A)SYBR Green I assay B)TaqMan assay 00 Denaturation 00 Annealing @◆ rter signa Extension SYBR en I dye Tag Tag DNA polymerase ●TaqMan probe 应用荧光染料：SYBR green:在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光 染料特异性地掺入DNA双链后 发射荧光信号 而不掺入链中的SYBR染料分子不会发 射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PC产物的增加完全同步。 应用特异标记探针：Tagman Probe:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的 荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。 探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收：PCR扩增时，Tg酶的5-3 外切酶活性将探针酶切降解 ,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接 收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR产物形成完全同步。 荧光染料VS荧光採针 方法 SYBR green Taqman Probe 特点 灵敏度高：使用SYBR可使荧光 具有高适应性和可靠性 实验结米稳定重复性好 放果增强到1000倍以上 特异性更高 适用于扩增序列专一的体系检测、 不雪要设计探针 通用性 方法简便，省时，价格低 靶基因会量过低的定量PCR检测、存在 与靶基因同源序列，易出现非特异性打 在国内外科研中普通使用 增，对特异性要求较高的定量检测 广泛用于传染病珍断和病原定量 含适用子高通量大规模或专一 动物病原体基因的检测 适用场 要求不高的定量PCR检测 生物制品的要定 随着PCR系统的进一步发展已经对检测，一种具备较高灵敏度和特异性的数字PCR技术 应用荧光染料：SYBR green：在 PCR 反应体系中，加入过量 SYBR 荧光染料， SYBR 荧光 染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发 射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。 应用特异标记探针：Taqman Probe：PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的 荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭 荧光基团。 探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR 扩增时，Taq 酶的 5’-3’ 外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接 收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步。 荧光染料 VS 荧光探针 随着 PCR 系统的进一步发展已经对检测，一种具备较高灵敏度和特异性的数字 PCR 技术