3 浙江大学 遗传学第十二章 13 2001年我国的转基因农作物和林木已达22种，其中 转基因棉花、大豆、马铃薯、烟草、玉米、花生、菠菜、 甜椒、小麦等进行了田间试验，转基因棉花已经大规模 商品化生产。 浙江大学 遗传学第十二章 14 3．内容： ①．从细胞和组织中分离DNA； ②．限制性内切酶酶切DNA分子，制备DNA片段； ③．将酶切DNA分子与载体DNA连接 Î 构建能在宿主细胞内 自我复制的重组DNA分子； ④．把重组DNA分子引入宿主受体细胞 Î 复制； ⑤．重组DNA随宿主细胞的分裂而分配到子细胞 Î 建立无性 繁殖系(clone)或发育成个体； ⑥．从细胞群体中选出所需要的无性繁殖系 Î 并使外源基因 在受体细胞中正常表达，翻译成蛋白质等基因产物、回收； 或筛选出获得定向性状变异的个体。 浙江大学 遗传学第十二章 15 1. 限制性内切酶(restriction enzyme)： 一种水解DNA的磷酸二脂酶，遗传工程中重要工具。 细菌细胞中存在限制修饰系统： 限制：降解外源DNA，防御异源遗传信息进入的手段。 修饰：修饰外源DNA片段后，保留在新细胞中。 二、 限制性内切核酸酶： 二、 限制性内切核酸酶： 浙江大学 遗传学第十二章 16 € 限制性内切酶如：EcoR I、Hind III： 酶切方式： 以交错方式切断 DNA双链，产生二个 相同单链粘性末端。 重组过程： 两种片段在适宜 条件下，可经磷酸二 脂链，连接成重组 DNA分子。 浙江大学 遗传学第十二章 17 ⑵．限制性内切酶的类别： 第Ⅰ类酶（切割部位无特异性）： 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)分子量较大 (约300000)，作用时需ATP、Mg++等辅助因子。 第Ⅱ类酶（切割部位有特异性）： 如EcoR I(大肠杆菌)、Hind Ⅲ(嗜血杆菌)，分子量较小(约 20000~100000)，作用时需Mg++存在。 ⑴．限制性内切酶的命名： 根据其来自的生物名称，用英文字母和数字表示； ①. EcoR I 来自大肠杆菌（Escherichia coli）； ②. Hind Ⅲ来自嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）。 浙江大学 遗传学第十二章 18 第Ⅱ类酶特点： ♣ 切割产生平齐末端（blunt ends），如Sma I：3 浙江大学 遗传学第十二章 13 2001年我国的转基因农作物和林木已达22种，其中 转基因棉花、大豆、马铃薯、烟草、玉米、花生、菠菜、 甜椒、小麦等进行了田间试验，转基因棉花已经大规模 商品化生产。 浙江大学 遗传学第十二章 14 3．内容： ①．从细胞和组织中分离DNA； ②．限制性内切酶酶切DNA分子，制备DNA片段； ③．将酶切DNA分子与载体DNA连接 Î 构建能在宿主细胞内 自我复制的重组DNA分子； ④．把重组DNA分子引入宿主受体细胞 Î 复制； ⑤．重组DNA随宿主细胞的分裂而分配到子细胞 Î 建立无性 繁殖系(clone)或发育成个体； ⑥．从细胞群体中选出所需要的无性繁殖系 Î 并使外源基因 在受体细胞中正常表达，翻译成蛋白质等基因产物、回收； 或筛选出获得定向性状变异的个体。 浙江大学 遗传学第十二章 15 1. 限制性内切酶(restriction enzyme)： 一种水解DNA的磷酸二脂酶，遗传工程中重要工具。 细菌细胞中存在限制修饰系统： 限制：降解外源DNA，防御异源遗传信息进入的手段。 修饰：修饰外源DNA片段后，保留在新细胞中。 二、 限制性内切核酸酶： 二、 限制性内切核酸酶： 浙江大学 遗传学第十二章 16 € 限制性内切酶如：EcoR I、Hind III： 酶切方式： 以交错方式切断 DNA双链，产生二个 相同单链粘性末端。 重组过程： 两种片段在适宜 条件下，可经磷酸二 脂链，连接成重组 DNA分子。 浙江大学 遗传学第十二章 17 ⑵．限制性内切酶的类别： 第Ⅰ类酶（切割部位无特异性）： 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)分子量较大 (约300000)，作用时需ATP、Mg++等辅助因子。 第Ⅱ类酶（切割部位有特异性）： 如EcoR I(大肠杆菌)、Hind Ⅲ(嗜血杆菌)，分子量较小(约 20000~100000)，作用时需Mg++存在。 ⑴．限制性内切酶的命名： 根据其来自的生物名称，用英文字母和数字表示； ①. EcoR I 来自大肠杆菌（Escherichia coli）； ②. Hind Ⅲ来自嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）。 浙江大学 遗传学第十二章 18 第Ⅱ类酶特点： ♣ 切割产生平齐末端（blunt ends），如Sma I：