第六章基因组DNA的提取 第一节概述 基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、 Southern杂交(包括RFLP) 及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性可以将其与细胞器或质粒等 小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀 形成纤维状絮团飘浮其中,可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状 沉淀附于壁上及底部,从而达到提取的目的。在提取过程中染色体会发生机械断 裂产生大小不同的片段因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如 尽量减少酚氯仿抽提、混匀过程要轻缓,以保证得到较长的DNA。一般来说构 建基因组文库,初始DNA长度必须在100kb以上否则酶切后两边都带合适末端 的有效片段很少。而进行RFLP和PCR分析,DNA长度可短至50kb,在该长度 以上可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下并可保证包含PCR所扩增的片段 (一般2kb以下)。 不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取方法有所不同;不 同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR 反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时,应考 虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗(禾本科)、李(苹果川叶子、动物肌肉组织和大肠杆菌培养 物为材料学习基因组DNA提取的一般方法 第二节从植物组织提取基因组DNA 、材料 水稻幼苗或其它禾本科植物,李(苹果)幼嫩叶子。 设备第六章 基因组 DNA 的提取 第一节 概 述 基因组 DNA 的提取通常用于构建基因组文库、Southern 杂交(包括 RFLP) 及 PCR 分离基因等。利用基因组 DNA 较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等 小分子 DNA 分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子 DNA 即沉淀 形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子 DNA 则只形成颗粒状 沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断 裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组 DNA 时应尽量在温和的条件下操作,如 尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的 DNA。一般来说,构 建基因组文库, 初始 DNA 长度必须在 100kb 以上,否则酶切后两边都带合适末端 的有效片段很少。而进行 RFLP 和 PCR 分析, DNA 长度可短至 50kb, 在该长度 以上,可保证酶切后产生 RFLP 片段(20kb 以下),并可保证包含 PCR 所扩增的片段 (一般 2kb 以下)。 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组 DNA 的提取方法有所不同; 不 同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的 DNA 时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的 DNA 大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR 反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组 DNA 时, 应考 虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗(禾本科)、李(苹果)叶子、动物肌肉组织和大肠杆菌培养 物为材料,学习基因组 DNA 提取的一般方法。 第二节 从植物组织提取基因组 DNA 一、材料 水稻幼苗或其它禾本科植物，李（苹果）幼嫩叶子。 二、设备