页码数:2005版药典附录第22页 附录ⅣCSDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法 大多数蛋白质与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复 合物,使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷,消除了 不同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质按分子大小分离 仪器恒压或恒流电源,垂直板或圆盘电泳槽和制胶模具 试剂(1)水(电阻率不低于18.2Mg.cm) (2)A液1.5mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液。称取三羟甲基氨基甲 烷18.15g,加适量水溶解,用盐酸调pH值至8.8,加水稀释至100ml (3)B液30%丙烯酰胺一0.8%N,N’一亚甲基双丙烯酰胺溶液(避光保存)。 (4C液1%十二烷基硫酸钠溶液。 (5)D液10%四甲基乙二胺溶液。 (6E液10%过硫酸铵溶液,临用前配制。 (刀F液O.5mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液。称取三羟甲基氨基甲 烷6.05g加适量水溶解,用盐酸调pl值至6.8,加水稀释至100ml (8)电极缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷3g、甘氨酸144g、十二烷基硫酸钠1g, 加适量水溶解,用盐酸调pH值至8.3,加水稀释至1000ml。 (9)供试品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷O.303g、溴酚蓝2mg、十二烷基硫 酸钠O.8g,量取盐酸0.189m、甘油4ml,加水溶解并稀释至10m,此溶液用于非 还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,如用于还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,则再加 B-巯基乙醇2ml (10)分子量标准供试品的分子量应包括在使用的分子量标准范围之内 (11)固定液量取甲醇250ml、冰醋酸60ml,加水稀释至500ml (12)漂洗液量取乙醇100m、冰醋酸50m,加水稀释至1000m。 (13辅染液称取重铬酸钾10g,量取硝酸2ml加适量水溶解并稀释至200ml 用 前40倍稀释。 (14)银染液称取硝酸银2.04g,加水溶解并稀释至1000ml (15显色液称取碳酸钠30g加适量水溶解,加甲醛O.5m,并稀释至1000ml。 (16)终止液量取冰醋酸10ml加水稀释至1000m (1考马斯亮蓝染色液称取考马斯亮蓝R250lg,加入甲醇200ml、冰醋 酸 50m、水250m混匀。 页码数:2005版药典附录第50页 附录ⅨHSV40核酸序 列检查法 本法系通过设计两对特异引物扩增SV40VPl100bp(2220~2319)和大T抗原C-末端 4bp(2619~3070两个片段,采用聚合酶链反应(PCR检查供试品中是否存在SV40核 酸序列 供试品溶液及对照溶液的制备取供试品400μ1,加2%蛋白酶K溶液25μ1、10%页码数： 2005 版药典附录第 22 页 附录ⅣC SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳法 大多数蛋白质与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复 合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了 不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子大小分离。 仪器恒压或恒流电源，垂直板或圆盘电泳槽和制胶模具。 试剂 (1)水(电阻率不低于 18．2MΩ．cm) (2)A 液 1．5mol／L 三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲 液。称取三羟甲基氨基甲 烷 18．15g，加适量水溶解，用 盐酸调 pH 值至 8．8，加水稀释至 100ml。 (3)B 液 30％丙烯酰胺一 0．8％N，N’一亚甲基双丙烯酰胺溶液(避光保存)。 (4)C 液 1％十二烷基硫酸钠溶液。 (5)D 液 10％四甲基乙二胺溶液。 (6)E 液 10％过硫酸铵溶液，临用前配制。 (7)F 液 O．5mol／L 三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液。称取三羟甲基氨基甲 烷 6．05g 加适量水溶解，用盐酸调 pH 值至 6．8，加水稀释至 100ml。 (8)电极缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷 3g、甘氨酸 14.4g、十二烷基硫酸钠 1g， 加适量水溶解，用盐酸调 pH 值至 8．3，加水稀释至 1000ml。 (9)供试品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷 O．303g、溴酚蓝 2mg、十二烷基硫 酸钠 O．8g，量取盐酸 0．189ml、甘油 4ml，加水溶解并稀释至 10ml，此溶液用于非 还原 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，如用于还原 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，则再加 β-巯基乙醇 2ml。 (10)分子量标准供试品的分子量应包括在使用的分子量标准范围之内。 (11)固定液量取甲醇 250ml、冰醋酸 60ml，加水稀释至 500ml。 (12)漂洗液量取乙醇 100ml、冰醋酸 50ml，加水稀释至 1000m|。 (13)辅染液称取重铬酸钾 10g，量取硝酸 2ml 加适量水溶解并稀释至 200ml。 用 前 40 倍稀释。 (14)银染液称取硝酸银 2．04g，加水溶解并稀释至 1000ml。 (15)显色液称取碳酸钠30g加适量水溶解，加甲醛O．5ml，并稀释至1000ml。 (16)终止液量取冰醋酸 10ml 加水稀释至 1000ml。 (17)考马斯亮蓝染色液称取考马斯亮蓝 R250 1g，加入甲醇 200ml、冰醋 酸 50ml、水 250ml 混匀。 页码数： 2005 版药典附录第 50 页 附录ⅨH SV40 核酸序 列检查法 本法系通过设计两对特异引物扩增 SV40 VPl 100bp(2220～2319)和大 T 抗原 C-末端 451bp(2619～3070)两个片段，采用聚合酶链反应(PCR)检查供试品中是否存在 SV40 核 酸序列。 供试品溶液及对照溶液的制备取供试品 400μ1，加 2％蛋白酶 K 溶液 25μ1、10％