相比，分离效果和图谱面貌有很大差别。温度的影响首先在于展开剂中各有机溶剂因沸点、蒸气 压、蒸发数量、相对密度等不同而蒸发程度各异，因而在展开箱的空间分布的展开剂组成中各有机 溶剂的蒸气比例也发生变化，必然直接影响到欲分离物质的层析行为。 其次 由于温度的变化，含 水的两相展开剂在放置分层过程或展开时有机相中水的比例他不同，从而不同程度地改变了展开剂 的极性，结果影响到色谱的分离度。三七总皂苷的薄层鉴别，当用氯仿-甲醇-水(65：35：10)的下层 溶液作展开剂，在硅胶高效预制板(MERCK)上，于常温展开时，三七皂苷R1与人参皂苷Re不能分 开，只有在低于10℃下展开，才能将二者分离。 ()影响薄层色谱的其他因素：除上述主要影响因素外，操作技巧和熟练程度以及所用的器材溶剂 试剂等的质量也是不可忽视的影响薄层色谱质量的因素。如选用了不合规格的预制板，所得的图谱 是扭曲变形的色谱。 同样 手铺的自 板如板面不均匀 也不可能得到质量好的色谱 壁如用不合 格的手铺自制板所得到的人参皂苷的薄层色谱是 个难以辨认的图谱。 展开剂所用的溶剂质量不好，也直接影响薄层色谱的分离能力，如大黄的薄层色谱分析用的展开 剂中的甲酸乙酯，遇水容易引起水解，如用多次开瓶的残存溶剂， 因逐渐吸收大气中的水分而不同 程度地分解，所得的色谱与用新鲜的溶剂所得的色谱有明显的差别，即用了陈旧的甲酸乙酯作展开 剂组分，色谱中的原来可明显分离的五个葱醌苷元分离降低，芦荟大黄素与大黄酸已不能分开。所 以，在遇到意想不到的结果时，应多方面的检查原因。 三)高效液相色谱法 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流 动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离 后，依次进入金侧器，色谱信号由记录仪或积分议记录 1.对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分依供试品的 性质而定。常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛 基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃 微球等，用于分子排阻色谱等。 注样最 一般为数微升，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器 用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法对溶剂的要求。如依照药 对药材及其制 剂进行鉴别时，其固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，而如色谱柱内径、长 度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵 敏度等，均可适当改变以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。 一般色谱图约于20分钟内记 录完毕。 2.色谱条件与系统运用性试验对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调 整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子 (1)色谱柱的理论板数()：在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种规定的内标物质溶液，记录 色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和 半高峰宽Wh/2),按n=5.54tRWh/2)2i计 算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项 下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件如柱长，载体性能，色谱柱充填料的优劣等)，使 理论板数达到要求， (②)分离度：定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度， 如图6-2分离度(R)的十算公式为： R=2(tR2-tR1)/W1+W2 式中：R2为相邻两峰中后一峰的保留时间 tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间： W1及W2为相邻两峰的峰宽。 除另外有规定外，分离度应大于1.5. 图6-2计算分离度示意图 相比，分离效果和图谱面貌有很大差别。温度的影响首先在于展开剂中各有机溶剂因沸点、蒸气 压、蒸发数量、相对密度等不同而蒸发程度各异，因而在展开箱的空间分布的展开剂组成中各有机 溶剂的蒸气比例也发生变化，必然直接影响到欲分离物质的层析行为。其次，由于温度的变化，含 水的两相展开剂在放置分层过程或展开时有机相中水的比例也不同，从而不同程度地改变了展开剂 的极性，结果影响到色谱的分离度。三七总皂苷的薄层鉴别，当用氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层 溶液作展开剂，在硅胶高效预制板(MERCK)上，于常温展开时，三七皂苷R1与人参皂苷Re不能分 开，只有在低于10℃下展开，才能将二者分离。 (7)影响薄层色谱的其他因素：除上述主要影响因素外，操作技巧和熟练程度以及所用的器材溶剂 试剂等的质量也是不可忽视的影响薄层色谱质量的因素。如选用了不合规格的预制板，所得的图谱 是扭曲变形的色谱。同样，手铺的自制板如板面不均匀，也不可能得到质量好的色谱，譬如用不合 格的手铺自制板所得到的人参皂苷的薄层色谱是一个难以辨认的图谱。 展开剂所用的溶剂质量不好，也直接影响薄层色谱的分离能力，如大黄的薄层色谱分析用的展开 剂中的甲酸乙酯，遇水容易引起水解，如用多次开瓶的残存溶剂，因逐渐吸收大气中的水分而不同 程度地分解，所得的色谱与用新鲜的溶剂所得的色谱有明显的差别，即用了陈旧的甲酸乙酯作展开 剂组分，色谱中的原来可明显分离的五个蒽醌苷元分离降低，芦荟大黄素与大黄酸已不能分开。所 以，在遇到意想不到的结果时，应多方面的检查原因。 (三)高效液相色谱法 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流 动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离 后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 1．对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分依供试品的 性质而定。常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛 基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃 微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。当 用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法对溶剂的要求。如依照药典对药材及其制 剂进行鉴别时，其固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，而如色谱柱内径、长 度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵 敏度等，均可适当改变以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记 录完毕。 2．色谱条件与系统运用性试验 对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调 整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。 (1)色谱柱的理论板数(n)：在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种规定的内标物质溶液，记录 色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计，下同，但应取相同单位)和 半高峰宽(Wh／2)，按n＝5.54(tRWh／2)2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项 下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件(如柱长，载体性能，色谱柱充填料的优劣等)，使 理论板数达到要求。 (2) 分离度：定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度， 如图6-2分离度(R)的计算公式为： R=2（tR2－tR1）/ W1＋W2 式中：tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为相邻两峰的峰宽。 除另外有规定外，分离度应大于1.5。 图6-2 计算分离度示意图