1.仪器 (1)台式高速离心机(10000rmin (2)水浴 (3)Eppendorf (1.5mL) (4)紫外可见分光光度计 (5)冰箱或冷柜(0~4℃) (6)振荡器 (7)分析天平（精确至0.1mg) (8)真空干操器 2.试剂（均为分析纯 (1)SDS-缓冲液：0.3%SDS,0.1mol/L NaCI,0.05molL乙酸钠，用乙酸调到pH5.0. (2)饱和酚液：重蒸苯酚用(1)溶液饱和。 (3)氯仿-异戊醇液：24：1(VN)。 (4)含2%乙酸钾的95%乙醇溶液。 (5)无水乙醇 (6)乙醚 (7)溶菌酶(B.R)(1mgmL) (三)操作步骤 1.取lg活性干酵母在研体中研碎，加10 mLSDS-.缓冲液使成匀浆，洗入各Eppendorf 管（略少于管容积的一半），加溶菌酶0.1mL,混匀，室温静置10min,再加等体积饱和酚 液，室温下剧烈振荡5min。置冰浴中分层，在0~4℃低温环境下，10000rmin离心10min。 吸出上层清液，转入新的Eppendorf管，加等体积氯仿-异戊醇，室温下剧烈振荡2.5min, 然后10000rmin离心5mim。吸出上层清液，转入另一新Eppendorf管，加2倍体积95% 乙醇（含2%乙酸钾），在冰浴中放置30min,使RNA沉淀。再以10000r/min离心5min, 弃上清液，沉淀用少许无水乙醇和乙醚各洗一次，即加乙醇或乙醚，迅速离心各1mi,保 留沉淀。倾去乙醚后，减压真空干燥，准确称重，记录。 RNA制品纯度的测定及RNA提取率的计算与浓盐法相同。 (吕淑霞) 19 19 1．仪器 （1）台式高速离心机（10 000r/min） （2）水浴 （3）Eppendorf 管（1.5mL） （4）紫外可见分光光度计 （5）冰箱或冷柜（0～4℃） （6）振荡器 （7）分析天平（精确至 0.1mg） （8）真空干燥器 2．试剂（均为分析纯） （1）SDS-缓冲液：0.3％ SDS，0.1mol/L NaCl，0.05mol/L 乙酸钠，用乙酸调到 pH5.0。 （2）饱和酚液：重蒸苯酚用（1）溶液饱和。 （3）氯仿-异戊醇液：24﹕1（V/V）。 （4）含 2％乙酸钾的 95％乙醇溶液。 （5）无水乙醇 （6）乙醚 （7）溶菌酶（B.R.）（1mg/mL） （三）操作步骤 1．取 1g 活性干酵母在研钵中研碎，加 10mL SDS-缓冲液使成匀浆，洗入各 Eppendorf 管（略少于管容积的一半），加溶菌酶 0.1mL，混匀，室温静置 10min，再加等体积饱和酚 液，室温下剧烈振荡 5min。置冰浴中分层，在 0～4℃低温环境下，10 000r/min 离心 10min。 吸出上层清液，转入新的 Eppendorf 管，加等体积氯仿-异戊醇，室温下剧烈振荡 2.5min， 然后 10 000r/min 离心 5min。吸出上层清液，转入另一新 Eppendorf 管，加 2 倍体积 95％ 乙醇（含 2％乙酸钾），在冰浴中放置 30min，使 RNA 沉淀。再以 10 000r/min 离心 5min， 弃上清液，沉淀用少许无水乙醇和乙醚各洗一次，即加乙醇或乙醚，迅速离心各 1min，保 留沉淀。倾去乙醚后，减压真空干燥，准确称重，记录。 RNA 制品纯度的测定及 RNA 提取率的计算与浓盐法相同。 （吕淑霞）