000 Somatic Detection Germline 00 PCR Reaction Flow Cell Sequencing Depth per An. (=FISH FISH(荧光原位杂交)是一种广泛被临床认可的检测基因拷贝数变化的方法，如果被检测的 染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火 -复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体，将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分 子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应 通过荧光显微镜镜检，对待测DNA进行定性、定量或才 F1SH技术可用来检 测基因扩增、缺失及重排，如用于已知基因或序列的染色体定位、未克隆基因或遗传标记 及染色体畸变的研究。 FISH原理图 特标记的DNA 爱光探针 DNAI DNA案合南 5℃杂交复 炎光标记的DNA探针 FSH技术优势有：①荧光试剂和探针经济、安全：②探针稳定，一次标记后可在两年内使 用；③实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确：④F1SH可定位长度在1kb的 DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当：⑤多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色 可同时检测多种序列；⑥既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬 液中显示间期染色体DNA的结构。 但FISH不能达到1OO%杂交，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。 虽然NGS作为新兴测序技术近些年来发展势头迅猛，但目前市场上的伴随诊断测序服务和 产品仍以PCR技术为主，且与PCR和NGS相比，FISH技术总体来说应用较少。 PCR、NGS、FISH技术优缺点对比（三）FISH FISH（荧光原位杂交）是一种广泛被临床认可的检测基因拷贝数变化的方法，如果被检测的 染色体或 DNA 纤维切片上的靶 DNA 与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火 -复性，即可形成靶 DNA 与核酸探针的杂交体，将核酸探针的某一种核苷酸标 记上报告分 子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的 免疫化学反应， 通过荧光显微镜镜检，对待测 DNA 进行定性、定量或相对定位分析， FISH 技术可用来检 测基因扩增、缺失及重排，如用于已知基因或序列的染色体定位、未 克隆基因或遗传标记 及染色体畸变的研究。 FISH 原理图 FISH 技术优势有：①荧光试剂和探针经济、安全；②探针稳定，一次标记后可在两 年内使 用；③实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；④FISH 可定位长度 在 1kb 的 DNA 序列，其灵敏度与放射性探针相当；⑤多色 FISH 通过在同一个核中显示 不同的颜色 可同时检测多种序列；⑥既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化， 也可以在悬 液中显示间期染色体 DNA 的结构。 但 FISH 不能达到 100%杂交，特别是在应用较短的 cDNA 探针时效率明显下降。 虽然 NGS 作为新兴测序技术近些年来发展势头迅猛，但目前市场上的伴随诊断测序服务和 产品仍以 PCR 技术为主，且与 PCR 和 NGS 相比，FISH 技术总体来说应用较少。 PCR、NGS、FISH 技术优缺点对比