实验六植物DNA的提取与定量分析
实验六 植物DNA的提取与定量分析
一、实验目的，掌握植物DNA的提取方法掌握DNA浓度、质量分析技术
一、实验目的 l 掌握植物DNA的提取方法. l 掌握DNA浓度、质量分析技术
Ol二、实验原理DNA提取是分子遗传学、分子生物学研究的基本操作，高质量DNA是进行后续各种实验的基础！M细胞破碎抽提去杂质沉淀核酸-
二、实验原理 l DNA提取是分子遗传学、分子生物学研究的基本操作，高 质量DNA是进行后续各种实验的基础！ 细胞破碎 → 抽提去杂质 → 沉淀核酸
1.细胞破碎方法机械方法：研磨法、超声波处理法、匀浆法；化学试剂法：用SDS、CTAB处理细胞酶解法：溶菌酶等，破坏细胞壁
• 机械方法： 研磨法、超声波处理法、匀浆法； • 化学试剂法：用SDS、CTAB处理细胞； • 酶解法： 溶菌酶等，破坏细胞壁。 1.细胞破碎方法
兰CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）：一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，且与DNA形成复合物。高盐溶液（0.7mol/LNaCI）中可溶，低盐浓度时（0.3mol/LNaCI）从溶液中沉淀。通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中
u CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）：一种阳离子去污剂，可溶 解细胞膜，且与DNA形成复合物。高盐溶液（0.7mol/L NaCl）中 可溶，低盐浓度时（0.3mol/L NaCl）从溶液中沉淀。 u 通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分 开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再 加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中
DMGUW2.DNA纯化（去杂质）蛋白质：常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1）抽提。RNA:常选用RNase消化，或用LiCI消除大分子RNA。酚类物质：提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料
• 蛋白质： 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1） 或氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 • RNA： 常选用RNase消化，或用LiCl消除大分子RNA。 • 酚类物质： 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。 2. DNA纯化（去杂质）
3.DNA定量分析：DNA分子在260nm处有特异的紫外吸收峰，蛋白质的吸收高峰在280nm处。可用紫外光谱法分析核酸溶液A260/A280大于或等于1.80：A260/A230的消光值比大于或等于2.0。·A260/A280值过小，说明蛋白未脱净；A260/A230过小，说明有杂质（多酚类或色素）
l DNA分子在260nm处有特异的紫外吸收峰，蛋白质的吸收高峰 在280nm处。可用紫外光谱法分析. l 核酸溶液A260/A280大于或等于1.80 ；A260/A230的消光值比 大于或等于2.0。 l A260/A280值过小，说明蛋白未脱净；A260/A230过小，说明 有杂质（多酚类或色素）。 3.DNA定量分析：
三、实验用品
三、实验用品
1三、实验用品异丙醇，70%乙醇·小麦嫩叶3MNaAc（pH5.2）·CTAB提取液·TE (pH8.0).TE (pH8. 0)1XTAE电泳缓冲液(25:24:1)●酚/氯仿/异戊醇凝胶加样缓冲液享（24:1)·氯仿/异戊醇，10mg/L的EB贮存液
三、实验用品 l 小麦嫩叶 l CTAB提取液 l TE（pH8.0） l 酚/氯仿/异戊醇（25:24:1） l 氯仿/异戊醇（24:1） l 异丙醇，70%乙醇 l 3M NaAc（pH5.2） l TE（pH8.0） l 1X TAE电泳缓冲液 l 凝胶加样缓冲液 l 10 mg/L 的EB贮存液
四、实验步骤注意：所用提取液、吸头、离心管等均需121℃高压灭菌20min
四、实验步骤 注意： l 所用提取液、吸头、离心管等均需121℃高压灭菌20 min