放线菌实验四土壤中细菌、方的分离与纯化
实验四 土壤中细菌、放线菌 的分离与纯化
实验的1、了解涂布平板法分离微生物纯种的原理并掌握其基本技能。：2、初步观察来自士壤中的2大类群微生物的菌落形态特征
实验目的 ❖ 1、了解涂布平板法分离微生物纯种的原理， 并掌握其基本技能。 ❖ 2、初步观察来自土壤中的2大类群微生物的 菌落形态特征
实验原理土壤是微生物的大本营，还有多种细菌、放线菌、真菌和原生动物，是野生菌的重要资源
实验原理 ❖ 土壤是微生物的大本营，还有多种细菌、放 线菌、真菌和原生动物，是野生菌的重要资 源
涂布培养法是指取少量梯度稀释菌悬液，置于已凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布玻璃把菌液均匀地涂在整个平板表面，经培养后，在平板培养基表面会形成多个独立分别的单菌落，然后挑取典型的代表移接至斜面，经培养后保存
❖ 涂布培养法是指取少量梯度稀释菌悬液，置 于已凝固的无菌平板培养基表面，然后用无 菌的涂布玻璃把菌液均匀地涂在整个平板表 面，经培养后，在平板培养基表面会形成多 个独立分别的单菌落，然后挑取典型的代表 移接至斜面，经培养后保存
实验材料和器土壤土样（无菌取土法取教学楼下草地士）牛肉膏蛋白陈培养基，高氏1号培养基10%酚，制霉菌素，链霉素，盛有90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶玻璃涂布棒，无菌枪头，接种环，无菌培养血
实验材料和器皿 ❖ 土壤土样（无菌取土法取教学楼下草地土） ❖ 牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基 ❖ 10%酚，制霉菌素，链霉素，盛有90mL无菌 水并带有玻璃珠的三角瓶 ❖ 玻璃涂布棒，无菌枪头，接种环，无菌培养 皿
牛肉膏蛋白陈培养基配方牛肉膏3g?蛋白陈10g:NaCI5g琼脂15-20gX水1000mlXpH7.4-7.6X
牛肉膏蛋白胨培养基配方 ❖ 牛肉膏 3g ❖ 蛋白胨 10g ❖ NaCl 5g ❖ 琼脂 15-20g ❖ 水 1000ml ❖ pH 7.4-7.6
高氏1号培养基0.5gMgSO4可溶性淀粉20gFeS040.01gKNO31g琼脂15-20g0.5gK,HPO3水1000mlXNaCI0.5gpH7.2-7.4
高氏1号培养基 ❖ 可溶性淀粉 20 g ❖ KNO3 1 g ❖ K2HPO3 0.5 g ❖ NaCl 0.5 g ❖ MgSO4 0.5g ❖ FeSO4 0.01g ❖ 琼脂 15-20g ❖ 水 1000ml ❖ pH 7.2-7.4
实验步骤（一）土壤悬液制备称10克土壤放入带玻璃珠的90ml瓶装无菌水中，手摇振荡（10-20min），使土样分散
❖ （一）土壤悬液制备 称10克土壤放入带玻璃珠的90ml瓶装无菌水 中，手摇振荡(10-20min)，使土样分散。 实验步骤
（二）悬液稀释0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml：每管各0.9ml无菌水-601S103410~210101010g检样90ml无菌水3-65每血倒15ml2-6-琼脂培养基-6
❖ （二）悬液稀释
（三）悬液涂布将上述培养基的平板底部用记号笔分别写上培养基名称、稀释度，姓名和日期，每种培养基每稀释度标记3皿。无菌吸管无菌操作吸取菌悬液0.1/0.2mL放入平板中央，沿一条直线轻轻来回推动，使之均匀，然后改变90方向沿另一条垂直线来回推动，平板内边缘处可改变方向用涂布棒再涂布，室温静置5~10min后培养
❖ （三）悬液涂布 将上述培养基的平板底部用记号笔分别写上培养基名 称、稀释度，姓名和日期，每种培养基每稀释度标 记3皿。无菌吸管无菌操作吸取菌悬液0.1/0.2mL放入 平板中央，沿一条直线轻轻来回推动，使之均匀， 然后改变90°方向沿另一条垂直线来回推动，平板内 边缘处可改变方向用涂布棒再涂布，室温静置 5~10min后培养