游离巯基间形成共价键,精子核成熟。这样的成熟精子遇酸能维持双链结构的稳 定。而对于受到损伤的不成熟精子,其精核蛋白中不具备二硫键,形成松散结构 的染色质,DNA在酸的作用下则会变性成单链 吖啶橙( Acridine orange, AO)可与双链DNA结合呈单 SCSAB-Acridine 体形式发出绿色荧光,与单 Orange Stained DNA 链DNA结合呈聚合物形式发 出红色荧光。 红荧光在总荧光中所占 至苏≤z 的比例反映了精子染色质结 构的缩合水平,可通过各计算 机界面流式细胞仪来评价。流 式细胞仪能准确测量每一个 精子发出的荧光信号传送给 Fragmented DNA(red fluorescence) 10 计算机,专用的软件对这些数 据进行处理得出SCSA参数。 荧光染色变化原理图:正常DNA(绿)至受损DNA (红)( Evenson.2016) red fluorescence 前,常用的SCSA 参数包括:精子DNA total (red+green)fluorescence I碎片指数DF|DNA fragment index),主群 XDF|= mean of DFI population(11024unts)细胞外细胞指数COMP SD DFI standard deviation of DFI population at(cells outside main %DF=% cells outside main sperm population population)或表示 Moderate DFI and High DFI 为%DF,和高可染性精 %HDS =% cells with High DNA Stainability 子指数%HDs(high (5,000 SPERM/ SAMPLE X DUPLICATE MEASUREMENTS) DNA stainability)等。DF SCSA X DFI=DNA Fragmentation Index(Evenson et al. 1985) 指DNA受损的精子占 总精子的百分数,反映 DNA受损的精子情况; COMP a SCSA Protocol (或%DF1)是指主群以外的精子占 Frozen raw semen, thawed in a37 oC water 总精子的百分数,反映精子DNA受 bath and diluted with tne buffer 损情况;HDS指髙可染性的精子占 总精子的百分数,反映核未完全缩 合的不成熟精子的情况。高可染性 Acid(pH 1.20)denaturation 精子核未完全缩合,蛋白组型转换 of dNa at sites of strand breaks 存在异常,使染料的插入力增强, DNA可染性增加。 AO staining of ss(red) SCSA检测仅有一种操作流程 ds(green)DNA 在国际上已被广泛承认。检测中出 现任何偏离如右图所示SCSA流程 的操作,都不是SCSA检测 Measure 5,000 sperm by flow cytometry SCSA检测流程( Evenson et al,2002)游离巯基间形成共价键，精子核成熟。这样的成熟精子遇酸能维持双链结构的稳 定。而对于受到损伤的不成熟精子，其精核蛋白中不具备二硫键，形成松散结构 的染色质，DNA 在酸的作用下则会变性成单链。 吖啶橙(Scridine Orange, AO)可与双链 DN A 结合呈单 体形式发出绿色荧光 , 与单 链 DNA 结合呈聚合物形式发 出红色荧光。 红荧光在总荧光中所占 的比例反映了精子染色质结 构的缩合水平,可通过各计算 机界面流式细胞仪来评价。流 式细胞仪能准确测量每一个 精子发出的荧光信号传送给 计算机，专用的软件对这些数 据进行处理得出 SCSA 参数。 目前，常用的SCSA 参数包括：：精子 DNA 碎片指数 DFI(DNA fragment index)，主群 细胞外细胞指数COMP αt (cells outside main population）或表示 为%DFI，和高可染性精 子指数%HDS (high DNA stainability)等。DFI 指 DNA 受损的精子占 总精子的百分数，反映 DNA 受损的精子情况；COMPαt （或%DFI）是指主群以外的精子占 总精子的百分数，反映精子 DNA 受 损情况；HDS 指高可染性的精子占 总精子的百分数，反映核未完全缩 合的不成熟精子的情况。高可染性 精子核未完全缩合，蛋白组型转换 存在异常，使染料的插入力增强， DNA 可染性增加。 SCSA 检测仅有一种操作流程， 在国际上已被广泛承认。检测中出 现任何偏离如右图所示 SCSA 流程 的操作，都不是 SCSA 检测。 SCSA 检测流程 (Evenson et al., 2002) SCSA 参数 DFI= DNA Fragmentation Index(Evenson et al., 1985) 荧光染色变化原理图：正常 DNA（绿）至受损 DNA （红） (Evenson. 2016)