实验五植物原生质体的分离与诱导融合
实验五 植物原生质体的分离 与诱导融合
思维导图机械法植物细胞的分离酶解法果胶酶植物机械法原生质体植物原生质体的分离的分纤维素酶、半纤维素酶解法离与酶、果胶酶诱导融合原理细胞膜的流动性电融合、病毒诱导、细胞融合方法PEG诱导诱导植物原生质体融过程合
思维导图
预习问题·什么叫细胞融合？·如何获得植物（动物）的单个细胞？·植物细胞细胞壁成分，如何去除植物细胞壁？·细胞（原生质体）可以彼此融合，缘于细胞膜的哪种特质？·细胞融合的基本方法？（拓展学习原理）。·如果使用细胞A与细胞B融合，实验结果中会获得多少种融合细胞
预习问题 • 什么叫细胞融合？ • 如何获得植物（动物）的单个细胞？ • 植物细胞细胞壁成分，如何去除植物细胞壁？ • 细胞（原生质体）可以彼此融合，缘于细胞膜的哪种特质？ • 细胞融合的基本方法？（拓展学习原理）。 • 如果使用细胞A与细胞B融合，实验结果中会获得多少种融合细胞
一、实验目的（1）掌握获得植物单细胞的两种基本方法；（2）学会酶解法制备植物原生质体；（3）组内协作完成PEG诱导的植物原生质体诱导融合；（4）文献调研了解细胞融合技术的前沿应用进展；
一、实验目的 （1）掌握获得植物单细胞的两种基本方法； （2）学会酶解法制备植物原生质体； （3）组内协作完成PEG诱导的植物原生质体诱导融合； （4）文献调研了解细胞融合技术的前沿应用进展；
二、实验原理1.细胞融合（cellfusion）在诱导剂的作用下，两个或两个以上的同源或异源的细胞相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。1细胞工程学的重要研究内容：无菌操作下开展的实验23活的、完整的过程；今天，我们只是模拟一部分实验：胞质融合
二、实验原理 1. 细胞融合（cell fusion) 在诱导剂的作用下，两个或两个以上的同源或异源的细胞相互 接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现 象。 ① 细胞工程学的重要研究内容； ② 无菌操作下开展的实验； ③ 活的、完整的过程； 今天，我们只是模拟一部分实验：胞质融合
CGTV13新路B看了好多细胞分裂看看细胞融合自发细胞融合(spontaneous cell fusion)诱导细胞融合(induced cell fusion)细胞融合+细胞分裂
看了好多细胞分裂 看看细胞融合 自发细胞融合（spontaneous cell fusion） 诱导细胞融合（induced cell fusion） 细胞融合+细胞分裂
人工诱导细胞融合的案例苷蓝&青菜鸡&酵母菌大豆&马唐草人&胡萝卜矮牵牛&龙面花大麦&花生原生质体&血红细胞大麦&大豆腹水癌细胞&原生质体麦小矮牵牛&人纤维肉瘤细胞&鼠畸胎瘤细胞菜油豆&大.米&豆大福大EL&野豌豆大麦&香蚕豆大豆&香香木犀只有想不到，没有做不到的跨界大豆&烟草大豆&秋水仙番茄&马铃薯
苷 蓝＆青 菜 大 豆＆马唐草 矮牵牛＆龙面花 大 麦＆花 生 大 麦＆大 豆 小 麦＆矮牵牛 油 菜＆大 豆 玉 米＆大 豆 大 豆＆野豌豆 大 麦＆蚕 豆 大 豆＆香木犀 大 豆＆烟 草 大 豆＆秋水仙 番 茄＆马铃薯 鸡＆酵母菌 人＆胡萝卜 原生质体＆血红细胞 腹水癌细胞＆原生质体 人纤维肉瘤细胞＆鼠畸胎瘤细胞 人工诱导细胞融合的案例 只有想不到，没有做不到 的跨界
爬分子企业序号中文名称英文名称国内获批适应症抗体种类国内获批时间利妥昔单抗嵌合抗体DC20基因索克非霍奇金淋巴油2000年RituximabHER2阳性早期乳腺腐，转移性乳曲要珠单抗腺癌、HER2阳性的转移性胃腺癌人源化抗体HER2基因泰克2002年Trastuzumab或胃食交界腺点经典应用：西要苔单抗转移性结直肠癌嵌合抗体EGFRImClone公司2006年Cetuximab贝伐珠单抗人源化抗体VEGFR基因素克2010年①！转移性结直肠痛、非小细胎脂痛单克隆抗体药物Bevacizunab帕博利珠单抗默沙东黑色素瘤人源化抗体PD-12018年Pembrolizumab② 疫苗纳武利光单抗非小细胞肺癌全人源抗体PD-1百时美施贵宝2018年Nivolumab染【131]美要普单抗不能手术切除或术后复发的原发性③靶向治疗等等人源化抗体HAb1SG成都华神生物2006年lodine[1311]Metuximab肝细胞癌尼妥珠单抗鼻咽痛人源化抗体EGFR2008年8百泰生物药业Nimotuzumat注：蓝色标记为国内企业获批品种2019-2023年全球单克降抗体市场规模情况及预测■单位：亿美元-235625002181200120001819细胞工程里价值不菲的一项技术！1639150010005000-20192020E2021E2022E2023E制图：中商情报网(www.askci.com)
经典应用： ① 单克隆抗体药物 ② 疫苗 ③ 靶向治疗等等 细胞工程里价值不菲的一项技术！
我们的实验的：动物细胞诱导动物细胞融合植物细胞↓植物原生质体诱导植物原生质体融合第二步第三步第一步
诱导动物细胞融合 诱导植物原生质体融合 动物细胞 植物细胞 植物原生质体 我们的实验目的： 第三步 第一步 第二步
2.第一步：单细胞的获得（1）物理的方法：机械法一力缺点：伤害性强，获得率低剪碎研磨原生质体（2）化学方法：酶解法“溶解掉”细胞与细胞之间的连接和细胞壁组合酶：果胶酶、纤维素酶和半纤维素物理方法：切开，使劲挣脱酶一步法，直接获得原生质体化学方法：有机溶剂溶解优点：获得率高；缺点：混入了相关酶类。这时候两根手指已经被粘住了
2. 第一步：单细胞的获得 剪碎 研磨 （1）物理的方法：机械法-力 缺点：伤害性强，获得率低 物理方法：🔪切开，使劲挣脱 化学方法：有机溶剂溶解 （2）化学方法：酶解法“溶解掉” 细胞与细胞之间的连接和细胞壁。 原生质体 组合酶：果胶酶、纤维素酶和半纤维素 酶一步法，直接获得原生质体； 优 点：获得率高； 缺 点：混入了相关酶类