试剂 褪黑素（对照品）：甲醇（色谱纯）：冰乙酸溶液(0.2%)吸取1.00mL 冰乙酸，稀释至500mL纯水中；褪黑素标准应用液(1mgmL) 【实验步骤】 样品前处理 (1)样品提取 (1)用研钵将片剂或胶囊研成粉未并混合均匀。准确称取0.2g 于10mL刻度试管中，加乙醇溶解，用超声波提取仪提取20min,离 心5分钟(3500rmin),上清液转入25mL的容量瓶中；残渣加10mL 甲醇，超声提取20min,离心5分钟(3500r/min,上清液并入25mL 的容量瓶中；以流动相定容，过滤备用(0.45μm的有机系滤膜)。 (2)参考色谱条件： C18色谱柱(25cm×0.46cm,5um; 流动相：甲醇0.2%冰乙酸溶液(50/50)：流速：1.0mL/min,检测波长 222nm:进样量：20uL。 标准曲线绘制及样品测定 (1)定性分析：根据褪黑素标准溶液的出峰时间定性分析； (2)标准曲线的配制及测定：取标准溶液0.10,0.20,0.60,0.80 1.00mL于10mL的容量瓶中，以流动相定容。取20uL进样，得标准 溶液色谱图，以峰面积对浓度进行线性回归，求回归方程。 (3)样品测定：取20L样品液进样，得样品色谱图，将峰面积代 入回归方程，计算测定液中褪黑素的浓度