭窄的 空间,加上含有还原剂的培养基,达到无氧的培养目的(例如 Brewer皿,见图33.4) 有的利用皿底有两个相互隔开的空间,其中一个放焦性没食子酸,另一个放NaOH溶液,《工业微生物学》 第三章 2 氧程度越高。 对厌氧菌培养必需创造更严格的无氧环境。一种方法是在斜面接种后，将培养管棉 塞上部截去或用火点着烧掉，用玻璃棒将管内部分的棉花压至离培养基 1cm 处，棉塞上 方再压入一含水的脱脂棉，加入 1:1 比例混合的焦性没食子酸和碳酸钠粉末，立即加上 橡胶塞。焦性没食子酸和碳酸钠在有水的情况下，缓慢作用，吸收氧气，放出 CO2，造 成无氧环境，见图 3.3.3。也可将厌氧微生物固体培养物放在真空干燥器内，用泵排出其 中的空气，并可进一步向其中充入氮气或 95%氮气和 5%二氧化碳的混合气体，再放置 一定的温度环境中培养。 (a) (b) 图 3.3.2. 平板划线培养方法 (a) 平板划线的过程：1.用接种针蘸取菌样；2. 在平板固体培养基表面划线；(b) 平板 划线培养结果：在划线的起点，菌落相互重叠，在划线的末端，逐渐出现单菌落 图 3.3.3 一种厌氧菌的斜面培养法 图.3.3.4Hungate 滚管技术 中的厌氧试管的剖面图 针对厌氧微生物有人采用一些专用的培养装置，如： （1）Hungate 滚管技术 主要原理是利用除氧铜柱来制备高纯氮，并用高纯氮驱除小环 境中的空气，使培养基的配制、分装、灭菌和储存，以及菌种的接种、培养、观察、分 离、移种和保藏等过程始终处于高度无氧的条件下，从而保证了厌氧菌的存活。用这种 方法制备的培养基称为预还原无氧灭菌培养基。将菌接种到融化的培养基中，然后将特 制的试管（见图 3.3.4）用丁基橡胶塞严密塞住后平放，置冰浴中均匀滚动，使含菌的培 养基布满在试管的内表面，犹如好氧菌在培养基平板表面一样，最后长出许多单菌落。 （2）厌氧培养皿 用于厌氧培养的培养皿有几种设计：有的利用皿盖创造了一个狭窄的 空间，加上含有还原剂的培养基，达到无氧的培养目的（例如 Brewer 皿，见图 3.3.4）； 有的利用皿底有两个相互隔开的空间，其中一个放焦性没食子酸，另一个放 NaOH 溶液