4.DNA连接酶(DNA ligase】 DNA连接酶(DNA ligase)的作用是催化双链DNA中的切口处的相邻5'磷酸基与 3'-羟基之间形成磷酸酯键。但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来。 大肠杆菌的DNA连接酶要求NAD提供能量，产物是AMP和烟酰胺单核苷酸（图 10-9)。而在高等生物中，则要求ATP提供能量，产物是AMP和焦宽酸。大肠杆菌的DNA 连接酶是分子量为75000的多肽链。在哺乳动物细胞中发现至少有两种连接酶，分别称 为连接酶I和Ⅱ。连 醇I的分子量为200000，连接酶Ⅱ为8500。 连接酶I主要在 在繁殖的细胞中起作用。连接酶Ⅱ则在停止分裂的细胞中起作用。DNA连接酶在DNA 复制、修复、重组中均起重要作用。 E+ATp(成NAD+)===EAMD+Pp.(或NMN E-AMP+.5'DNA= E+AMP.-5'-DNA DNA-3-OH+AMP-@-5'-I DNA-3 -0.5'-DNA+AM DNA-3'-OH+-5'-DNA+ATP (B NAD)-DNA-3'-0-5'-DNA+AMP+PP,NMN) 图1O-9DNA连接酶催化反应的机理 5.拓扑异构酶 生物体内DNA分子通常处于超螺旋状态 而DNA的许多生物功能需要解开双链才 能进行。拓扑异构酶(topoisomerase)就是催化DNA的拓扑连环数发生变化的酶，它可 分为拓扑异构酶I和拓扑异构酶Ⅱ（也称为旋转酶，gyrase)。I型酶可使双链DNA分子 中的一条链发生断裂和再连接，反应不需要提供能量，它们主要集中在活性转录区，同 转录有关。Ⅱ型酶能使DNA两条链同时发生断裂和再连接，当它引入负超螺旋时需要由 ATP经供能量 个 石扑异构酶Ⅱ的分 子1min可引入100个负超螺旋。它们主要分布 染色质骨架蛋白和核基质部位，同复制有关。拓扑异构酶】可减少负超螺旋：拓扑异构 酶Ⅱ可引入负超螺旋，它们协同作用控制着DNA的拓扑结构。拓扑异构酶在重组、修复 和DNA的其它转变方面起者重要的作用。 解螺旋酶(helic. SC)类能通过水解ATP将DNA的两条链打开。AP水解活力要有 单链DNA存在。大肠杆菌中的rp蛋白（©p基因的产物）就是这样一种醇。由分子量 为65000的一条多肽链组成。每解开一对碱基需要水解2个ATP分子。 7.其它蛋白因子 (1)单链结合蛋白(ingl strand DNA-bindin otein,SSB),它的功能是稳定已被 解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸南 (2)引发前体(preprimosome),它是由6种蛋白质即dnaB、dnmC、n、n'、n和 i组成。引发前体再与RNA引物合成酶（引发酶）结合，组装成引发体(primosome)。 引发体结合到随后链的模板上，具有识别合成起始位点的功能，可以沿模板链5一3'方 向移动，移动到一定位置上即可以引发RNA引物的合成。 (三)DNA的复制过程 DNA的复制按一定的规律进行，双螺旋DNA是边解开边合成新链的。复制从特定 302 302 4． DNA 连接酶（DNA ligase） DNA 连接酶（DNA ligase）的作用是催化双链 DNA 中的切口处的相邻 5′-磷酸基与 3′-羟基之间形成磷酸酯键。但是它不能将两条游离的 DNA 单链连接起来。 大肠杆菌的 DNA 连接酶要求 NAD +提供能量，产物是 AMP 和烟酰胺单核苷酸（图 10-9）。而在高等生物中，则要求 ATP 提供能量，产物是 AMP 和焦磷酸。大肠杆菌的 DNA 连接酶是分子量为 75 000 的多肽链。在哺乳动物细胞中发现至少有两种连接酶，分别称 为连接酶Ⅰ和Ⅱ。连接酶Ⅰ的分子量为 200 000，连接酶Ⅱ为 85 000。连接酶Ⅰ主要在正 在繁殖的细胞中起作用。连接酶Ⅱ则在停止分裂的细胞中起作用。DNA 连接酶在 DNA 复制、修复、重组中均起重要作用。 E+ATP（或 NAD +）====E AMP+PPi（或 NMN） E-AMP+○P -5′-DNA====E+AMP-○P -5′-DNA DNA-3′-OH+AMP-○P -5′-DNA====DNA-3′-O-○P -5′-DNA+AMP DNA-3′-OH+○P -5′-DNA+ATP（或 NAD +）=== DNA-3′-O-○P -5′-DNA+AMP+PPi（或 NMN） 图 10-9 DNA 连接酶催化反应的机理 5． 拓扑异构酶 生物体内 DNA 分子通常处于超螺旋状态，而 DNA 的许多生物功能需要解开双链才 能进行。拓扑异构酶（topoisomerase）就是催化 DNA 的拓扑连环数发生变化的酶，它可 分为拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶Ⅱ（也称为旋转酶，gyrase）。Ⅰ型酶可使双链 DNA 分子 中的一条链发生断裂和再连接，反应不需要提供能量，它们主要集中在活性转录区，同 转录有关。Ⅱ型酶能使 DNA 两条链同时发生断裂和再连接，当它引入负超螺旋时需要由 ATP 提供能量。一个拓扑异构酶Ⅱ的分子 1min 可引入 100 个负超螺旋。它们主要分布在 染色质骨架蛋白和核基质部位，同复制有关。拓扑异构酶Ⅰ可减少负超螺旋；拓扑异构 酶Ⅱ可引入负超螺旋，它们协同作用控制着 DNA 的拓扑结构。拓扑异构酶在重组、修复 和 DNA 的其它转变方面起着重要的作用。 6． 解螺旋酶（helicase） 解螺旋酶（helicase）类能通过水解 ATP 将 DNA 的两条链打开。ATP 水解活力要有 单链 DNA 存在。大肠杆菌中的 rep 蛋白（rep 基因的产物）就是这样一种酶。由分子量 为 65 000 的一条多肽链组成。每解开一对碱基需要水解 2 个 ATP 分子。 7． 其它蛋白因子 （1）单链结合蛋白（single strand DNA-binding protein, SSB），它的功能是稳定已被 解开的 DNA 单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 （2）引发前体（preprimosome），它是由 6 种蛋白质即 dna B、dna C、n、n′、n″和 i 组成。引发前体再与 RNA 引物合成酶（引发酶）结合，组装成引发体（primosome）。 引发体结合到随后链的模板上，具有识别合成起始位点的功能，可以沿模板链 5′→3′方 向移动，移动到一定位置上即可以引发 RNA 引物的合成。 （三）DNA 的复制过程 DNA 的复制按一定的规律进行，双螺旋 DNA 是边解开边合成新链的。复制从特定