61 和溶液，搅拌均匀，用 70℃左右的水约 300ml，将样品全部转移入 500ml 容量 瓶中，置沸水浴中加热 15min 后，取出冷却至室温，然后边转动边加入 5ml 亚 铁氰化钾溶液，摇匀后再加入 5ml 乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混 匀，放置 0.5h，除去上层脂肪后将清液用滤纸过滤，弃去初滤液约 30ml，收集 滤液备用。 2．测定 吸取 40ml 上述滤液于 50ml 比色管中，另吸取 0、0.20、0.40、0.60、0.80、 1.00、1.50、2.00、2.50ml 亚硝酸钠标准使用液（相当于 0、1、2、3、4、5、 7.5、10、12.5μg 亚硝酸钠），分别置于 50ml 比色管中。在样品管和标准系列 中分别加入 2ml4g/L 对氨基苯磺酸溶液，混匀后静置 3－5min，再分别加入 1ml2g/L 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀后静置 15min，然后以 2cm 比色 杯，用零管调节零点，于 538nm 波长下测定吸光度，并绘制标准曲线比较定量。 五、结果计算 X＝ 2 1 V V 1000    m A （3－4） 式中：X――样品中亚硝酸盐的含量，g/kg； m――样品质量，g； A――测定用样液中亚硝酸钠的含量，μg； V1――样品处理液总体积，ml； V2――比色时吸取样品处理液体积，ml。 注意事项 1．显色时的 PH 值以 1.9－3.0 为宜，显色后稳定性与室温有关，一般认为 显色温度为 15－30℃，在 20－30min 内比色为好。 2．当样品中亚硝酸盐含量高时，过量的亚硝酸盐可以将生成偶氮化合物氧 化，使红色消失，对结果产生影响，可以采取先放入试剂，然后再滴加试液的 方法，防止氧化。 实训五、蘑菇罐头中亚硫酸盐的测定（盐酸副玫瑰苯胺法） 一、目的 1、学习盐酸副玫瑰苯胺法的原理及操作要点。 2、熟悉分光光度法的基本操作技术。 二、原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应吸收后，生成稳定的化合物，再与甲醛和盐酸副 玫瑰苯胺作用，经分子重排后生成紫红色络合物，颜色的深浅与二氧化硫浓度 成正比，在 550nm 波长测定其吸光度，与标准系列比较定量。 三、试剂 1．四氯汞钠吸收液：称取 27.2g 氯化高汞及 11.9g 氯化钠，溶于水中并稀61 和溶液，搅拌均匀，用 70℃左右的水约 300ml，将样品全部转移入 500ml 容量 瓶中，置沸水浴中加热 15min 后，取出冷却至室温，然后边转动边加入 5ml 亚 铁氰化钾溶液，摇匀后再加入 5ml 乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混 匀，放置 0.5h，除去上层脂肪后将清液用滤纸过滤，弃去初滤液约 30ml，收集 滤液备用。 2．测定 吸取 40ml 上述滤液于 50ml 比色管中，另吸取 0、0.20、0.40、0.60、0.80、 1.00、1.50、2.00、2.50ml 亚硝酸钠标准使用液（相当于 0、1、2、3、4、5、 7.5、10、12.5μg 亚硝酸钠），分别置于 50ml 比色管中。在样品管和标准系列 中分别加入 2ml4g/L 对氨基苯磺酸溶液，混匀后静置 3－5min，再分别加入 1ml2g/L 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀后静置 15min，然后以 2cm 比色 杯，用零管调节零点，于 538nm 波长下测定吸光度，并绘制标准曲线比较定量。 五、结果计算 X＝ 2 1 V V 1000    m A （3－4） 式中：X――样品中亚硝酸盐的含量，g/kg； m――样品质量，g； A――测定用样液中亚硝酸钠的含量，μg； V1――样品处理液总体积，ml； V2――比色时吸取样品处理液体积，ml。 注意事项 1．显色时的 PH 值以 1.9－3.0 为宜，显色后稳定性与室温有关，一般认为 显色温度为 15－30℃，在 20－30min 内比色为好。 2．当样品中亚硝酸盐含量高时，过量的亚硝酸盐可以将生成偶氮化合物氧 化，使红色消失，对结果产生影响，可以采取先放入试剂，然后再滴加试液的 方法，防止氧化。 实训五、蘑菇罐头中亚硫酸盐的测定（盐酸副玫瑰苯胺法） 一、目的 1、学习盐酸副玫瑰苯胺法的原理及操作要点。 2、熟悉分光光度法的基本操作技术。 二、原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应吸收后，生成稳定的化合物，再与甲醛和盐酸副 玫瑰苯胺作用，经分子重排后生成紫红色络合物，颜色的深浅与二氧化硫浓度 成正比，在 550nm 波长测定其吸光度，与标准系列比较定量。 三、试剂 1．四氯汞钠吸收液：称取 27.2g 氯化高汞及 11.9g 氯化钠，溶于水中并稀