分裂的细胞都停止在中期,再经低渗处理、固定、染色,获取的中期分裂相细胞。 染色体标本,可在显微镜下拍照进行核型分析,或用计算机进行图像分析 、实验过程 (一)器械 超净工作台、酒精灯、5ml无菌注射器、5号针头、10ml培养瓶、橡皮塞、 75%酒精棉球、水平式离心机、定时钟、试管架、量筒、10ml刻度离心管、冰玻 片,毛细滴管、恒温水浴箱、恒温培养箱、托盘天平、光学显微镜。 (二)试剂 RPMI640、小牛血清、肝素(500U0m)、秋水仙素(5ugml)、植物血凝素 (PHA)、固定液(甲醇:冰乙酸为3:1,现用现配)、0075 moL L-KCI低渗液 Giemsa染液、pH68磷酸缓冲液、5% NaHco3 、主要步骤 (一)采血与接种 用一次性5m注射器取500U/ml的肝素0.203ml湿润针筒后,然后将多余的 肝素排除。常规消毒被检者肘部皮肤,从肘部静脉采血2ml。转动针筒以混匀肝 素;随后在超净工作台中将血液滴入盛有5m培养液(4 mI rPmi le640、lml小牛 血清,02 mI Pha,用5%的NaCO3调pH至70~74)的培养瓶内,每瓶0.3~ 0.5ml(7号针头约20滴),盖上橡皮塞,轻轻摇动以混匀 (二)培养 1.将培养瓶放在37℃恒温箱内培养72h。 2.在终止培养前2h,将5μg/ml的秋水仙素1~2滴(5号针头)加入培养瓶 内(终浓度为007μg/ml),轻轻摇匀.放回温箱内,继续培养2h。 (三)染色体标本的制备(胰蛋白酶法) 收获细胞用吸管充分吹打瓶壁,吸取培养物移入10ml刻度离心管内, 平衡后放入离心机内,离心8~10min(1000r/min),弃上清液。 2.低渗处理加8nl预温(37C)的0.075 molL-IKCI低渗液,用吸管打匀 使细胞悬浮于低渗液中,放在37℃恒温水浴锅中,静置15~20min,使白细胞膨 胀,染色体分散(精确的低渗时间应自行摸索)。 3固定 (1)预固定:低渗处理完成后,加入现配制固定液1ml,吹打均匀。1000r/min2 分裂的细胞都停止在中期，再经低渗处理、固定、染色，获取的中期分裂相细胞。 染色体标本，可在显微镜下拍照进行核型分析，或用计算机进行图像分析。 二、实验过程 （一）器械 超净工作台、酒精灯、5m1 无菌注射器、5 号针头、10ml 培养瓶、橡皮塞、 75％酒精棉球、水平式离心机、定时钟、试管架、量筒、10ml 刻度离心管、冰玻 片，毛细滴管、恒温水浴箱、恒温培养箱、托盘天平、光学显微镜。 （二）试剂 RPMI1640、小牛血清、肝素(500U/ml)、秋水仙素(5μg/ml)、植物血凝素 （PHA）、固定液（甲醇：冰乙酸为 3∶1，现用现配）、0.075mol.L-1KCI 低渗液、 Giemsa 染液、pH6.8 磷酸缓冲液、5％NaHCO3。 三、主要步骤 （一）采血与接种 用一次性 5ml 注射器取 500U/ml 的肝素 0.2-0.3ml 湿润针筒后，然后将多余的 肝素排除。常规消毒被检者肘部皮肤，从肘部静脉采血 2ml。转动针筒以混匀肝 素；随后在超净工作台中将血液滴入盛有 5ml 培养液（4ml RPMI l640、lml 小牛 血清，0.2ml PHA，用 5％的 NaHCO3 调 pH 至 7.0～7.4）的培养瓶内，每瓶 0.3～ 0.5ml（7 号针头约 20 滴），盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。 （二）培养 1. 将培养瓶放在 37℃恒温箱内培养 72h。 2. 在终止培养前 2h，将 5μg/ml 的秋水仙素 1～2 滴（5 号针头）加入培养瓶 内（终浓度为 0.07μg/ml），轻轻摇匀．放回温箱内，继续培养 2h。 （三）染色体标本的制备（胰蛋白酶法） 1. 收获细胞 用吸管充分吹打瓶壁，吸取培养物移入 10ml 刻度离心管内， 平衡后放入离心机内，离心 8～10min（1000r/min），弃上清液。 2. 低渗处理 加 8ml 预温（370C）的 0.075mol.L-1KCI 低渗液，用吸管打匀 使细胞悬浮于低渗液中，放在 37℃恒温水浴锅中，静置 15～20min，使白细胞膨 胀，染色体分散（精确的低渗时间应自行摸索）。 3.固定 （1）预固定：低渗处理完成后，加入现配制固定液 1ml，吹打均匀。1000 r/min