(1)亚单位疫苗的编码基因作为核酸疫苗的目的基因。病原体的蛋白质、 糖蛋白或脂蛋白分子是病原体的亚单位成分。将这类亚单位分子纯化出来并将编 码这类分子的基因与真核基因表达质粒重组是核酸疫苗研制的有效途径。 (2)将多肽合成疫苗的核算推导序列作为核酸疫苗的目的基因。 (3)从病原体亚单位成分中筛选保护性抗原及其编码基因。 目的基因的制备方法又cDNA文库法（用抗血清做探针从文库中筛选目的基 因)、PCR法与化学合成已知序列呃目的基因、基因文库法三种。此处就不具体 说明了。【] 2.载体的选择 载体分为克隆载体和表达载体两类。常用的克隆载体有质粒、噬菌体、黏粒 三种。表达载体又原核与真核之分，其中原核表达载体主要是大肠杆菌、枯草芽 孢杆菌、链霉菌三种。真核表达载体有酵母菌细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞三 种。[2] 对核酸疫苗而言，表达载体必须是哺乳动物细胞。[] 3.抗原基因与载体的链接 根据所获得的目的基因和选择的载体不同，选择不同的限制性内切酶进行酶 切并连接。 4.重组DNA分子导入哺乳动物细胞 目前常用的方法有磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、脂质体介导的基因转移法三 种。【2] 5.重主子的筛选与鉴定 可利用抗性筛选和蓝白斑法共同鉴定。 6.体外哺乳动物细胞中抗原表达的检测 分蛋白水平监测和核酸水平检测两种。蛋白水平检测方法有免疫沉淀法、 Western杂交法、ELISA法三种，核算水平检测方法有Northern杂交法、逆转录 PCR法两种。] 7疫苗接种方式与部位的确定 核酸疫苗的免疫接种方式又四种：肌内注射法，基因枪注射法，黏膜表层涂 布法，静脉注射法。 8动物模型的选择 根据不同疫苗可以选择不同动物模型。常见的有小鼠模型、兔子模型。禽流 感核酸疫苗常用禽类模型。但由于核酸疫苗在大型动物和小型动物间有细微差 别，也有使用大型动物为模型的选择方式。] 9.免疫接种剂量、免疫周期和免疫次数的确定 核酸疫苗的接种剂量取决于能够诱发免疫应答反应的最低剂量。（1）亚单位疫苗的编码基因作为核酸疫苗的目的基因。病原体的蛋白质、 糖蛋白或脂蛋白分子是病原体的亚单位成分。将这类亚单位分子纯化出来并将编 码这类分子的基因与真核基因表达质粒重组是核酸疫苗研制的有效途径。 （2）将多肽合成疫苗的核算推导序列作为核酸疫苗的目的基因。 （3）从病原体亚单位成分中筛选保护性抗原及其编码基因。 目的基因的制备方法又 cDNA 文库法（用抗血清做探针从文库中筛选目的基 因）、PCR 法与化学合成已知序列呃目的基因、基因文库法三种。此处就不具体 说明了。 ［２］ 2.载体的选择 载体分为克隆载体和表达载体两类。常用的克隆载体有质粒、噬菌体、黏粒 三种。表达载体又原核与真核之分，其中原核表达载体主要是大肠杆菌、枯草芽 孢杆菌、链霉菌三种。真核表达载体有酵母菌细胞、哺乳动物细胞、昆虫细胞三 种。［２］ 对核酸疫苗而言，表达载体必须是哺乳动物细胞。 ［２］ 3.抗原基因与载体的链接 根据所获得的目的基因和选择的载体不同，选择不同的限制性内切酶进行酶 切并连接。 4.重组 DNA 分子导入哺乳动物细胞 目前常用的方法有磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、脂质体介导的基因转移法三 种。 ［２］ 5.重主子的筛选与鉴定 可利用抗性筛选和蓝白斑法共同鉴定。 6.体外哺乳动物细胞中抗原表达的检测 分蛋白水平监测和核酸水平检测两种。蛋白水平检测方法有免疫沉淀法、 Western 杂交法、ELISA 法三种，核算水平检测方法有 Northern 杂交法、逆转录 PCR 法两种。 ［２］ 7.疫苗接种方式与部位的确定 核酸疫苗的免疫接种方式又四种：肌内注射法，基因枪注射法，黏膜表层涂 布法，静脉注射法。 8.动物模型的选择 根据不同疫苗可以选择不同动物模型。常见的有小鼠模型、兔子模型。禽流 感核酸疫苗常用禽类模型。但由于核酸疫苗在大型动物和小型动物间有细微差 别，也有使用大型动物为模型的选择方式。 ［７］ 9.免疫接种剂量、免疫周期和免疫次数的确定 核酸疫苗的接种剂量取决于能够诱发免疫应答反应的最低剂量