4)加入250u已含 RNase A的 Buffer s1,轻轻用加样枪吹打、悬浮细菌沉淀,直至均 5)加入250μ Buffer s2,立即盖好 Eppendorf盖,轻轻将其上下颠倒10次,见菌液逐渐变 清 6)迅速加入350μ I Buffer S3,盖好管盖,温和并充分地上下翻转混合8次,12000xg离心 10min。 7)将移液枪旋至800μ,小心吸取离心后上清,转移至2m离心管中的制备管中 12000Xg离心1min,弃去滤液。 8)将制备管放回离心管,加入500 Buffer w1,12000Xg离心1min,弃去滤液。 9)将制备管放回离心管,加入700 Buffer w2,120009离心1min,弃去滤液。 10)用700 Buffer w2重复洗涤1次,12000xg离心min,弃去滤液。 11)将制备管放回离心管,12000Xg空离心1min 12)取出制备管,移入新的15m的离心管中,向制备管膜中央加入65℃水浴预热 Eluent 液体40,静置1min,12000g离心1min,弃去制备管。 2.质粒DNA的限制性内切酶双酶切鉴定 1)酶切 取一只15 ml Eppendor管,标记为酶切”,向其中加入酶切反应物如下 10xmulti-core buffer 2 ul EcoR I(16u/Hl) Cla I(10 u/uD dd H20 6山l 质粒DNA溶液 10叫 总体积 20 ul 混匀后短暂离心,37℃水浴1小时。 2)电泳 王晨辰·复旦大学上海医学院临床医学八年制·06301010250