总论 实验进行之前，应认真预习，明确实验的要求和内容，思考合理的实验程序，合理安排时间，操 作要认真、准确、规范，培养实事求是的作风和严谨的科学态度。实验报告书写要认真，注意实验 室的安全和整洁 第一章中药鉴定的依据 《中华人民共和国药典》简称《中国药典》，是国家的药品法典，也是国家对药品质量标准及其检 验方法所作的技术规定，全国的药品生产、供应、使用、检验和管理部门共同遵循的法定依据。药 材记载格式和规定项目如下： 中文名 汉语拼音 拉丁名 科名、植（动物名、学名、药用部分、采收、产地加工 性状 鉴别：经验鉴别 显微鉴别 理化鉴别：化学试验、荧光现象、升华现象、色谱分析、光谱分析 检查：水分测定，灰分测定，杂质检查，膨胀度测定，吸收度测定，色度比较，p州比较，不挥发 物、砷盐、铜盐、镁盐、铁盐、锌盐、重金属等及干燥失重吸水量、体积比等的测定。 浸出物测定：水浸出物、醇浸出物等 含量测定：挥发油、生物碱、苷类等 炮制：加工切制炮炙.炮制品 性味与归经 功能与主治 用法与用量 注意：用药注意事项 贮藏 此外，尚有《中华人民共和国卫生部药品标准》，简称《部颁标准》和《中华人民共和国进口药材 部标准》，是补充在同时期该版药典中尚未收载的品种和内容，如和药典不一致，应以药典为准， 它也具有一定的法律性质；对药典收载的药材及成方制剂等，均应按照规定的方法进行检验。 第二章药材鉴定取样法 药材取样法指选取供鉴定用药材样品的方法。取样的代表性直接影响到鉴定结果的正确性。因 此，必须重视取样的各个环节。 取样前，应注意品名、 产地、规格等级及包件式样是否一致，检查包装的完整 清洁程度 以及有无水迹、霉变或淇他物质污染等情况，详细记录。凡有异常情况的包件，应单独检验 二、从同批药材包件中抽取检定用样品，原则如下： 药材总包件数在100件以下的，取样5件：100~1000件，按5%取样；超过1000件的，超过部分按 1%取样；不足5件的，逐件取样；贵重药材，不论包件多少均逐件取样
总 论 实验进行之前，应认真预习，明确实验的要求和内容，思考合理的实验程序，合理安排时间，操 作要认真、准确、规范，培养实事求是的作风和严谨的科学态度。实验报告书写要认真，注意实验 室的安全和整洁。 第一章 中药鉴定的依据 《中华人民共和国药典》简称《中国药典》，是国家的药品法典，也是国家对药品质量标准及其检 验方法所作的技术规定，全国的药品生产、供应、使用、检验和管理部门共同遵循的法定依据。药 材记载格式和规定项目如下： 中文名 汉语拼音 拉丁名 科名、植(动)物名、学名、药用部分、采收、产地加工 性状 鉴别：经验鉴别 显微鉴别 理化鉴别：化学试验、荧光现象、升华现象、色谱分析、光谱分析 检查：水分测定，灰分测定，杂质检查，膨胀度测定，吸收度测定，色度比较，pH比较，不挥发 物、砷盐、铜盐、镁盐、铁盐、锌盐、重金属等及干燥失重吸水量、体积比等的测定。 浸出物测定：水浸出物、醇浸出物等 含量测定：挥发油、生物碱、苷类等 炮制：加工、切制、炮炙、炮制品 性味与归经 功能与主治 用法与用量 注意：用药注意事项 贮藏 此外，尚有《中华人民共和国卫生部药品标准》，简称《部颁标准》和《中华人民共和国进口药材 部标准》，是补充在同时期该版药典中尚未收载的品种和内容，如和药典不一致，应以药典为准， 它也具有一定的法律性质;对药典收载的药材及成方制剂等，均应按照规定的方法进行检验。 第二章 药材鉴定取样法 药材取样法指选取供鉴定用药材样品的方法。取样的代表性直接影响到鉴定结果的正确性。因 此，必须重视取样的各个环节。 一、取样前，应注意品名、产地、规格等级及包件式样是否一致，检查包装的完整性、清洁程度 以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况，详细记录。凡有异常情况的包件，应单独检验。 二、从同批药材包件中抽取检定用样品，原则如下： 药材总包件数在100件以下的，取样5件；100～1000件，按5%取样；超过1000件的，超过部分按 1%取样；不足5件的，逐件取样；贵重药材,不论包件多少均逐件取样
三、对破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的药材，可用采样器探子)抽取样品，每一包件至少在 不同部位抽取2一3份样品，包件少的抽取总量应不少于实验用量的3倍；包件多的，每一包件的取样 量一般按下列规定 般药材100 00g;粉末状药材25g; 贵重药材5~10g;个头大的药材，根据 实际情况抽取代表性的样品。如药材的个体较大时，可在包件不同部位（包件大的应从10cm以下的深 处)分别抽取。 四、将所取样品混和拌匀，即为总样品。对个较小的药材，应摊成正方形；依对角线划“ד字，使 分为四等分，取用对角两份；再如上操作，反复数次至最后剩余的量足够完成所有必要的试验以及留 样数为止，此为平均样品。个体大的药材，可用其他适当方法取平均样品。平均样品的量一般不得 少于实验所需量的3倍数 ,即13供实验室分析用，另13供复核用，其余13则为留样保存，保存期至 少1年」 第三章药材来源鉴定法 药材来源鉴定法是应用植物学或动物学或矿物学分类知识，对中药的来源进行鉴定，确定其正确 的学名，以保证在应用中品种准确无误。 观察原植物标本，应注意根、茎、叶、花、果实、种子等的特征，特别是花、果实、种子、孢子 子实体等繁殖器官，需进行解剖，利用放大镜或解剖镜仔细观察，参阅有关植物分类学专著，必要 时可到标本室核对标本或到实地采集标本进行对照鉴别。有些植物的根、茎、叶，会受生长环境或 栽培技术的影响其形态发生较大的改变，如采用扦插法栽培的防风，根粗大、多分枝，形似当归，完 全失去了原有的防风形态， 进行鉴定时应引起注意。有时待鉴药材还应了解产地、生境、效用等信 息资料，综合分析对照，以利于正确判断品种。 原动物的鉴定步骤与原植物的鉴定类同。 原矿物则运用矿物学的知识进行分类鉴定。 第四章药材性状鉴定法 药材的性状系指药材的形状、大小、色泽、表面特征、质地、断面（包括折断面或切断面特征及气 味等。不同的药材，都有其特有的性状，利用感观，仔细辨认，能够较快的鉴别药材的真伪，此法 简便、易行。 一浸建使蕊器的态。赛时一校不需处理如观赛很护缩的全草叶或花类。可先一 观察某些果实、种子时，如有必要可浸软后，取下果皮或种皮，以观察内部待 2.大小指药材的长短、粗细（值径）和厚度，测量时多用毫米刻度尺，对细小的种子， 可放在有毫 米方格线的纸上，每10粒种子为一组，紧密排列成一行，测量后求其平均值。果实和种子类药材其 大小相对稳定，目前商品中根和根茎类药材，大小差异很大，很难达到药典规定的数值。 3.色泽药材的色泽一般应在日光灯下或常光下观 。如用两种色调复合描述色泽时，以后一种 色调为主，如黄棕色，以棕色为主。药材的色泽不但帮助鉴别真伪，其色泽的深浅，有时也反映其 质量的优劣，如紫草，深紫色者，紫草素含量较高。 4.表面特征观察时样品不作予处理，直接观察，或借助于放大镜观察。叶、花或草类药材皱缩 不易观察者，可水浸舒张开后观察，但应注意不可把表面的附属物处理掉，如毛茸、蜡被等。观察 表面特征时，特别是附属物，要注意其颜色、形状、纹理分布等特点。必要时可对光透视。 5.质地指药材的软硬、坚韧、疏松、致密、粘性或粉性等，样品不作预处理，软硬、坚韧多凭 手的感觉而定，疏松、致密、粘性、粉性等全靠眼睛的仔细观察。 6.断面包括折断时的现象和平整横切面的纹理特征。样品不做预处理。样品是否易折断，折断 时有无粉尘，折断面的现象和纹理，如纹理不易观察，可用刀削平整后进行观察，必要时可将样品 切面湿润后使 些特征显示的更清楚.再进行观察。如各类贯众叶柄残基分体中柱数和排列情况的 观察
三、对破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的药材，可用采样器(探子)抽取样品，每一包件至少在 不同部位抽取2～3份样品，包件少的抽取总量应不少于实验用量的3倍；包件多的，每一包件的取样 量一般按下列规定：一般药材100～500g；粉末状药材25g；贵重药材5～10g；个头大的药材，根据 实际情况抽取代表性的样品。如药材的个体较大时，可在包件不同部位(包件大的应从10cm以下的深 处)分别抽取。 四、将所取样品混和拌匀，即为总样品。对个较小的药材，应摊成正方形；依对角线划"×"字，使 分为四等分,取用对角两份；再如上操作，反复数次至最后剩余的量足够完成所有必要的试验以及留 样数为止，此为平均样品。个体大的药材，可用其他适当方法取平均样品。平均样品的量一般不得 少于实验所需量的3倍数，即1/3供实验室分析用，另1/3供复核用，其余1/3则为留样保存，保存期至 少1年。 第三章 药材来源鉴定法 药材来源鉴定法是应用植物学或动物学或矿物学分类知识，对中药的来源进行鉴定，确定其正确 的学名，以保证在应用中品种准确无误。 观察原植物标本，应注意根、茎、叶、花、果实、种子等的特征，特别是花、果实、种子、孢子、 子实体等繁殖器官，需进行解剖，利用放大镜或解剖镜仔细观察，参阅有关植物分类学专著，必要 时可到标本室核对标本或到实地采集标本进行对照鉴别。有些植物的根、茎、叶，会受生长环境或 栽培技术的影响,其形态发生较大的改变，如采用扦插法栽培的防风，根粗大、多分枝，形似当归,完 全失去了原有的防风形态，进行鉴定时应引起注意。有时待鉴药材还应了解产地、生境、效用等信 息资料，综合分析对照，以利于正确判断品种。 原动物的鉴定步骤与原植物的鉴定类同。 原矿物则运用矿物学的知识进行分类鉴定。 第四章 药材性状鉴定法 药材的性状系指药材的形状、大小、色泽、表面特征、质地、断面(包括折断面或切断面)特征及气 味等。不同的药材，都有其特有的性状，利用感观，仔细辨认，能够较快的鉴别药材的真伪，此法 简便、易行。 1．形状 指干燥药材的形态。观察时一般不需要预处理，如观察很皱缩的全草、叶或花类，可先 浸湿使软化，展平。观察某些果实、种子时，如有必要可浸软后，取下果皮或种皮，以观察内部待 征。 2．大小 指药材的长短、粗细(直径)和厚度，测量时多用毫米刻度尺，对细小的种子，可放在有毫 米方格线的纸上，每10粒种子为一组，紧密排列成一行，测量后求其平均值。果实和种子类药材其 大小相对稳定，目前商品中根和根茎类药材，大小差异很大，很难达到药典规定的数值。 3．色泽 药材的色泽一般应在日光灯下或常光下观察。如用两种色调复合描述色泽时，以后一种 色调为主，如黄棕色，以棕色为主。药材的色泽不但帮助鉴别真伪，其色泽的深浅，有时也反映其 质量的优劣，如紫草，深紫色者，紫草素含量较高。 4．表面特征 观察时样品不作予处理，直接观察，或借助于放大镜观察。叶、花或草类药材皱缩 不易观察者，可水浸舒张开后观察，但应注意不可把表面的附属物处理掉，如毛茸、蜡被等。观察 表面特征时，特别是附属物，要注意其颜色、形状、纹理分布等特点。必要时可对光透视。 5．质地 指药材的软硬、坚韧、疏松、致密、粘性或粉性等，样品不作预处理，软硬、坚韧多凭 手的感觉而定，疏松、致密、粘性、粉性等全靠眼睛的仔细观察。 6．断面 包括折断时的现象和平整横切面的纹理特征。样品不做预处理。样品是否易折断，折断 时有无粉尘，折断面的现象和纹理，如纹理不易观察，可用刀削平整后进行观察，必要时可将样品 切面湿润后使一些特征显示的更清楚．再进行观察。如各类贯众叶柄残基分体中柱数和排列情况的 观察
7.气味是药材所含成分决定的，一般可直接嗅闻或口尝，有些药材气味较弱，常采用折断时或 搓揉时进行，也有的需用热水湿润后才能闻到，有些药材的味感需热水泡后尝浸出液才能辨别，有 毒药材如需尝味时，应立即嗽口，注意防止中毒 8.水试将药材浸泡到一定量的水中，观察其形态变化，沉或浮，水的颜色变化及出现的现象 等，有些药材需加热后观察如菟丝子的吐丝现象 9.火试将药材九加热或燃烧，观察产生的现象。如火上燃烧海金砂，有爆鸣声且有闪光，而血竭于 滤纸上烘烤，熔融呈血红色】 第五章药材显微鉴定法 药材显微鉴别是指用显微镜（包括生物显微镜、偏光显微镜、扫描电镜等）观察药材的组织切片、粉 末、解离组织或表面制片及成方制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征的一种方法。鉴别时选择 有代表性的样品，根据鉴定目的，制成合适的标本片进行观察，并将观察的特征绘制成图或制作显 微摄影图。 一、横切片或纵切片观察 制片方法见实验 ,观察时应自外向内仔细观察各组织分布的位置，细胞特点，细胞内含物 的类型及分布状况。总结共同点和不同点，找出鉴别的特征。一般多观察横切片，必要时制作纵切 片进行观察确证，如油室和油管的区分，针晶和砂晶的区分，间隙腺毛和薄壁细胞的区分。茜草的 壁细胞有的含针晶束，其针晶束和根的长轴平行排列，横切片观察，似砂晶，纵切片观察针晶的 特征很明显。广藿香间隙腺毛，只有纵切片时，才能清楚的辨别。 二、粉末制片观察 制片方法见实验 二。如观察淀粉粒等内含物的特点，应用甘油醋酸或稀甘油封片；如观察细胞 的特征，应用水合氯醛试液加热透化细胞壁，并溶去一些细胞内含物如淀粉粒、蛋白质、叶绿体、 挥发油等物质。进行粉末制片观察时，应上、下、左、右按顺序仔细观察，辨别鉴别特征。 三.表面制片观寥 制片方法见实验一。较满者材料可整体封藏，其它材料可撕取或削取表皮制片。斯取叶片时，先辨 明上、下表面，干材要温浸处理。 四、解离组织片观察 制片方法见实验三。将已离散或即将离散的材料置于载玻片上，按部位取材，另置载玻片上加甘油 溶液轻压使之散离， 后加盖玻片，可观察细胞的完整的形态。有的解离试液，能溶解一部分细胞内 含物，如草酸钙结晶体或碳酸钙结晶体等，操作时应引起注意。 五、显微化学法观察 细胞壁和细胞内含物的性质不完全一致，可用化学试液进行检定，以利中药的鉴别 (一细胞壁性质的检定 1.木栓化或角质化细胞壁多存于植物体的体表.如木栓层、表皮或表皮内方的数列细胞，加苏 丹Ⅲ试液，稍置或微热，显橘红色至红色。 2.木质化细胞壁多为厚壁组织如石细胞或纤维，木质部的输导组织如导管或管胞，有的射线细 胞或输导组织以外的细胞也木化。加间苯三酚试液1~2滴，稍置再滴加盐酸1滴，因木化程度不同， 显红色或紫红色。有时需稍加热，颜色才能显现。 3.纤维素细胞壁为薄壁细胞或韧皮部输导组织的细胞壁。加氯化锌碘试液；或先加碘试液湿润 后，稍放置，再加硫酸溶液(33-→50)；显蓝色或紫色。 4.粘液化细胞壁多存于表皮组织内。加钌红试液，显红色。 5.硅质化细胞壁多存于表皮组织内。加硫酸无变化。 (仁)细胞内含物性质的检定
7．气味 是药材所含成分决定的，一般可直接嗅闻或口尝，有些药材气味较弱，常采用折断时或 搓揉时进行，也有的需用热水湿润后才能闻到，有些药材的味感需热水泡后尝浸出液才能辨别，有 毒药材如需尝味时，应立即嗽口，注意防止中毒。 8．水试 将药材浸泡到一定量的水中，观察其形态变化，沉或浮，水的颜色变化及出现的现象 等，有些药材需加热后观察如菟丝子的吐丝现象。 9．火试 将药材加热或燃烧，观察产生的现象。如火上燃烧海金砂，有爆鸣声且有闪光，而血竭于 滤纸上烘烤，熔融呈血红色。 第五章 药材显微鉴定法 药材显微鉴别是指用显微镜(包括生物显微镜、偏光显微镜、扫描电镜等)观察药材的组织切片、粉 末、解离组织或表面制片及成方制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征的一种方法。鉴别时选择 有代表性的样品，根据鉴定目的，制成合适的标本片进行观察，并将观察的特征绘制成图或制作显 微摄影图。 一、横切片或纵切片观察 制片方法见实验一、二。观察时应自外向内仔细观察各组织分布的位置，细胞特点，细胞内含物 的类型及分布状况。总结共同点和不同点，找出鉴别的特征。一般多观察横切片，必要时制作纵切 片进行观察确证，如油室和油管的区分，针晶和砂晶的区分，间隙腺毛和薄壁细胞的区分。茜草的 薄壁细胞有的含针晶束，其针晶束和根的长轴平行排列，横切片观察，似砂晶，纵切片观察针晶的 特征很明显。广藿香间隙腺毛，只有纵切片时，才能清楚的辨别。 二、粉末制片观察 制片方法见实验一、二。如观察淀粉粒等内含物的特点，应用甘油醋酸或稀甘油封片；如观察细胞 的特征，应用水合氯醛试液加热透化细胞壁，并溶去一些细胞内含物如淀粉粒、蛋白质、叶绿体、 挥发油等物质。进行粉末制片观察时，应上、下、左、右按顺序仔细观察，辨别鉴别特征。 三、表面制片观察 制片方法见实验一。较薄者材料可整体封藏，其它材料可撕取或削取表皮制片。撕取叶片时，先辨 明上、下表面，干材要温浸处理。 四、解离组织片观察 制片方法见实验三。将已离散或即将离散的材料置于载玻片上，按部位取材，另置载玻片上加甘油 溶液轻压使之散离，后加盖玻片，可观察细胞的完整的形态。有的解离试液，能溶解一部分细胞内 含物，如草酸钙结晶体或碳酸钙结晶体等，操作时应引起注意。 五、显微化学法观察 细胞壁和细胞内含物的性质不完全一致，可用化学试液进行检定，以利中药的鉴别。 (一)细胞壁性质的检定 1．木栓化或角质化细胞壁 多存于植物体的体表．如木栓层、表皮或表皮内方的数列细胞，加苏 丹Ⅲ试液，稍置或微热，显橘红色至红色。 2．木质化细胞壁 多为厚壁组织如石细胞或纤维，木质部的输导组织如导管或管胞，有的射线细 胞或输导组织以外的细胞也木化。加间苯三酚试液1～2滴，稍置再滴加盐酸1滴，因木化程度不同， 显红色或紫红色。有时需稍加热，颜色才能显现。 3．纤维素细胞壁 为薄壁细胞或韧皮部输导组织的细胞壁。加氯化锌碘试液；或先加碘试液湿润 后，稍放置，再加硫酸溶液(33→50)；显蓝色或紫色。 4．粘液化细胞壁 多存于表皮组织内。加钌红试液，显红色。 5．硅质化细胞壁 多存于表皮组织内。加硫酸无变化。 (二)细胞内含物性质的检定
1.淀粉粒属碳水化台物。加碘试液显蓝色或紫色。如用甘油醋酸试液装片置偏光显微镜下观 察，未糊化的淀粉粒显偏光现象，已糊化的淀粉粒无偏光现象。 2.糊粉粒为贮藏蛋白质。加碘试液，显棕色或黄棕色。加硝酸汞试液，显砖红色。材料中如含 有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验 3.脂肪油、挥发油或树脂加苏丹Ⅲ试液显橘红色、红色或紫红色。加90%乙醇，脂肪油不溶解 (蓖麻油和巴豆油例外)，挥发油则溶解。 4.菊糖菊糖多溶于水，观察时宜用70%乙醇或水合氯醛试液冷处理材料后，方可析出菊糖结 晶。加10%α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并很快溶解。 5.粘液加钌红试液，显红色。 6.草酸钙结晶加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。加硫酸溶液(1一→2)，逐渐溶解 片刻后，析出针状硫酸西结晶。 7.碳酸钙结晶（钟乳体）加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。 8.硅质加硫酸不溶解，加氢氟酸则溶解，使用氢氟酸时，应注意保护物镜 (三)组织内所含化学成分的检定 可将材料切片或取粉末滴加试剂后置显微镜下观察，也可将提取液滴加试剂后，显微镜下观察。 如丁香花萼横切片，滴加3%氢氧化钠的氯化钠饱和溶液1滴，加盖玻片，油室内可见簇状细针形灯 香酚钠结晶，黄连粉未于载玻片上，滴加乙醇后即可加新配制的30%硝酸溶液1滴，加盖玻片，放置 原务 ,槟榔的酸性水提取液滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1滴，置 六、由粉末药材制成的成方制剂的鉴别 散剂按粉未制片法制片观察；丸剂、片剂等，可取2~3丸（片）研细后，取少量样品，滴加一定的试 液，搅拌均匀，使粘结的细胞、组织散离，再按粉未特征进行鉴别：蜜丸可直接挑取少量样品制 片，或酌用热水洗脱蜜后制片观察 第六章药材理化鉴定法 理化鉴别是指用化学或物理的方法，对药材中所含某些化学成分进行的鉴别实验，以鉴别药材的 真伪、纯度和质量的优劣。 显色后应 药材中的某些化学成分与一定的试剂产生颜色反应。可以用药材的切片或粉末直接进行，如将番 木鳖横剖开，于剖面上滴加1%钒酸铵的硫酸溶液，胚乳部分即显紫色（示番木鳖碱；也可用提取液 进行，如知母乙醇提取液于水浴上蒸干，残渣加浓硫酸2 初显黄 继变红色、紫革色，最后 棕色（示甾体化合物）。 二、沉淀反应 药材中的某些成分，特别是含生物碱类的成分，与某些试剂产生不同颜色的沉淀反应，如延胡索 稀醋酸提取液，加碘化汞钾试液，产生淡黄色沉淀（示生物碱）：地榆乙醇提取液，用氨试液调H8、 9,即有沉淀产生，将沉淀物溶于水，滴加1%三氯化铁试液，则呈蓝黑色（示鞣质） 二带光法 中药材中的某些化学成分，能在常光或紫外光下产生荧光现象。将药材（包括断面、浸出物等）或经 酸、碱处理后，置紫外灯下约10cm处观察所产生的荧光。除另有规定外，紫外光灯的波长为 365m。如黄连饮片在紫外灯下显金黄色荧光，木质部尤为显著，而浙贝母粉末显亮淡绿色荧光 秦皮的水浸液在常光下显淡蓝色荧光 ，芦荟水溶液需加硼砂共热才有绿色荧头 此外，可利用荧斗 显微镜鉴别药材，如苍术粉末中少数颗粒显海天蓝色荧光：白术粉末显芒果黄色，少数颗粒呈初熟 否苗色荧光。 药材表面如附有地衣或有某些霉菌和霉菌素时，也会有荧光现象，应注意区别
1．淀粉粒 属碳水化台物。加碘试液显蓝色或紫色。如用甘油醋酸试液装片置偏光显微镜下观 察，未糊化的淀粉粒显偏光现象，已糊化的淀粉粒无偏光现象。 2．糊粉粒 为贮藏蛋白质。加碘试液，显棕色或黄棕色。加硝酸汞试液，显砖红色。材料中如含 有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验。 3．脂肪油、挥发油或树脂 加苏丹Ⅲ试液显橘红色、红色或紫红色。加90％乙醇，脂肪油不溶解 (蓖麻油和巴豆油例外)，挥发油则溶解。 4．菊糖 菊糖多溶于水，观察时宜用70％乙醇或水合氯醛试液冷处理材料后，方可析出菊糖结 晶。加10％α-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并很快溶解。 5．粘液 加钌红试液，显红色。 6．草酸钙结晶 加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。加硫酸溶液(1→2)，逐渐溶解， 片刻后，析出针状硫酸钙结晶。 7．碳酸钙结晶(钟乳体) 加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。 8．硅质 加硫酸不溶解，加氢氟酸则溶解，使用氢氟酸时，应注意保护物镜。 (三)组织内所含化学成分的检定 可将材料切片或取粉末滴加试剂后置显微镜下观察，也可将提取液滴加试剂后，显微镜下观察。 如丁香花萼横切片，滴加3％氢氧化钠的氯化钠饱和溶液1滴，加盖玻片，油室内可见簇状细针形丁 香酚钠结晶，黄连粉末于载玻片上，滴加乙醇后即可加新配制的30％硝酸溶液1滴，加盖玻片，放置 片刻即可见针形簇状硝酸小檗碱结晶。槟榔的酸性水提取液滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1滴，置 显微镜下可见到石榴红色的球晶或方晶。 六、由粉末药材制成的成方制剂的鉴别 散剂按粉末制片法制片观察；丸剂、片剂等，可取2～3丸(片)研细后，取少量样品，滴加一定的试 液，搅拌均匀，使粘结的细胞、组织散离，再按粉末特征进行鉴别；蜜丸可直接挑取少量样品制 片，或酌用热水洗脱蜜后制片观察。 第六章 药材理化鉴定法 理化鉴别是指用化学或物理的方法，对药材中所含某些化学成分进行的鉴别实验，以鉴别药材的 真伪、纯度和质量的优劣。 一、显色反应 药材中的某些化学成分与一定的试剂产生颜色反应。可以用药材的切片或粉末直接进行，如将番 木鳖横剖开，于剖面上滴加1％钒酸铵的硫酸溶液，胚乳部分即显紫色(示番木鳖碱)；也可用提取液 进行，如知母乙醇提取液于水浴上蒸干，残渣加浓硫酸2滴，初显黄色，继变红色、紫堇色，最后呈 棕色(示甾体化合物)。 二、沉淀反应 药材中的某些成分，特别是含生物碱类的成分，与某些试剂产生不同颜色的沉淀反应，如延胡索 稀醋酸提取液，加碘化汞钾试液，产生淡黄色沉淀(示生物碱)；地榆乙醇提取液，用氨试液调pH 8～ 9，即有沉淀产生，将沉淀物溶于水，滴加1％三氯化铁试液，则呈蓝黑色(示鞣质)。 三、荧光法 中药材中的某些化学成分，能在常光或紫外光下产生荧光现象。将药材(包括断面、浸出物等)或经 酸、碱处理后，置紫外灯下约10cm处观察所产生的荧光。除另有规定外，紫外光灯的波长为 365nm。如黄连饮片在紫外灯下显金黄色荧光，木质部尤为显著，而浙贝母粉末显亮淡绿色荧光， 秦皮的水浸液在常光下显淡蓝色荧光。芦荟水溶液需加硼砂共热才有绿色荧光。此外，可利用荧光 显微镜鉴别药材，如苍术粉末中少数颗粒显海天蓝色荧光；白术粉末显芒果黄色，少数颗粒呈初熟 杏黄色荧光。 药材表面如附有地衣或有某些霉菌和霉菌素时，也会有荧光现象，应注意区别
四、微量升华法 药材中有些成分，在一定的温度下可以升华凝聚成一定的结晶体。如大黄粉末在酒精灯上加热有 升华物产生，低温时呈黄色针状结晶，高温时呈片状和羽状结晶。黄色结晶体遇氢氧化钾试液，溶 解呈红色。 五。分光光度法 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定 量分析的方法。 一般常用波长为：200~400nm的紫外光区，400~760nm的可见光区，2.5~25μm(或按波数计 为4000cm-1~400cm-1)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或批色计）、 红外分光光度计或原子吸收分光光度计。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的长度（光路长度）成正 比.其关系如下式： A=log-1T=ECI 式中：A为吸收度 T为透光率； E为吸收系数，采用的表示方法是(!EMBED PBrush),即吸收度换筒成溶液农度为1% (g/ml,液层厚度为1cm的数值； C为100ml溶液中所含物质的重量(g,按干燥品或无水物计算)， 为液层厚度(cm)。 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定 条件下的吸收系数后 ,可用同样条件将该供试品配成溶液 测定其吸收度，即可由上式计算出供试 品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在 定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅 的因素交多，目常使用单色光纯度较差的仪器，故侧定时应用标准品或对照品同时时操作。 (一)紫外分光光度法 1.仪器的校正和检定由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常台 会略有变动，因此除应 定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线 237.83、253.65、275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07与 576.96nm,或用仪器中氘灯的486.02与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4、287.5、 3337360q 4189 460.0、484.5、536.2与637.5nm 波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用 但因来源不同会有微小的差别，使用时应注意。 吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60m( 密称定 用0.005m L的硫酸溶液溶解并稀释至000ml,按下表规定的波长处测定并计算其吸收系 数。规定的吸收系数如下表，相对偏差可在±1%以内。 波长(nm) 235(最小) 257(最大)313（最小） 350(最大) 吸收系数！EMBED PBrush124.5 144.0 48.62 106.6 杂撒光的检查可按下表的试剂和浓度，配制成冰溶液，置1c石英吸收池中，在下表规定的波长处测 定透光度，应符合表中的规定。 0800
四、微量升华法 药材中有些成分，在一定的温度下可以升华凝聚成一定的结晶体。如大黄粉末在酒精灯上加热有 升华物产生，低温时呈黄色针状结晶，高温时呈片状和羽状结晶。黄色结晶体遇氢氧化钾试液，溶 解呈红色。 五、分光光度法 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定 量分析的方法。 一般常用波长为：200～400nm的紫外光区，400～760nm的可见光区，2．5～25μm(或按波数计 为4000cm-1～400cm-1)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、 红外分光光度计或原子吸收分光光度计。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的长度(光路长度)成正 比，其关系如下式； A＝log-1T=ECl 式中：A为吸收度； T为透光率； E为吸收系数，采用的表示方法是( EMBED PBrush )，即吸收度换算成溶液浓度为1％ (g/ml)，液层厚度为1cm的数值； C为100ml溶液中所含物质的重量(g，按干燥品或无水物计算)， l为液层厚度(cm)。 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定 条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度，即可由上式计算出供试 品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一 定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定，故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅 的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。 (一)紫外分光光度法 1．仪器的校正和检定 由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应 定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线 237.83、253.65、275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07与 576.96nm，或用仪器中氘灯的486．02与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在279.4、287.5、 333.7、360.9、418.9、460.0、484.5、536.2与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用， 但因来源不同会有微小的差别，使用时应注意。 吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精 密称定，用0.005mol／L的硫酸溶液溶解并稀释至l000ml，按下表规定的波长处测定并计算其吸收系 数。规定的吸收系数如下表，相对偏差可在±1％以内。 波长（nm） 235（最小） 257（最大） 313（最小） 350（最大） 吸收系数 EMBED PBrush 124.5 144.0 48.62 106.6 杂散光的检查可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在下表规定的波长处测 定透光度，应符合表中的规定。
试剂浓度%(gm)测定波长(nm)透光率% 碘化钠1.00% 220 <0.8 亚硝酸钠5.00% 280 <0.8 2.对溶剂的要求测定供试品前应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求；即用 m石英吸收池盛溶剂，以空 气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其 吸收度 溶剂和吸收池的 吸收度在220~240nm范围内不得超过0.40；在241~250nm范围内不得超过0.20；在251~300nm 范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。 3.测定法测定时，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规 定的吸收峰波长±2m以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，吸收峰 波长应在规定的波长2m以内，否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收 度最大的波长作为测定波长 般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3一0.7之间的误差较小。仪器的 狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半 否则测 吸收度会 低 狭缝宽度的选择， 应以减 小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池本身可能有空白吸收，因此测定供试品的 吸收度后应减去装有溶剂的吸收池在规定波长测得的吸收度，再计算含量。 紫外分光光度法可用于对药材及其制剂进行定性或定量实验，定性时吸收度读数范围可根据配制 供试液的准确度及制剂的实际含量确定。 用于含量测定的方法一般为： (1)对照品比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品 溶液中 被 成分标示量的10010% 所用溶剂也应完全 致，在规定的波长测定供试品溶液和对照 品溶液的吸收度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度： Ci=Ai Cr/Ar 式中：C为供试品溶液的浓度， A为供试品溶液的吸收度 C为对照品溶液的浓度； Ar为对照品溶液的吸收度。 (2)吸收系数法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收 系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 (3)计算分光光度法采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时应注意选择，当吸收度处在 吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽 可能一致。若测定时不用对照品，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。 二)北色法 用比色法测定时，应取对照品同时操作。比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供 试品溶液，依次加入相应的同体积的各种试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和 供试品溶液的吸收度后，按紫外分光光度法的对照品比较法计算式计算供试品浓度。 当吸收度和浓度关系不呈线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同 一体积，显色 后测定各份溶液的吸收度，然后以吸收度与相应浓度关系绘制标准曲线，再根据供试品的吸收度在 标准曲线上求出其含量。 (三)红外分光光度法 1.仪器的校正和检定绘制聚苯乙烯薄膜（厚度约为0.05mm)的光谱，用2851cm-1、1601cm-1、 1028cm-1、907cm-1处的吸收峰对仪器的波数进行校正，在2000~400cm-1区间允许相差±4cm-1 以内，在4000~2000cm-1区间允许相差±8cm-1以内. 上述光谱中，仪器的分辨率要求在3110~2850cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰，2924cm-1与 2851cm-1吸收带约分辨深度不小于18%透光率，1601cm-1与1583cm-1吸收带的分辨深度不小于 8%透光率
试剂 浓度%（g/ml） 测定波长（nm） 透光率% 碘化钠 1.00% 220 ＜0.8 亚硝酸钠 5.00% 280 ＜0.8 2．对溶剂的要求 测定供试品前应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求；即用 1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白(即空白光路中不置任何物质)测定其吸收度，溶剂和吸收池的 吸收度在220～240nm范围内不得超过0.40；在241～250nm范围内不得超过0.20；在251～300nm 范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过O.05。 3．测定法 测定时，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规 定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，吸收峰 波长应在规定的波长±2nm以内，否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收 度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。仪器的 狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减 小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池本身可能有空白吸收，因此测定供试品的 吸收度后应减去装有溶剂的吸收池在规定波长测得的吸收度，再计算含量。 紫外分光光度法可用于对药材及其制剂进行定性或定量实验，定性时吸收度读数范围可根据配制 供试液的准确度及制剂的实际含量确定。 用于含量测定的方法一般为； (1)对照品比较法 分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品 溶液中被测成分标示量的100±10％，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照 品溶液的吸收度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度： Ci= Ai Cr / Ar 式中：Ci为供试品溶液的浓度； Ai为供试品溶液的吸收度， Cr为对照品溶液的浓度； Ar为对照品溶液的吸收度。 (2)吸收系数法 配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收 系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 (3)计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时应注意选择，当吸收度处在 吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽 可能一致。若测定时不用对照品，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。 (二)比色法 用比色法测定时，应取对照品同时操作。比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供 试品溶液，依次加入相应的同体积的各种试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和 供试品溶液的吸收度后，按紫外分光光度法的对照品比较法计算式计算供试品浓度。 当吸收度和浓度关系不呈线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色 后测定各份溶液的吸收度，然后以吸收度与相应浓度关系绘制标准曲线，再根据供试品的吸收度在 标准曲线上求出其含量。 (三)红外分光光度法 1．仪器的校正和检定 绘制聚苯乙烯薄膜(厚度约为0.05mm)的光谱，用2851cm-1、1601cm-1、 1028cm-1、907cm-1 处的吸收峰对仪器的波数进行校正，在2000～400cm-1区间允许相差±4cm-1 以内，在4000～2000cm-1区间允许相差±8cm-1以内。 上述光谱中，仪器的分辨率要求在3110～2850cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰，2924cm-1与 2851cm-1吸收带约分辨深度不小于18％透光率，1601cm-1与1583cm-1吸收带的分辨深度不小于 8％透光率
2.试样的制备方法和测定按照中华人民共和国卫生部药典委员会编订的《药品红外光谱集》 2000年版)#行 如具有多晶现象的固体药品测定时，由于晶型可能不同，绘制的光谱图可能会发生 改变，应再绘制 由于各种型号的仪器性能不同，试样制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光 谱的形状。因此，进行光谱对比时 ，应考虑各种因素可能造成的影响】 (四)原子吸收分光光度法 由待测元素灯发出特征的谱线通过供试品蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，吸收遵 循一般分光光度法的吸收定律。通过测定辐射光强度减弱的程度可求出供试品中待测元素含量。通 常借比较标准品和供试品的吸收度，可求得样品中待测元素的含量。 原子吸收分光光度法所用仪器为原子吸收分光光度计，它由光源、原子化器、单色器和检测器等 部件组成。光源通常用待测作为阴极的空心阴极灯，原子化器由雾化器及燃烧灯头组成。燃烧火焰 气体混合 物立生 常用 空气快火 仪器某些工作条件如波长、狭缝、 业陌业T由 火焰状态的变化可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况。 用原子吸收分光光度计对中药材进行含量测定，有下列二法： 1,标准曲线法在议器准荐的浓度范围内，制备含待侧元素的标准溶液至少3份，农度浓次弟僧 并分别加入供试品溶液配制中的相应试剂。 船均用去离子水成水容液. 将仪器按规定启动后 去离子水喷入火焰， 调读数为零 ,再将最浓的标 维溶液喷入火馅 调节仪器至近满标度的 盛后依欢入信标在容液，数每院和份后，去子水态空 调零。取每一浓度3次读数的平均值，与相应浓度作标准曲线。 供试品溶液的制备应使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内，将供试品溶液喷入火焰，取3 次读数的平均值，从标准曲线上查得相应的农度，计元素的含量。 2. 标准加入法取同体积供试品溶液4份，分别加至4个同体积的量瓶中 除(1)号量瓶外，其他(2) (3)、(4)号量瓶分别再准确加入比例量的待测元素标准液，均用去离子水稀释至刻度，形成标准液加 入量从零开始递增的一系列溶液。按上述标准曲线法自"将仪器按规定启动后"操作，并依法将溶液喷 入火焰，读数；将读数与相应的待测元素加入量作图，延长此直线至与含量轴的延长线相交，此交 点与原点间的距离即相当于供试品溶液取用量中待测元素的含量（如图6-1）。 再据此计算供试品中待 测元素的含量 图6-1标准加入法示意图 六、色谱法 色谱法又称层析法。根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱 等。吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力的不 用溶剂或气体洗脱使组分分离 常 用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质， 分配色谱是利用被分离物质在两相中 配系数不同，使组分分离，其中一相被涂布或键合在固体载体上称为固定相，另一相为液体或气 体，称为流动相，常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用 被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同，使组分分离；常用的有不同强度的阳、阴离子交换 树脂。 流动相 溶剂的缓冲液 子排阻色谱又称凝胶色谱法，是利用被分 离物质分 量大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分分离：常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚 合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作流动相。 色谱法又可根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱 法等。所用溶剂应与供试品不起化学反应，纯度要求较高。分析时的温度，除气相色谱法或另有规 定外，系指在室温操作。采用纸色谱、薄层色谱或柱色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区 分：分离无色物质时，可在短波(254nm)或长波(365m)紫外灯下检视，其中纸色谱或薄层色谱也可 喷以显色剂使之显色 或在薄层色谱中用加有荧光物质的薄层硅胶 采用荧光猝灭法检视： 相色 谱法和高效液相色谱法可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测：柱色谱法还可分部收 集流出液后用适宜方法测足
2．试样的制备方法和测定 按照中华人民共和国卫生部药典委员会编订的《药品红外光谱集》 (2000年版)进行。如具有多晶现象的固体药品测定时，由于晶型可能不同，绘制的光谱图可能会发生 改变，应再绘制。 由于各种型号的仪器性能不同，试样制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光 谱的形状。因此，进行光谱对比时，应考虑各种因素可能造成的影响。 (四)原子吸收分光光度法 由待测元素灯发出特征的谱线通过供试品蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，吸收遵 循一般分光光度法的吸收定律。通过测定辐射光强度减弱的程度可求出供试品中待测元素含量。通 常借比较标准品和供试品的吸收度，可求得样品中待测元素的含量。 原子吸收分光光度法所用仪器为原子吸收分光光度计，它由光源、原子化器、单色器和检测器等 部件组成。光源通常用待测作为阴极的空心阴极灯，原子化器由雾化器及燃烧灯头组成。燃烧火焰 由不同种类的气体混合物产生，常用空气-乙炔火焰。仪器某些工作条件如波长、狭缝、光源灯电 流、火焰类型、火焰状态的变化可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况。 用原子吸收分光光度计对中药材进行含量测定，有下列二法； 1．标准曲线法 在仪器推荐的浓度范围内，制备含待测元素的标准溶液至少3份，浓度依次递增， 并分别加入供试品溶液配制中的相应试剂。一般均用去离子水制成水溶液。将仪器按规定启动后， 先将去离子水喷入火焰，调读数为零，再将最浓的标准溶液喷入火馅，调节仪器至近满标度的读 数；然后依次喷入每一标准溶液，读数。每喷完1份溶液后，均用去离子水喷入火焰充分冲洗灯头并 调零。取每一浓度3次读数的平均值，与相应浓度作标准曲线。 供试品溶液的制备应使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内，将供试品溶液喷入火焰，取3 次读数的平均值，从标准曲线上查得相应的浓度，计算元素的含量。 2．标准加入法 取同体积供试品溶液4份，分别加至4个同体积的量瓶中，除(1)号量瓶外，其他(2)、 (3)、(4)号量瓶分别再准确加入比例量的待测元素标准液，均用去离子水稀释至刻度，形成标准液加 入量从零开始递增的一系列溶液。按上述标准曲线法自"将仪器按规定启动后"操作，并依法将溶液喷 入火焰，读数；将读数与相应的待测元素加入量作图，延长此直线至与含量轴的延长线相交，此交 点与原点间的距离即相当于供试品溶液取用量中待测元素的含量(如图6-1)。再据此计算供试品中待 测元素的含量。 图6-1 标准加入法示意图 六、色谱法 色谱法又称层析法。根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱 等。吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力的不同，用溶剂或气体洗脱使组分分离，常 用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色谱是利用被分离物质在两相中分 配系数不同，使组分分离，其中一相被涂布或键合在固体载体上称为固定相，另一相为液体或气 体，称为流动相，常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用 被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同，使组分分离；常用的有不同强度的阳、阴离子交换 树脂，流动相为水或含有机溶剂的缓冲液。分子排阻色谱又称凝胶色谱法，是利用被分离物质分子 量大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分分离；常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚 合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作流动相。 色谱法又可根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱 法等。所用溶剂应与供试品不起化学反应，纯度要求较高。分析时的温度，除气相色谱法或另有规 定外，系指在室温操作。采用纸色谱、薄层色谱或柱色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区 分：分离无色物质时，可在短波(254nm)或长波(365nm)紫外灯下检视，其中纸色谱或薄层色谱也可 喷以显色剂使之显色，或在薄层色谱中用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光猝灭法检视；柱色谱 法、气相色谱法和高效液相色谱法可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测；柱色谱法还可分部收 集流出液后用适宜方法测定
(一纸色谱法 纸色谱法，系以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色 谱。供试品经展开后，可用比移值(RD表示其各组成成分的位置（比移值=原点中心至斑点中心的距 离/原点中心至展开剂前沿的距离，但由于影响比移值的因素较多，因 一般采用在相同实验条件 下与对照物质对比以确定其异同， 作为药： 的鉴别时， 供试品在色 谱中所 主斑点的颜 或荧光)与 位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药品的纯度检查时，可取一定量的供试品，经 展开后，按药品的规定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为药品的含量测定 时，将主色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定。 1.仪器与材料 (1)展开室： 通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖 ,应能密闭。用于下行法时 盖上 有孔，可插入分液漏斗，用以加入展开剂。在近顶端有一用支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器， 槽内有一玻棒，用以压住色谱滤纸，槽的两侧各支一玻棒，用以支持色谱滤纸使其自然下垂，避免 展开剂沿滤纸与溶剂槽之间发生虹吸现象。用于上行法时，在盖上的孔中加塞，塞中插入玻璃悬 钩，以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上 并除去溶剂槽和支架 ()点样器：常用具支架的微量注时器或定量手细管，应能使点样位苦正确、集中 (3)滤纸：质地均匀平整，具有一定机械强度，不含影响展开效果的杂质；也不应与所用显色剂起 作用，以致影响分离和鉴别效果，必要时可进行处理后再用。 用于下行时，取色谱虑纸按纤维长 丝方向切成适当大小的纸条，离纸条上端活当的距离（使色谱纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂 并使点样基线能在 溶剂槽侧的玻璃支持 棒下数厘米处)用铅笔划 一点样基线，必 在色谐 滤纸下端切成锯齿形便于展开剂滴下。用于上行法时，色谱滤纸长约25cm,宽度则按需要而定，必 要时可将色谱纸卷成筒形；点样基线距底边约2.5cm。 2.操作方法 (1)下行法：将供试品溶解于适当的溶剂中制成一定浓度的溶液。 用微量吸管或微量注射器吸取溶 液，点于点样基线上 溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、 低温烘干或温热气流吹干 样点直径为2~4mm,点间距离约为1.5~2.0cm,样点通常应圆形。 则玻璃支持棒自然下垂 般可在展开室底 部放一装有规定溶剂的平皿或将浸有规定溶剂的滤纸条附着在展开室内壁上，放置一定时间，俟溶 剂挥发使室内充满饱和蒸气。然后添加展开剂使浸没溶剂槽内的滤纸，展开剂即经毛细管作用沿滤 纸移动进行展开 展开至规定的距离后，取出滤纸，标明展开剂前沿位置 俟展开剂挥散后按规定 方法检出色谱斑 (2)上行法：点样方法同下行法。展开室内加入展开活量，放展开蒸气知后，庙下降 使色谱滤纸浸入展开剂约0.5cm, 展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸上升 般展开至约15cn 后，取出晾干，进行检视 展开可以向 个方向进行 ,即单向展开：也可进行双向展开，即先向 一个方向展开，取出，俟展 开剂完全挥发后 ,将滤纸转动900，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开：亦可多次展开、连续展 开或径向展开等】 (二)薄层色谱法 薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝片上，成一均匀薄层。待点样 展开后 适宜的对照物按同法在同板上 得的色谱图作对比.并可用薄层扫描仪进行扫描，用以 进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.仪器与材料 (1)玻板：一般多用10cm×10cm,1Ocm×15cm,20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求平滑. 平整，洗净后不附水珠，晾干。 (2)吸附剂或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254,其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素 “微晶纤维系F254等。其颗粒大小一般要求直径为10~40μm
(一)纸色谱法 纸色谱法，系以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色 谱。供试品经展开后，可用比移值(Rf)表示其各组成成分的位置(比移值＝原点中心至斑点中心的距 离／原点中心至展开剂前沿的距离)，但由于影响比移值的因素较多，因而一般采用在相同实验条件 下与对照物质对比以确定其异同。作为药品的鉴别时，供试品在色谱中所显主斑点的颜色(或荧光)与 位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药品的纯度检查时，可取一定量的供试品，经 展开后，按药品的规定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色(或荧光)的强度。作为药品的含量测定 时，将主色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定。 1．仪器与材料 (1)展开室：通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。用于下行法时，盖上 有孔，可插入分液漏斗，用以加入展开剂。在近顶端有一用支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器， 槽内有一玻棒，用以压住色谱滤纸，槽的两侧各支一玻棒，用以支持色谱滤纸使其自然下垂，避免 展开剂沿滤纸与溶剂槽之间发生虹吸现象。用于上行法时，在盖上的孔中加塞，塞中插入玻璃悬 钩，以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上；并除去溶剂槽和支架。 (2)点样器：常用具支架的微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确、集中。 (3)滤纸：质地均匀平整，具有一定机械强度，不含影响展开效果的杂质；也不应与所用显色剂起 作用，以致影响分离和鉴别效果，必要时可进行处理后再用。用于下行法时，取色谱滤纸按纤维长 丝方向切成适当大小的纸条，离纸条上端适当的距离(使色谱纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂 中，并使点样基线能在溶剂槽侧的玻璃支持棒下数厘米处)用铅笔划一点样基线，必要时，可在色谱 滤纸下端切成锯齿形便于展开剂滴下。用于上行法时，色谱滤纸长约25cm，宽度则按需要而定，必 要时可将色谱纸卷成筒形；点样基线距底边约2.5cm。 2．操作方法 (1)下行法：将供试品溶解于适当的溶剂中制成一定浓度的溶液。用微量吸管或微量注射器吸取溶 液，点于点样基线上，溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或温热气流吹干， 样点直径为2～4mm，点间距离约为1.5～2.0cm，样点通常应圆形。 将点样后的色谱滤纸上端放在溶剂槽内并用玻棒压住，使色谱纸通过槽侧玻璃支持棒自然下垂， 点样基线在支持棒下数厘米处。展开前，展开室内用适宜的溶剂蒸气使之饱和，一般可在展开室底 部放一装有规定溶剂的平皿或将浸有规定溶剂的滤纸条附着在展开室内壁上，放置一定时间，俟溶 剂挥发使室内充满饱和蒸气。然后添加展开剂使浸没溶剂槽内的滤纸，展开剂即经毛细管作用沿滤 纸移动进行展开，展开至规定的距离后，取出滤纸，标明展开剂前沿位置，俟展开剂挥散后按规定 方法检出色谱斑点。 (2)上行法：点样方法同下行法。展开室内加入展开剂适量，放置俟展开剂蒸气饱和后，再下降悬 钩，使色谱滤纸浸入展开剂约0.5cm，展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸上升，一般展开至约15cm 后，取出晾干，进行检视。 展开可以向一个方向进行，即单向展开；也可进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，俟展 开剂完全挥发后，将滤纸转动90o，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开、连续展 开或径向展开等。 (二)薄层色谱法 薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝片上，成一均匀薄层。待点样、 展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图作对比．并可用薄层扫描仪进行扫描，用以 进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1．仪器与材料 (1)玻板：一般多用10cm×10cm，1Ocm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求平滑、 平整，洗净后不附水珠，晾干。 (2)吸附剂或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维系F254等。其颗粒大小一般要求直径为l0～40μm
薄层涂布，一般可分为无粘合剂和含粘合剂两种，前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后 者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂， 般常用10%~15%煅石膏(CaS042H20在140C烘 4小时) 混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2%~0.5%)适量调成糊状，均匀涂布 于玻璃上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。 (3)涂布器：应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层 (4)点样器：一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材 (⑤)展开室：可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平坦或有双槽，盖子须密闭。 2.操作方法 (1薄层板制备 一般将一份吸附剂和三份水在研钵中向一方向研磨混合 ,去除表面的气泡后，倒 入涂布器中 在玻板上平 急地移动涂 器进行涂布（厚度为0,25~0.5 m),取涂好薄层 的玻板， 于室 温下，置水平台上晾干，在透射光和反射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破 及亏染，于110C洪30分钟，冷知后即使用或置干@箱中备用。也可用商品预制板. (2)点样 用点样器点样于薄层板上， 般为圆点，点样基线距底边1.0~1.5cm,样点直径一般不 大于3m,点样距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必需注意勿损伤薄层表面。 (3)展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，切 勿将样点浸入展开剂中，密封，待展开至规定距离， -般为815cm,取出薄层板，晾干，进行检 测 展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时在壁上贴二条与缸一样 高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡。 3. 薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点， 或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检 查或含量测定。 薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采 用吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果 的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与 对照品同板点样，展开，扫描， 测量和计算 用外标法视侧定时，苦对照品客数据点在校正曲线上早一涌讨原点的直线村，可用一点法校正，如 不通过原点，通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。含量测定时，供试品溶液和对照品溶液 应交叉点于同 薄层扳上 供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得影 于2个 薄层扫描定量 用的对照品纯度应符合含量则足用对照品的要求。 4.影响薄层色谱分析的因素薄层色谱法是目前中药鉴别应用最广的一种鉴别方法，但影响薄层 色谱法分析效果的因素很多。 (1)样品的预处理及供试液的制备 般认为薄层色谱所用固定相（薄层板）可即用即弃，不怕供试 液中杂质的污染，因而样品无需净化精制，在实践中，由于中药的成分复杂，未知成分多，供试液 中溶出的物质较多，其中既有欲测成分也有其他"杂质” 常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意 的分离效果，甚至难以辨认，尤其成方制剂更是如此。为了得到 个较为青析的色谱，样品提取物 经预冰理体仕式随得】鱼火体往是 个重要的有时甚至是关键的步骤。 制备样品供试液所用的 溶剂一般要求溶解度不宜 太大 粘度不宜太高 沸点适中， 而对于中药材又常常希望将成分尽可 多的被提取出来，所以常被选用的是甲醇或乙醇，因此欲测成分和许多其他"杂质”均被提取出来，供 试液的净化就显得更为必要。例如一捻金中人参二醇及人参三醇的鉴别，若是用稀酸水解后直接用 氯仿萃取，点样层析，色谱因大黄成分的干扰，致使人参二醇及人参三醇的斑点很难辨认，经碱性 氧化铝小柱吸附净化后，除去了大部分干扰， 结里鱼谱清浙 人参 二醇及人参三醇很容易辨认。 样品供试液净化的方法：①单一溶剂萃取法如浙贝母、洋金花等含生物碱类成分的中药材可利用 在碱性介质下用氯仿或苯将其所含的生物碱有选择地萃取出而舍弃其他成分。 使世试液得净化 先用 己烷萃取 供鉴别当 继用丙酮萃取 共鉴别马兜铃酸（关木 以鉴别龙胆苦苷，是利用了各自不同的溶解度，用
薄层涂布，—般可分为无粘合剂和含粘合剂两种，前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后 者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘 4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2％～0.5％)适量调成糊状，均匀涂布 于玻璃上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。 (3)涂布器：应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 (4)点样器：一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 (5)展开室：可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平坦或有双槽，盖子须密闭。 2．操作方法 (1)薄层板制备：一般将一份吸附剂和三份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒 入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.25～0.5mm)，取涂好薄层的玻板，于室 温下，置水平台上晾干，在透射光和反射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损 及污染，于110℃烘30分钟，冷却后即使用或置干燥箱中备用。也可用商品预制板。 (2)点样： 用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不 大于3mm，点样距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必需注意勿损伤薄层表面。 (3)展开：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，切 勿将样点浸入展开剂中，密封，待展开至规定距离，一般为8～15cm，取出薄层板，晾干，进行检 测。 展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时在壁上贴二条与缸一样 高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡。 3．薄层扫描法 指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点， 或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检 查或含量测定。 薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采 用吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果 的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与 对照品同板点样，展开，扫描，测量和计算。 用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如 不通过原点，通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。含量测定时,供试品溶液和对照品溶液 应交叉点于同一薄层扳上，供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得少于2个，薄层扫描定量 用的对照品纯度应符合含量测定用对照品的要求。 4．影响薄层色谱分析的因素 薄层色谱法是目前中药鉴别应用最广的一种鉴别方法，但影响薄层 色谱法分析效果的因素很多。 (1)样品的预处理及供试液的制备：一般认为薄层色谱所用固定相(薄层板)可即用即弃，不怕供试 液中杂质的污染，因而样品无需净化精制，在实践中，由于中药的成分复杂，未知成分多，供试液 中溶出的物质较多，其中既有欲测成分也有其他"杂质"，常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意 的分离效果，甚至难以辨认，尤其成方制剂更是如此。为了得到一个较为清晰的色谱，样品提取物 经预处理，使供试液得以净化，往往是一个重要的有时甚至是关键的步骤。制备样品供试液所用的 溶剂一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸点适中，而对于中药材又常常希望将成分尽可能 多的被提取出来，所以常被选用的是甲醇或乙醇，因此欲测成分和许多其他"杂质"均被提取出来，供 试液的净化就显得更为必要。例如一捻金中人参二醇及人参三醇的鉴别，若是用稀酸水解后直接用 氯仿萃取，点样层析，色谱因大黄成分的干扰，致使人参二醇及人参三醇的斑点很难辨认，经碱性 氧化铝小柱吸附净化后，除去了大部分干扰，结果色谱清晰，人参二醇及人参三醇很容易辨认。 样品供试液净化的方法：①单一溶剂萃取法 如浙贝母、洋金花等含生物碱类成分的中药材可利用 在碱性介质下用氯仿或苯将其所含的生物碱有选择地萃取出而舍弃其他成分。使供试液得以净化。 ②分段萃取法 如龙胆泻肝丸先用正己烷萃取，供鉴别当归用；继用丙酮萃取，供鉴别马兜铃酸(关木 通)：最后用甲醇萃取再经氧化铝小柱甲醇洗脱，以鉴别龙胆苦苷，是利用了各自不同的溶解度，用
不同极性的溶剂分段萃取，达到样品供试液净化的目的。③液液萃取法小儿化毒散中牛黄的鉴别， 先用稀碱液将胆酸类成分溶出用醋酸乙酯洗涤 庙在酸性条件下田酷了酯双甘他成 分和杂质的干扰， ④固液萃取法 如八珍丸 用硅藻土研匀，在固态下用溶剂萃取 ,以去除蜜糖的 干扰。或将样品的水提取液（固定相）加入硅藻土小柱中使之成为"固态”，再用适当的溶剂（移动相）通 过硅藻土小柱萃取，萃取液再经浓缩等处理后作为供试液。用固液萃取或洗脱的方法制备样品是色 谱分析常用的方法，目前常用的还有化学键合相小柱，如硅烷化硅胶小柱C-8,C-18小柱)、氨基键 合相小柱、腈基键合相小柱以及硅胶小柱、氧化铝小柱 珠密小大相脂小牡筚 母草是用活性炭和中性氧化铝混合小柱，国公酒（辛弗林）用阳离 子交换树脂柱。用氧化铝须注意颗 不可太粗或太细（一般可用100~120目），活性能保持在2~3级，用适当的玻璃小柱（如5m及10ml注 射针筒装填。氧化铝吸附力较强，选用时应有针对性。 (2)薄层色谱的点样技术：点样是薄层色谱分析的第一步，也是非常关键的一步。它既关系到能否 得到可以重现的有良好分离度的薄层色谱，也关系到定量测定结果的准确，因为不良的点样是最主 要的误差来源 薄层板的原点位置对样品量的负荷量是极为有限的，如点样量过大将明显降低分离效率。中药供 试液中一般被测成分与"杂质"共存，尤其被测成分含量较低而其他干扰物质较为大量时，常常习惯于 或不得不加大点样的量，另一方面也是由于对点样量超负荷的严重后果认识不足。预制板硅胶颗粒 细（常规预制板11 12μm,高效预制板5 ~7m)而均匀 明显提高了分离效率 对点样的要求更高 了。如常规预制板展距00mm,原点直径3mm,展开后如斑点直径扩散到6mm,则斑点容量或分离 数SN=10,而用高效预制板原点直径1mm,展开50mm,斑点直径如扩散为2mm,则SN=15。但 如果点样量不适当地加大，如在高效板上原点直径点成3mm,展开50mm后斑点扩散为4mm,结果 SN=6.即使证长5至100 ,SN也仅仅达到11，不可能达到15。由此可见即使使用高质量的薄 层板 如点样 不适当地加大，分辨率也同样不会得到提高。这就是为什么要求点样 点直径应尽 量小于3mm的原 溶解样品的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点位置就呈环形展开 ,原 点直径的扩散促进了这种展开，即所谓"点样环形色谱效应” 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变 成空心圈，这种效应对随后的线性展开造成很不利的影响。所以原则上应选择对被测成分可以溶 解，但溶解度不是很大的溶剂，中药成分复杂，难以兼顾，不可能面面俱到，通常在欲测成分不甚 清楚或待测成分看盖的极性范围很宽的情况下 ,宁愿选择溶解"范围"较宽的溶剂 如甲醇☑醇等 有的品种欲测成分明确 如苦 母中的 生物碱 术酮等可有针对性地选择 溶剂。 有 的品种选用了乙醚，由于乙醚沸点很低，最终的供试液则需要低温挥去乙醚后，改用其他合适的溶 剂制成 供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂极性与展开剂的溶剂 极性相差较大时更为明显，再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在高湿度环境）对色 谱质量的影响也不可低估。因此点样时同步干燥或点样后继续干燥以除去原点残存的溶剂是需要 的。但应尽可能避免高温加热， 免偶快不稳定的成分公的破环成促讲硅胶有催化作用的舌性表面起 固态化学反应，导致样品中某些成分的变性 点样装苦（微量手细管或色谱注射器）请层表面的机械枴伤对色普质量尤其付定量分析影向很大。特 别是已载有样品的硅胶表面颗粒被划伤或刮除 后果就更严重】 辟002 m外径0.3n m的注射 针头在薄层表面施加5g的机械力，表面局部承受的压力为30Pa, 足以造成硅胶薄层表面的损伤，对 板面较软的硅胶G薄层板损伤更严重。对如硅胶G这种软板虽然划伤表面难以避免（所以不太适合定量 分析)，但点样时小心操作把损伤降低到最低限度还是可以做到的。近年来，点样器械和点样技术的 不断更新和改进已使点样质量得到很大的提高。 提高点样起作水平是获得高质量色普的关建之一 一个组成简单的样品的鉴别比交容易，一般只 要在同一薄层板上供试样品与对照品在相同位置上显相同的斑点就基本上达到目的。但成分复杂的 中药材样品的鉴别除检出特定的成分以外 常常需要以整个色谱与对照药材的色谱作比较，其至要 依靠薄层指纹图谱才能达到准确鉴别的日的。 因此高质量的点样不仅是定量分析的需要、也是定性 分析的要求
不同极性的溶剂分段萃取，达到样品供试液净化的目的。③液液萃取法 小儿化毒散中牛黄的鉴别， 先用稀碱液将胆酸类成分溶出用醋酸乙酯洗涤，再在酸性条件下，用醋酸乙酯萃取，以减少其他成 分和杂质的干扰。④固液萃取法 如八珍丸，先用硅藻土研匀，在固态下用溶剂萃取，以去除蜜糖的 干扰。或将样品的水提取液(固定相)加入硅藻土小柱中使之成为"固态"，再用适当的溶剂(移动相)通 过硅藻土小柱萃取，萃取液再经浓缩等处理后作为供试液。用固液萃取或洗脱的方法制备样品是色 谱分析常用的方法，目前常用的还有化学键合相小柱，如硅烷化硅胶小柱(C-8，C-18小柱)、氨基键 合相小柱、腈基键合相小柱以及硅胶小柱、氧化铝小柱、聚酰胺小柱及大孔树脂小柱等。此外，益 母草是用活性炭和中性氧化铝混合小柱，国公酒(辛弗林)用阳离子交换树脂柱。用氧化铝须注意颗粒 不可太粗或太细(一般可用100～120目)，活性能保持在2～3级，用适当的玻璃小柱(如5ml及10ml注 射针筒)装填。氧化铝吸附力较强，选用时应有针对性。 (2)薄层色谱的点样技术：点样是薄层色谱分析的第一步，也是非常关键的一步。它既关系到能否 得到可以重现的有良好分离度的薄层色谱，也关系到定量测定结果的准确，因为不良的点样是最主 要的误差来源。 薄层板的原点位置对样品量的负荷量是极为有限的，如点样量过大将明显降低分离效率。中药供 试液中一般被测成分与"杂质"共存，尤其被测成分含量较低而其他干扰物质较为大量时，常常习惯于 或不得不加大点样的量，另一方面也是由于对点样量超负荷的严重后果认识不足。预制板硅胶颗粒 细(常规预制板11～12μm ，高效预制板5～7μm)而均匀，明显提高了分离效率，对点样的要求更高 了。如常规预制板展距l00mm，原点直径3mm，展开后如斑点直径扩散到6mm，则斑点容量或分离 数SN＝10，而用高效预制板原点直径1mm，展开50mm，斑点直径如扩散为2mm，则SN＝15。但 如果点样量不适当地加大，如在高效板上原点直径点成3mm，展开50mm后斑点扩散为4mm，结果 SN＝6，即使延长展距至100mm，SN也仅仅达到11，不可能达到15。由此可见即使使用高质量的薄 层板，如点样量不适当地加大，分辨率也同样不会得到提高。这就是为什么要求点样原点直径应尽 量小于3mm的原因。 溶解样品的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点位置就呈环形展开，原 点直径的扩散促进了这种展开，即所谓"点样环形色谱效应"，如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变 成空心圈，这种效应对随后的线性展开造成很不利的影响。所以原则上应选择对被测成分可以溶 解，但溶解度不是很大的溶剂，中药成分复杂，难以兼顾，不可能面面俱到，通常在欲测成分不甚 清楚或待测成分覆盖的极性范围很宽的情况下，宁愿选择溶解"范围"较宽的溶剂，如甲醇、乙醇等。 有的品种欲测成分明确，如苦参、贝母中的生物碱、白术中的苍术酮等可有针对性地选择溶剂。有 的品种选用了乙醚，由于乙醚沸点很低，最终的供试液则需要低温挥去乙醚后，改用其他合适的溶 剂制成。 供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂极性与展开剂的溶剂 极性相差较大时更为明显，再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分(特别在高湿度环境)对色 谱质量的影响也不可低估。因此点样时同步干燥或点样后继续干燥以除去原点残存的溶剂是需要 的。但应尽可能避免高温加热，以免遇热不稳定的成分的破坏或促进硅胶有催化作用的活性表面起 固态化学反应，导致样品中某些成分的变性。 点样装置(微量毛细管或色谱注射器)薄层表面的机械损伤对色谱质量尤其对定量分析影响很大。特 别是已载有样品的硅胶表面颗粒被划伤或刮除，后果就更严重。一个壁厚0.02mm外径0.3mm的注射 针头在薄层表面施加5g的机械力，表面局部承受的压力为30Pa，足以造成硅胶薄层表面的损伤，对 板面较软的硅胶G薄层板损伤更严重。对如硅胶G这种软板虽然划伤表面难以避免(所以不太适合定量 分析)，但点样时小心操作把损伤降低到最低限度还是可以做到的。近年来，点样器械和点样技术的 不断更新和改进已使点样质量得到很大的提高。 提高点样操作水平是获得高质量色谱的关键之一，一个组成简单的样品的鉴别比较容易，一般只 要在同一薄层板上供试样品与对照品在相同位置上显相同的斑点就基本上达到目的。但成分复杂的 中药材样品的鉴别除检出特定的成分以外，常常需要以整个色谱与对照药材的色谱作比较，甚至要 依靠薄层"指纹图谱"才能达到准确鉴别的目的。因此高质量的点样不仅是定量分析的需要、也是定性 分析的要求