其中部分介绍如下: ⚫ 盐析:不同糖在不同盐浓度中具有不同溶解度而逐步析出,如 NaCl,KCl,(NH4) 2SO4 等,后者最佳。 ⚫ 金属络合法:有些多糖能与铜、钙、钡等络合而沉淀,得到纯化物应该是盐类。 ⚫ 纤维素柱层析:多糖混合物用 4 倍体积乙醇全部沉淀于惰性多孔的纤维素柱上面, 然后用由高到低的不同浓度的乙醇洗脱,则不同多糖按小分子组分到大分子组分 的顺序被洗脱出来。 上述各种纯化方法可以灵活、交替使用,以求获得单组分的样品。 (二)有了纯化的单组分的糖,我们可以研究组分中单糖的组成,常用的方法有: Δ、纸层析 展层剂常用的是: 正丁醇:乙酸:水 为 4:1:5,用上层。 该展层剂可把葡萄糖,半乳糖,甘露糖,木糖,L-岩藻糖,葡萄糖醛酸,氨基葡 萄糖及氨基半乳糖依 迁移率的不同而分布在滤纸的不同的位置,而同时用已知单糖点样,层析为参比,即 可分析出某组分的糖 组成。(示范操作过程及结果分析,今后我们会做这方面实验。) Δ、薄层层析法(thin layer chromatography,TLC)。 常用的为硅胶 G(相当于滤纸);展层剂可采用上。 Δ、气相层析(气相色谱) 流动相——惰性气体,如 CO2,N2 等。 固定相——担体颗粒表面所包裹的一种高沸点有机化合物。 塔板理论。 Δ、HPLC 在液、固相中分配时,与固定相亲和较弱的组分就快速通过层析柱而被记录或收 集,反之较后被记录。 前两法可用显色法检测。 Δ、苯胺-二苯胺显色剂:80℃、10min , 醛糖显蓝、蓝紫色或蓝绿色,酮糖呈棕色, 检出限量为 10ug. Δ、苯胺-邻苯二甲酸显色剂:105℃、5-10min,戊糖显鲜红色,巳醛糖及糖醛酸为棕 色,在紫外光下有荧光, 而一般戊糖则无荧光,可用来区别戊糖及巳糖,灵敏度为 1ug.氨基葡萄糖呈浅棕斑点, 紫外下呈黄绿色荧光。其中部分介绍如下: ⚫ 盐析:不同糖在不同盐浓度中具有不同溶解度而逐步析出,如 NaCl,KCl,(NH4) 2SO4 等,后者最佳。 ⚫ 金属络合法:有些多糖能与铜、钙、钡等络合而沉淀,得到纯化物应该是盐类。 ⚫ 纤维素柱层析:多糖混合物用 4 倍体积乙醇全部沉淀于惰性多孔的纤维素柱上面, 然后用由高到低的不同浓度的乙醇洗脱,则不同多糖按小分子组分到大分子组分 的顺序被洗脱出来。 上述各种纯化方法可以灵活、交替使用,以求获得单组分的样品。 (二)有了纯化的单组分的糖,我们可以研究组分中单糖的组成,常用的方法有: Δ、纸层析 展层剂常用的是: 正丁醇:乙酸:水 为 4:1:5,用上层。 该展层剂可把葡萄糖,半乳糖,甘露糖,木糖,L-岩藻糖,葡萄糖醛酸,氨基葡 萄糖及氨基半乳糖依 迁移率的不同而分布在滤纸的不同的位置,而同时用已知单糖点样,层析为参比,即 可分析出某组分的糖 组成。(示范操作过程及结果分析,今后我们会做这方面实验。) Δ、薄层层析法(thin layer chromatography,TLC)。 常用的为硅胶 G(相当于滤纸);展层剂可采用上。 Δ、气相层析(气相色谱) 流动相——惰性气体,如 CO2,N2 等。 固定相——担体颗粒表面所包裹的一种高沸点有机化合物。 塔板理论。 Δ、HPLC 在液、固相中分配时,与固定相亲和较弱的组分就快速通过层析柱而被记录或收 集,反之较后被记录。 前两法可用显色法检测。 Δ、苯胺-二苯胺显色剂:80℃、10min , 醛糖显蓝、蓝紫色或蓝绿色,酮糖呈棕色, 检出限量为 10ug. Δ、苯胺-邻苯二甲酸显色剂:105℃、5-10min,戊糖显鲜红色,巳醛糖及糖醛酸为棕 色,在紫外光下有荧光, 而一般戊糖则无荧光,可用来区别戊糖及巳糖,灵敏度为 1ug.氨基葡萄糖呈浅棕斑点, 紫外下呈黄绿色荧光