段的长度确定。理论上讲,1kb 以内的片段,延伸1分钟足够了 2.2.3PCR最适合条件的 选择 提高PCR的灵敏度及特 异性是PCR能否成功的关键 提高特异性的关键是:① 退火温度应尽可能高;②引物 浓度应尽可能低:③热启动 ( hot start):在第一次DNA变性 后加入1aq酶,以避免第一次 循环前的引物错配所产生的非 特异扩增和引物二联体 2.2.4PCR产物的分析方 法 1、琼脂糖凝胶电泳:判断 扩增片段的存在及大小。 2、点杂交:更适合于扩增 产物为多条带时的测定 3、 Southern杂交:用于鉴 定扩增产物的大小和特异性其 检测敏感度可达10ng 4、酶切分析利用内切酶特 有的酶切点这一特性,达到产物 鉴定目的 5、 PCR-ELISA法:修饰 个引物5端,使其带有便于 PCR产物固定的功能基团,而 通过修饰另一引物5端使其具 有便于酶联显色检测的功能基 团,达到酶联显色段的长度确定。理论上讲，1kb 以内的片段，延伸 1 分钟足够了 2.2.3 PCR 最适合条件的 选择 提高 PCR 的灵敏度及特 异性是 PCR 能否成功的关键 提高特异性的关键是：① 退火温度应尽可能高；② 引物 浓度应尽可能低；③ 热启动 (hot start)：在第一次 DNA 变性 后加入 Taq 酶，以避免第一次 循环前的引物错配所产生的非 特异扩增和引物二联体 2.2.4 PCR 产物的分析方 法 1、琼脂糖凝胶电泳：判断 扩增片段的存在及大小。 2、点杂交：更适合于扩增 产物为多条带时的测定。 3、Southern 杂交：用于鉴 定扩增产物的大小和特异性其 检测敏感度可达 10ng。 4、酶切分析利用内切酶特 有的酶切点这一特性，达到产物 鉴定目的。 5、PCR-ELISA 法：修饰 一个引物 5’端，使其带有便于 PCR 产物固定的功能基团，而 通过修饰另一引物 5’端使其具 有便于酶联显色检测的功能基 团，达到酶联显色