开始被广泛应用于肿瘤临床检测和科学研究中。 数字PCR(Digitai PCR,dPCR)是一种新兴的核酸检测技术.通过将每个核酸分子分配到 避免选择性扩增对 扩增结果的干扰， 皮独之的是、pA甲基化因功电手字P阳R真 可实现核酸模板绝对定量 稀有突 量分析，被称为第三代PCR。 数字PCR原理图 Ao医，世象 通过稀释样品DNA到对应的检测孔中，经过PCR扩增之后，向每个孔里加入特异性荧光 探针与产物杂交，然后直接计数样本中突变型和野生型等位子的数量。dPCR常用于大量正 常细胞群中检测少数含突变的细胞，主要应用于突变分析、等位基因缺失、混杂DNA的 症检测等 三代PCR的技术优劣 方 技术优点 技术缺点 ①最初的PCR技术所采用的核酸染料 会对实验人员和环境造成伤害 -种用于放大护增特定的DNA 第一代 ②PR完成之后需要开盖检测 PCR 片段的分子生物学技术，可看价 容易发生污染造成假阳性结米 是生物体外的特珠DNA复制 ③检测耗时长，操作麻烦，客易出错 ④只能做定性检测 ①不同厂家的试剂和设备所产生的Cg值 ①污染风险低 有一定差异，不具可比性 第二代 ②操作流程更简单、经济高效 ②存在背景值影响，结果易产生偏差 q-PCR ③样品加样量少 ③低拷贝DNA往往难以检测 ④当反应体系中有PCR抑制物存在时 常规的PCR体系经常会受到影响 ①灵敏度更高：d-PCR将传筑 ①模板虞量要求较高：dPCR的模板量超过 PCR反应分割成了数万个体系 强体系量会导致无法定量，过少会导致信号 这些体系独立扩增与检测 过低，降低定量准确度 第三代 ②定量更准确 ②非特异性产物的判断：无论PCR产物是 d-PCR ③抗干扰能力更强：dPCR检测 是特异性产物，只要荧光信号足够强，也 的是修点荧光，即使微体系销假 影响，也不影响最终结果的判读 是会刺黄为阳生结菜，司先是的别的赞 异性要求极高。开始被广泛应用于肿瘤临床检测和科学研究中。 数字 PCR（Digitai PCR， dPCR）是一种新兴的核酸检测技术，通过将每个核酸分子分配到 一个独立的空间内，避免选择性扩增对扩增结果的干扰，可实现核酸模板绝对定量、稀有突 变检测、拷贝数变异、DNA 甲基化、基因重排等检测功能。由于数字 PCR 可以实现直接定 量分析，被称为第三代 PCR。 数字 PCR 原理图 通过稀释样品 DNA 到对应的检测孔中，经过 PCR 扩增之后，向每个孔里加入特异性荧光 探针与产物杂交，然后直接计数样本中突变型和野生型等位子的数量。dPCR 常用于大量正 常细胞群中检测少数含突变的细胞，主要应用于突变分析、等位基因缺失、 混杂 DNA 的 癌症检测等等。 三代 PCR 的技术优劣