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第三节 沉淀法 沉淀法是最古老的分离和纯化生物物质的方法。由于其浓缩作用常大于纯化作 用,因而沉淀法通常作为初步分离的一种方法,用于从去除了菌体或细胞碎片的发 酵液中沉淀出生物物质,然后再利用色层分离等方法进一步提高其纯度。 沉淀法由于成本低、收率高(不会使蛋白质等大分子失活)、浓缩倍数高和操作 简单等优点,是下游加工过程中应用广泛的值得注意的方法。 根据所加入的沉淀剂的不同,沉淀法可以分为:盐析法;等电点沉淀法;有机 溶剂沉淀法;非离子型聚合物沉淀法;聚电解质沉淀法;高价金属离子沉淀法。 一、盐析法 1,盐析的定义 在蛋白质溶液中加入中性盐使其沉淀析出的过程。 2,机理 通过破坏蛋白质分子表面水膜或中和蛋白质分子表面水膜使蛋白质凝聚沉淀。 3,盐析法的优点 成本低,不需要什么特别昂贵的设备;操作简单,安全;对许多生物活性物质 具有稳定作用。 4,盐析法的缺点 沉淀物中含有大量的盐析剂。 5,盐析用中性盐的选择 (1)常用的中性盐 常用的中性盐有 MgSO4、(NH4)2SO4、Na2SO4、NaH2PO4。 (2)选择中性盐应注意的问题 使酶沉淀完全、收率高;且有利于酶的提纯,而本身又易去除。对酶无毒性, 应用不受影响。价格低廉。废水处理容易。 6,盐析剂用量的确定
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