实验八培养基的制备与灭菌 一、目的要求 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2 掌握培养基的配置方法， 掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代 谢类型的多样性。因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各 有差异。但 般培养基的配制程序却大致相 例如器皿的准备，培养基的配制与分装，桥 塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。 三、实验材料 L.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、Imol/L的NaOH和HC溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭茵锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养 皿、玻璃漏斗等。 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 (一玻璃器皿的洗涤和包装 上.玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的 水中 毛刷刷洗 然后用自来水及蒸馏水冲净 。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自 来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2.灭菌前玻璃器皿的包装 ()培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者 将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才 (2)移液管的包扎：在移 液管的上端塞入一小 段棉花（勿用脱脂棉）， 它的作用是避免外界 及口中杂南进入管内 并防止菌液等吸入口 中。塞入此小段棉花应 距管口约0.5cm左右. 棉花自身长度约 11.5cm。塞棉花时.可 广板 用一外围拉直的曲别 针、将少许棉花塞入管 图81移液管的包扎 口内。棉花要塞得松紧 适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5m左右的长纸条，然后将己塞好棉花的移液管尖端放在长家 报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管 实验八 培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置方法。 3. 掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。 二、基本原理 正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代 谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各 有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉 塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。 三、实验材料 1. 药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L 的 NaOH 和 HCl 溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养 皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、pH 试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的 水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自 来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者 将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才 能使用。 （2）移液管的包扎：在移 液管的上端塞入一小 段棉花(勿用脱脂棉)， 它的作用是避免外界 及口中杂菌进入管内， 并防止菌液等吸入口 中。塞入此小段棉花应 距管口约 0.5cm 左右， 棉花自身长度约 1~1.5cm。塞棉花时．可 用一外围拉直的曲别 针、将少许棉花塞入管 口内。棉花要塞得松紧 适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约 5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条 报纸的一端，约成 45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管 图 8-1 移液管的包扎