实验六地衣酚显色法测定RNA含量 一、目的 学习RNA含量的定量测定方法以及RNA快速定性检测方法，熟悉分光光度计使用原 理及其操作。 二、原理 在三氯化铁及盐酸存在下，RNA与3,5二羟基甲苯（地衣酚）反应，生成绿色物质， 其最大光吸收值在670nm处。要说明的是：地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均可与地衣酚 反应，DNA及其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时，要考虑DNA等杂质影 响，可先测定DNA含量，再计算出RNA含量。 三、实验材料、主要仪器与试剂 1.实验材料 (I)RNA标准溶液：取标准RNA(预先经定磷法确定其纯度)配成1O0μgmL的 溶液。 (2)样品待测液：适当稀释，使RNA含量为50一IO0μgmL 2.地衣酚试剂 先称取100mg三氯化铁溶于100mL浓盐酸中（配制0.1%浓度的溶剂）备用。在使用 前加入100mg地衣酚配制成0.1%浓度的地衣酚试剂 3.主要仪器 (1)分光光度计。 四、操作方法 1.标准RNA曲线的制作 取12支洁净干燥试管按下表取样并加入试剂 管号 RNA标准溶液(mL) 0(mL)地衣酚试剂(mL) RNA含量(g) 1,2 0 25 25 0 3.4 2.0 5,6 1.0 1.5 2.5 100 7,8 1.5 1.0 150 9,10 2.0 0.5 2.5 200 山，12 25 0 25 250 2020 实验六 地衣酚显色法测定 RNA 含量 一、目的 学习 RNA 含量的定量测定方法以及 RNA 快速定性检测方法，熟悉分光光度计使用原 理及其操作。 二、原理 在三氯化铁及盐酸存在下，RNA 与 3,5-二羟基甲苯（地衣酚）反应，生成绿色物质， 其最大光吸收值在 670nm 处。要说明的是：地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均可与地衣酚 反应，DNA 及其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定 RNA 时，要考虑 DNA 等杂质影 响，可先测定 DNA 含量，再计算出 RNA 含量。 三、实验材料、主要仪器与试剂 1．实验材料 （1）RNA 标准溶液：取标准 RNA（预先经定磷法确定其纯度）配成 100μg/mL 的 溶液。 （2）样品待测液：适当稀释，使 RNA 含量为 50～100μg/mL。 2．地衣酚试剂 先称取 100mg 三氯化铁溶于 100mL 浓盐酸中（配制 0.1%浓度的溶剂）备用。在使用 前加入 100mg 地衣酚配制成 0.1%浓度的地衣酚试剂。 3．主要仪器 （1）分光光度计。 四、操作方法 1． 标准 RNA 曲线的制作 取 12 支洁净干燥试管按下表取样并加入试剂： 管号 RNA 标准溶液（mL） H2O（mL） 地衣酚试剂（mL） RNA 含量（μg） 1，2 0 2.5 2.5 0 3，4 0.5 2.0 2.5 50 5，6 1. 0 1.5 2.5 100 7，8 1.5 1. 0 2.5 150 9，10 2.0 0.5 2.5 200 11，12 2.5 0 2.5 250