4 浙江大学 遗传学第十二章 19 ♣ 有的产生粘性末端（sticky ends），如BamH I、 Pst I ： }识别特定碱基顺序，如回文对称序列（palindrome，又称 反向重复序列，从两个方向阅读其序列相同的序列）。 浙江大学 遗传学第十二章 20 部 分 常 用 的 限 制 性 内 切 酶 浙江大学 遗传学第十二章 21 运载工具：将“目的”基因导入受体细胞的运载工具。 DNA片段 ¬ 适合的载体DNA ¨ 重组DNA ¨ 在 载体DNA的运载下，高效率地进入宿主细胞，并在 其中进行复制。 DNA载体：质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母 菌人工染色体等。 三、载体（ 三、载体（vector vector）：）： 浙江大学 遗传学第十二章 22 载体的条件： ①.具有复制原点，能自我复制； ②.具多克隆位点 (multiple cloning site，MCS 或polylinker region)， 即有多种限制酶的切点； ③.选择时的遗传标记，如抗生素 基因； ④.易从宿主细胞中回收。 pUC19质粒 浙江大学 遗传学第十二章 23 ㈠、细菌质粒： 质粒是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的、 能自我复制、易分离和导入的环状双链DNA分子。 质粒具有重组表型检测标记，检测是否携带外源DNA 片段。 在细胞内的复制程度： 严紧型：一个细菌细胞内质粒数量有1~2个； 松驰型：每个细胞内有的20~60个。 浙江大学 遗传学第十二章 24 如pUC18质粒具有以下特点： ①. 分子量小，可接受较大外源片段； ②. 拷贝数多，500个／细胞； ③. 克隆位点的酶切位点多，克隆 方便； ④. 具有用于检测重组质粒的选择 标记（α–互补的显色表型） 。4 浙江大学 遗传学第十二章 19 ♣ 有的产生粘性末端（sticky ends），如BamH I、 Pst I ： }识别特定碱基顺序，如回文对称序列（palindrome，又称 反向重复序列，从两个方向阅读其序列相同的序列）。 浙江大学 遗传学第十二章 20 部 分 常 用 的 限 制 性 内 切 酶 浙江大学 遗传学第十二章 21 运载工具：将“目的”基因导入受体细胞的运载工具。 DNA片段 ¬ 适合的载体DNA ¨ 重组DNA ¨ 在 载体DNA的运载下，高效率地进入宿主细胞，并在 其中进行复制。 DNA载体：质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母 菌人工染色体等。 三、载体（ 三、载体（vector vector）：）： 浙江大学 遗传学第十二章 22 载体的条件： ①.具有复制原点，能自我复制； ②.具多克隆位点 (multiple cloning site，MCS 或polylinker region)， 即有多种限制酶的切点； ③.选择时的遗传标记，如抗生素 基因； ④.易从宿主细胞中回收。 pUC19质粒 浙江大学 遗传学第十二章 23 ㈠、细菌质粒： 质粒是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的、 能自我复制、易分离和导入的环状双链DNA分子。 质粒具有重组表型检测标记，检测是否携带外源DNA 片段。 在细胞内的复制程度： 严紧型：一个细菌细胞内质粒数量有1~2个； 松驰型：每个细胞内有的20~60个。 浙江大学 遗传学第十二章 24 如pUC18质粒具有以下特点： ①. 分子量小，可接受较大外源片段； ②. 拷贝数多，500个／细胞； ③. 克隆位点的酶切位点多，克隆 方便； ④. 具有用于检测重组质粒的选择 标记（α–互补的显色表型）