8 浙江大学 遗传学第十二章 43 2. 筛选基因库： 根据待选基因相关信息 Î 确定筛选方法和条件 Î从基因库中筛选、分离基因。 多数方法是利用一段核苷酸序列(DNA、cDNA或 寡聚核苷酸)或抗体作探针(Probe)，用放射性同位素或 非放射性同位素标记探针 Î 筛选基因库。 浙江大学 遗传学第十二章 44 筛库过程： 将噬菌体感染形成的噬菌 斑印影在硝酸纤维膜上变性 Î 带有目的基因的放射性DNA或 cDNA作探针进行杂交Î放射性 自显影 Î 杂交信号（黑点）对 应的噬菌斑即为阳性克隆。 浙江大学 遗传学第十二章 45 3. 阳性克隆的分析与鉴定： 从基因库中筛选出阳性克隆 Î 分析、鉴定 Î 得到 目的基因。 ⑴. 限制性酶图谱： 构建阳性克隆的限制性酶图谱 Î 根据同源性分析， 了解阳性克隆片段的酶切位点及相对位置 Î 用于进一步 亚克隆或同已知的其它序列比较。 浙江大学 遗传学第十二章 46 CK Not I Sal I Not I + Sal I 图：一个 15kb DNA片段 的限制性酶图谱构建方法。 不同DNA用限制性酶酶切， 根据其产生的多型性，即限制 性酶片段长度的多型性 Î 来 分析DNA水平的变异程度， 以RFLP作为分子标记进行基因 组图谱分析。 9 浙江大学 遗传学第十二章 47 ⑵. 核酸分子杂交： ①. Southern杂交分析：由英国 Southern (1975)发明，将琼脂糖中 的DNA转移到尼龙膜Î进行DNA 分子杂交分析的方法。 筛选基因库得到阳性克隆Î将 限制性酶酶切与Southern杂交结合 Î绘制限制性酶图谱。 浙江大学 遗传学第十二章 48 ②. Northern杂交分析： 与Sorthern杂交的原理和程序相同。 用于分析克隆的基因在某一细胞或组织的转录水平， 检测mRNA的存在。8 浙江大学 遗传学第十二章 43 2. 筛选基因库： 根据待选基因相关信息 Î 确定筛选方法和条件 Î从基因库中筛选、分离基因。 多数方法是利用一段核苷酸序列(DNA、cDNA或 寡聚核苷酸)或抗体作探针(Probe)，用放射性同位素或 非放射性同位素标记探针 Î 筛选基因库。 浙江大学 遗传学第十二章 44 筛库过程： 将噬菌体感染形成的噬菌 斑印影在硝酸纤维膜上变性 Î 带有目的基因的放射性DNA或 cDNA作探针进行杂交Î放射性 自显影 Î 杂交信号（黑点）对 应的噬菌斑即为阳性克隆。 浙江大学 遗传学第十二章 45 3. 阳性克隆的分析与鉴定： 从基因库中筛选出阳性克隆 Î 分析、鉴定 Î 得到 目的基因。 ⑴. 限制性酶图谱： 构建阳性克隆的限制性酶图谱 Î 根据同源性分析， 了解阳性克隆片段的酶切位点及相对位置 Î 用于进一步 亚克隆或同已知的其它序列比较。 浙江大学 遗传学第十二章 46 CK Not I Sal I Not I + Sal I 图：一个 15kb DNA片段 的限制性酶图谱构建方法。 不同DNA用限制性酶酶切， 根据其产生的多型性，即限制 性酶片段长度的多型性 Î 来 分析DNA水平的变异程度， 以RFLP作为分子标记进行基因 组图谱分析。 9 浙江大学 遗传学第十二章 47 ⑵. 核酸分子杂交： ①. Southern杂交分析：由英国 Southern (1975)发明，将琼脂糖中 的DNA转移到尼龙膜Î进行DNA 分子杂交分析的方法。 筛选基因库得到阳性克隆Î将 限制性酶酶切与Southern杂交结合 Î绘制限制性酶图谱。 浙江大学 遗传学第十二章 48 ②. Northern杂交分析： 与Sorthern杂交的原理和程序相同。 用于分析克隆的基因在某一细胞或组织的转录水平， 检测mRNA的存在