计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均值。将标准品溶液的IgC 含量的对数对其相应的吸光度的对数进行直线回归,相关系数应不低于0.99;然 后将供试品溶液吸光度的对数值代入回归方程,求得值的反对数,再乘以稀释 倍数,求取每lm供试品溶液lgG含量(gL),再由供试品各稀释度IgG含量求平均值, 即为供试品IgG含量(g/L) 【附注】(1)全部反应管必须在10分钟内测量完毕 (2)设置紫外分光光度计狭缝宽度 Slit width)为2nm (3)每次测定可根据供试品IgG含量,适当调整标准品溶液中IgG含量范围 页码数:2005版药典附录第32页 附录ⅥF0一乙酰基测 定法 试剂(1)2mo/L盐酸羟胺溶液称取盐酸羟胺13.9g,加水溶解并稀释至IOO m,冷处保存 (2)3.5mol/L氢氧化钠溶液称取氢氧化钠14.Og,加水使溶解并稀释至10oml (3)}4mol/L盐酸溶液量取盐酸33.3ml,加水稀释至 lOOm的溶液 (4)0.37mol/L三氯化铁一盐酸溶液称取三氯化铁(FeCl3·6H20)10.Og,加 O.lmol/L盐酸溶液溶解并稀释至100m。 (5)碱性羟胺溶液取等体积的盐酸羟胺溶液(mol/L)与氢氧化钠溶液 (3.5mol/L混合。3小时内使用 对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱2.7mg(或溴化乙 酰胆碱28.3mg),置5oml量瓶中,加0.00lmol/L醋酸钠溶液(pH4.5)溶解并稀释 至刻度,摇匀。 供试品溶液的制备取供试品,用水稀释成O-乙酰基浓度为O.5~2.5mmol/L 的溶液。 测定法精密量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)对照品溶液O.2ml、0.4m、 O.6ml、O.8ml、1Om,分别置试管中,补加水至lml,加新鲜配制的碱性羟胺 溶液2m,摇匀,于室温放置4分钟,加4mol/L盐酸lm,调pH值至1.2±O.2,摇 匀,加O.37mol/L三氯化铁一盐酸溶液lm,摇匀,照紫外一可见分光光度法(附 录ⅡA),在波长540m处测定吸光度。另精密量取上述相应的系列对照品溶液, 自“补加水至lm※’起,除加酸与加碱性羟胺的次序颠倒外,同法操作,用作对应 的空白对照。 精密量取供试品溶液ln置试管中,自“加新鲜配制的碱性羟胺溶液2m※’起,同 法操作。并取供试品溶液Iml,同法操作,用作供试品的空白对照 将标准管各吸光度分别减去相应的空白对照管的吸光度,以标准管中所含的 对照品溶液的体积与对应的吸光度作直线回归,将供试品的吸光度减去供试品 溶液空白吸光度代入直线回归方程,计算出每Im供试品相当于对照品溶液的体 积( 供试品中O-乙酰基含量(mm0l/L)=E×2.5式中2.5为对照品溶液中乙酰胆碱的 含量(mmol/L)计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均值。将标准品溶液的 IgG 含量的对数对其相应的吸光度的对数进行直线回归，相关系数应不低于 0.99；然 后将供试品溶液吸光度的对数值代入回归方程，求得值的反对数，再乘以稀释 倍数，求取每 1ml 供试品溶液 IgG 含量(g/L)，再由供试品各稀释度 IgG 含量求平均值， 即为供试品 IgG 含量(g/L)。 【附注】 (1) 全部反应管必须在 10 分钟内测量完毕。 (2) 设置紫外分光光度计狭缝宽度(Slit Width)为 2nm。 (3) 每次测定可根据供试品 IgG 含量，适当调整标准品溶液中 IgG 含量范围。 页码数： 2005 版药典附录第 32 页 附录ⅥF 0 一乙酰基测 定法 试剂 (1)2mol／L 盐酸羟胺溶液 称取盐酸羟胺 13．9g，加水溶解并稀释至 lOO ml，冷处保存。 (2)3．5mol／L 氢氧化钠溶液称取氢氧化钠 14．Og，加水使溶解并稀释至 100ml。 (3)4mol／L 盐酸溶液量取盐酸 33．3ml，加水稀释至 lOOml 的溶液。 (4)0．37mol／L 三氯化铁一盐酸溶液 称取三氯化铁(FeCl3·6H20)10．Og，加 O．1mol／L 盐酸溶液溶解并稀释至 100ml。 (5)碱性羟胺溶液 取等体积的盐酸羟胺溶液(2mol／L)与氢氧化钠溶液 (3．5mol／L)混合。3 小时内使用。 对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱 22．7mg(或溴化乙 酰胆碱 28．3mg)，置 50ml 量瓶中，加 0．001mol／L 醋酸钠溶液(pH4．5)溶解并稀释 至刻度，摇匀。 供试品溶液的制备 取供试品，用水稀释成 O-乙酰基浓度为 O．5～2．5mmol／L 的溶液。 测定法精密量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)对照品溶液 O．2ml、0．4ml、 O．6ml、O．8ml、1_Oml，分别置试管中，补加水至 lml，加新鲜配制的碱性羟胺 溶液 2ml，摇匀，于室温放置 4 分钟，加 4mol／L 盐酸 lml，调 pH 值至 1．2±O．2，摇 匀，加 O．37mol／L 三氯化铁一盐酸溶液 lml，摇匀，照紫外一可见分光光度法(附 录ⅡA)，在波长 540nm 处测定吸光度。另精密量取上述相应的系列对照品溶液， 自“补加水至 lml※’起，除加酸与加碱性羟胺的次序颠倒外，同法操作，用作对应 的空白对照。 精密量取供试品溶液 Iml 置试管中，自“加新鲜配制的碱性羟胺溶液 2ml※’起，同 法操作。并取供试品溶液 Iml，同法操作，用作供试品的空白对照。 将标准管各吸光度分别减去相应的空白对照管的吸光度，以标准管中所含的 对照品溶液的体积与对应的吸光度作直线回归，将供试品的吸光度减去供试品 溶液空白吸光度代入直线回归方程，计算出每 Iml 供试品相当于对照品溶液的体 积(E，m1)。 供试品中 O-乙酰基含量(mm01／L)=E×2．5 式中 2．5 为对照品溶液中乙酰胆碱的 含量(mmol／L)