即可知道达最大反应速度一半时所需的底物浓度,此底物浓度也就是该酶的Km,Km的单 位与底物相同,均为moL(molL) (三)米氏方程中的Km与Vmax的意义 当反应速度为最大速度一半时米氏方程式可以变换如下 mX Km+S 进一步整理得Km=[S]。由此可见,Km值等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓 度 2.Km=K+l,当K2>K,即ES解离成E和S的速度大大超过分解成E和P的速 度时K3可以忽略不计此时Km值近似于ES的解离常数Ks。在这种 情况下,Km值可用来表示酶对底物的亲和力。 Km6/6=、IE][S 此时,Km值愈小,酶与底物的小灬愈大。这表示不需要很高的底物浓度便可容易地 达到最大反应速度。但K3值并非在所有酶促反应中都远小于K2,所以,此时Ks值和Kn值 的涵义不同,不能相互替代使用。 3.Km值是酶的特征性常数之一,只与酶的结构、酶所催化的底物和反应环境(如温 度、pH、离子强度)有关,与酶的浓度无关。各种酶的Km值范围很广。对于同一底物,不 同的酶有不同的Km值;多底物反应的酶对于不同底物也有不同的Km值。 4.Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度,与酶浓度呈正比。如果酶的总浓度已知 便可从Ⅴ计算酶的转换数( turnover number).例如,10°molL的碳酸酐酶溶液在一秒钟 内催化生成06moLH2CO3,则每一分钟酶可催化生成6×105个分子的H2CO3 Vmax 0.6mol/s =6×105s 动力学常数K称为酶的转换数,其定义是;当酶被底物充分饱和时,单位时间内每个酶分子(或 活性中心)催化底物转变为产物的分子数 (四)Km和Vmax值的测定:通过上述底物浓度曲线可以近似的测出Vmax和Km,但 精确度差,且费时费力。为此人们将米氏方程式进行种种变换,应用最多的是将曲线作图转 变为直线的双倒数作图法( Lineweaver- Burk plot), 以1/v对1/[S]作图,得一条直线,其斜率为Km/v,直线与y轴相交的截距为1/v, 与轴相交的一点为-1/Km(图4-14)。8 即可知道达最大反应速度一半时所需的底物浓度，此底物浓度也就是该酶的 Km，Km 的单 位与底物相同，均为 mol/L（mol/L）. (三)米氏方程中的 Km 与 Vmax 的意义 1. 当反应速度为最大速度一半时米氏方程式可以变换如下： K [ ] V [ ] 2 V x m ma max S S + = 进一步整理得 Km =[s]。由此可见，Km 值等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓 度。 2．Km = K2+K3 , 当 K2>>K3,即 ES 解离成 E 和 S 的速度大大超过分解成 E 和 P 的速 度时,K3 可以忽略不计.此时 Km值近似于 ES 的解离常数 Ks。在这种 情况下，Km值可用来表示酶对底物的亲和力。 Km= K2/ K1= 此时，Km值愈小，酶与底物的亲和力愈大。这表示不需要很高的底物浓度便可容易地 达到最大反应速度。但 K3 值并非在所有酶促反应中都远小于 K2，所以，此时 Ks 值和 Km值 的涵义不同，不能相互替代使用。 3．Km 值是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、酶所催化的底物和反应环境（如温 度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。各种酶的 Km值范围很广。对于同一底物，不 同的酶有不同的 Km值；多底物反应的酶对于不同底物也有不同的 Km值。 4．Vmax 是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度呈正比。如果酶的总浓度已知， 便可从 Vmax 计算酶的转换数（turnover number）.例如，10-6mol/L 的碳酸酐酶溶液在一秒钟 内催化生成 0.6mol/L H2CO3，则每一分钟酶可催化生成 6×105 个分子的 H2CO3。 k 5 1 6 3 6 10 10 mol/L 0.6mol/L/s [E] Vmax − = = =  s - 动力学常数 K3 称为酶的转换数，其定义是；当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子（或 活性中心）催化底物转变为产物的分子数。 （四） Km 和 Vmax 值的测定： 通过上述底物浓度曲线可以近似的测出 Vmax 和 Km，但 精确度差，且费时费力。为此人们将米氏方程式进行种种变换，应用最多的是将曲线作图转 变为直线的双倒数作图法(Lineweave- Burk plot)， 以 1／v 对 1/[S]作图，得一条直线，其斜率为 Km／v，直线与 y 轴相交的截距为 1/v， 与轴相交的一点为-1／Km(图 4-14)。 K1 [E][S] ES