干操后的RNA制品称重 6.含量测定 称取一定量干燥后的RNA产品配制成浓度为10一50μgmL的溶液，在751型分光光 度计上测定其26Onm处的光密度值，按下式计算RNA含量： RNA含量(%)= RNA溶液总体积(mL) 100 0.024L. RNA称取量(ug) 式中：OD2m为260nm处的光密度值：L为此色杯的光径(cm):0.024为1mL溶液含有 1μgRNA的光密度值。 五、结果计算 根据含量测定的结果按下式计算提取率： RNA提取率(6)=RNA含量)RNA制品量IO 酵母重(g) 六、思考题 1.RNA提制中注意事项是什么？ 参考答案 1.主要注意事项为：避开核酸酶作用的温度范围20~70℃，防止RNA降解。同时 在调pH值时，一定要缓慢小心，且要在低温下进行。此外，在抽滤洗涤时，要用乙醇汾 涤，且不可用水洗，否则将导致RNA部分溶解而造成损失，降低RNA提取率。 附注：苯酚法提取酵母RNA (一·)原理 细胞内大部分RNA均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA 时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodeeyl sulfate SDS)的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚 相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层 本实验采用的0.15olL缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离，而DNA-蛋白复合 物只有极少部分解离：用酚处理时DNA蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去， 这样得到的RNA制品中混杂的DNA极少。用氯仿-异戊醇继续处理RNA制品，可进一步 除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使RNA从水溶液中沉淀出来。本法得到的RNA不仅 纯度高，而且多呈自然状态，可供继续研究之用。 (二)主要仪器和试剂 1818 干燥后的 RNA 制品称重。 6．含量测定 称取一定量干燥后的 RNA 产品配制成浓度为 10～50μg/mL 的溶液，在 751 型分光光 度计上测定其 260nm 处的光密度值，按下式计算 RNA 含量： OD260nm RNA 溶液总体积（mL） RNA 含量（%）= 0.024 L RNA 称取量（μg） 100 式中：OD260nm 为 260nm 处的光密度值；L 为比色杯的光径（cm）；0.024 为 1mL 溶液含有 1μg RNA 的光密度值。 五、结果计算 根据含量测定的结果按下式计算提取率： RNA 含量（%） RNA 制品量 RNA 提取率（%）= 酵母重（g） 100 六、思考题 1．RNA 提制中注意事项是什么？ 参考答案 1．主要注意事项为：避开核酸酶作用的温度范围 20～70℃，防止 RNA 降解。同时 在调 pH 值时，一定要缓慢小心，且要在低温下进行。此外，在抽滤洗涤时，要用乙醇洗 涤，且不可用水洗，否则将导致 RNA 部分溶解而造成损失，降低 RNA 提取率。 附 注：苯酚法提取酵母 RNA （一）原理 细胞内大部分 RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取 RNA 时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate, SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚 相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。 本实验采用的 0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分 RNA-蛋白复合物解离，而 DNA-蛋白复合 物只有极少部分解离；用酚处理时 DNA-蛋白复合物变性，在低温条件下从水相中除去， 这样得到的 RNA 制品中混杂的 DNA 极少。用氯仿-异戊醇继续处理 RNA 制品，可进一步 除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使 RNA 从水溶液中沉淀出来。本法得到的 RNA 不仅 纯度高，而且多呈自然状态，可供继续研究之用。 （二）主要仪器和试剂