荧光显微镜( fluorescence microscope)是以紫外线为光源来激发生物标本中 的荧光物质,产生能观察到的各种颜色荧光的一种光学显微镜,它是研究特异蛋 白质等生物大分子定性定位的最有力的工具之一(图1-1-1)。 将细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光称自发荧光。另一些细胞 内成分经紫外线照射后不发荧光,但若用荧光染料进行染色后,就能在荧光显微 镜下观察到荧光,这种荧光称为诱发荧光。目前可供选择的荧光染料很多,如 DAPI(联脒基苯吲哚)可以染DNA:吖啶橙( acridine orange)可以使DNA、 RAN上色;碘化丙啶( propidium iod ide)可以使DNA着色; Hoechest3325 Hoechest3342可以将染色体着色。将荧光染料和抗体共价结合,被标记的抗体 和相应的抗原结合形成抗原抗体复合物,经激光激发后发射荧光,从而可以观察 了解抗原在细胞内的分布。 图-1-荧光显微镜原理 四、激光共焦点扫描显微镜技术 激光共焦点扫描显微镜( laser scanning confocal microscope)是20世纪80 年代出现的一种新型的显微镜,它是在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装 置,以单色激光作为光源,使样品被激发出荧光,利用计算机进行图像处理,从 而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像(图1-1-2)。这样形成的图像异常清 晰,其分辨率比普通荧光显微镜提髙14~1.7倍。图中A显示激光束(光源)经 双色镜反射后,通过物镜汇聚到样品某一焦点;B则表示从焦点发射的荧光(样 品一般经免疫荧光标记)经透镜汇聚成像再被检出;C:通过样品其他部位的激 光即激光发出的荧光不会聚焦成像,因而检测器不能检出所谓共焦点是指物镜和 聚光镜同时聚焦到同一个小点,即它们互相共焦点 图1-1-2激光共焦点扫描显微镜的原理图 第二节电子显微镜技术荧光显微镜（fluorescence microscope）是以紫外线为光源来激发生物标本中 的荧光物质，产生能观察到的各种颜色荧光的一种光学显微镜，它是研究特异蛋 白质等生物大分子定性定位的最有力的工具之一（图 1-1-1）。 将细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光称自发荧光。另一些细胞 内成分经紫外线照射后不发荧光，但若用荧光染料进行染色后，就能在荧光显微 镜下观察到荧光，这种荧光称为诱发荧光。目前可供选择的荧光染料很多，如 DAPI（联脒基苯吲哚）可以染 DNA；吖啶橙（acridine orange）可以使 DNA、 RAN 上色；碘化丙啶（propidium iodide）可以使 DNA 着色；Hoechest33258、 Hoechest33342 可以将染色体着色。将荧光染料和抗体共价结合，被标记的抗体 和相应的抗原结合形成抗原抗体复合物，经激光激发后发射荧光，从而可以观察 了解抗原在细胞内的分布。 图 1-1-1 荧光显微镜原理 四、激光共焦点扫描显微镜技术 激光共焦点扫描显微镜（laser scanning confocal microscope）是 20 世纪 80 年代出现的一种新型的显微镜，它是在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装 置，以单色激光作为光源，使样品被激发出荧光，利用计算机进行图像处理，从 而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像（图 1-1-2）。这样形成的图像异常清 晰，其分辨率比普通荧光显微镜提高 1.4~1.7 倍。图中 A 显示激光束（光源）经 双色镜反射后，通过物镜汇聚到样品某一焦点；B 则表示从焦点发射的荧光（样 品一般经免疫荧光标记）经透镜汇聚成像再被检出；C：通过样品其他部位的激 光即激光发出的荧光不会聚焦成像，因而检测器不能检出所谓共焦点是指物镜和 聚光镜同时聚焦到同一个小点，即它们互相共焦点。 图 1-1-2 激光共焦点扫描显微镜的原理图 第二节 电子显微镜技术