动物医学进展2007年第28卷第3期(总第162期) 20μg/kg,达氟沙星为4ug/kg 去掉皮和骨后,清洗,切成片状搅碎混匀。鲍鱼和 2.2液相色谱法 对虾,去掉头和尾后,搅碎混匀。称取1.5g± 液相色谱法(LC)操作简单,方法灵活。 Jeffer0.01g于聚丙烯离心管中,冷藏备用。经乙腈提取, ryRM等报道了用LC法测定沙拉沙星在海峡两步固相提取纯化后(SPE和阴离子交换)供液相 鲇鱼中的残留。先将样品用酸化乙醇抽提,再用离色谱分析。克伦特罗作为内标用于前6min中出峰 子交换固相柱分离,最后用碱性甲醇洗脱,洗脱液上的FQNs物质分析,6min~12min用 penbutolol 机检测。色谱条件:苯基柱,荧光检测器(激发波长作为内标分析其它物质。 278nm,发射波长450nm),流动相为乙腈2%乙酸 施冰等建立了水产品(鳗鱼、虾、鱼肉)中7 (体积比15:85)。 RoybalJE报道了牛奶中沙拉种氟喹诺酮类药物残留量的 LC-ESPMS/MS液相 沙星、双氟沙星、思诺沙星的LC检测法,但由于串联质谱测定方法,测定的7种氟喹诺酮类药物 FQNs结构的叔胺基和羧基团能在水中发生解离,包括诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星 固定相表面的这些活性位点可通过氢键或离子交换(ENRO)、氧氟沙星(OFL)、单诺沙星(DANO)、双 作用强烈吸附FQNs,出现色谱峰拖尾,保留值不稳氟沙星(DIF)沙拉沙星(SARA)。7种氟喹诺酮抗 定或过长,甚至被长期保留在色谱柱上,导致峰形异菌素标准在1.0ng/mL~200ng/mL范围内,具有 常和分离度下降,这些都影响了FQNs检测的准确良好的线性。该方法回收率高,样品检测限(LOD) 性 0.5ug/kg~2.9ugkg,定量检测限LOQ)分别为 2.3高效毛细管电泳法 9.6(NOR)、6.8(CIP)、1.8(ENRO)、2.8(OFL)、 高效毛细管电泳法(HPCE具有操作简单、色8.2(DANO)、5.4(SARA)2.4(DIF)g/kg,可作 谱柱不受样品污染、分析速度快、分离效率髙、样品为原鳗烤鳗、虾肉、鱼肉等样品的定量检测和确证 用量少、运行成本低等优点,有利于实际样品的分方法 析。朱斌等报道了加替沙星含量测定的HPCE2.5液相色谱质谱联用法 法。采用未涂层弹性石英毛细管柱,56cm×50pm 液相色谱质谱联用法(LCMS)检测灵敏度高, (有效长度50cm);压力进样,压力138kPa,进样时能方便地对微量兽药残留组分进行检测,是目前检 间15h,电压15kV,柱温25℃,检测波长293nm,测食品中FQNs残留确证检测的最佳方法之一。 运行缓冲液100nmol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇 Toussaint G等1建立了猪肾脏中11种FQNs残 (8515,用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至9.0),运留的LCMS分析方法。样品用甲醇-0.2%偏磷酸 行时间30min。线性范围为0.05mg/mL~(1+2)提取和脱蛋白质,50C下蒸去有机溶剂,C8 2mg/mL,平均回收率为93%,RSD=0.9%。此柱净化后测定。流动相为甲醇0.1mol/L乙酸胺 方法简便、准确,重现性良好 (40+60),流速0.8mL/min。检测限为10ug/kg。 2.4液相色谱质谱质谱法 LCMS具有很好的选择性和灵敏度,样品处理方法 Johnston l等采用反相高效液相色谱质简单。现在,几乎所有重要的FQNs已建立了LC 谱质谱法( HPLC-MS-MS)同时分析了鲑鱼组织、MS分析法 对虾和鲍鱼中的8种喹诺酮和FQNs的残留量。色2.6薄层色谱法 谱柱为 Zor bax extend18柱( Agilent,150mm 薄层色谱法和液相色谱法相比灵敏度较低 2.1mm,5μm)。柱温为30℃。流动相A为2%蚁(1000×10°mol/L或更低)。据报道,硅胶 酸,流动相B为乙腈,流动相C为Mili-Q超滤水。〔60F254荧光高效薄层色谱法测定组织中恩诺沙 梯度洗脱条件:前3min,流动相中A为10%,流动星的检测水平接近1000×10molL。因此,TC 相B为20%,流动相C为70%;到3.lmin时,流动薄层色谱法对在残留限量100×10°mol/L浓度下 相B升到55%,流动相C降到35%,并保持到的微量或痕量分析是没有意义的。在较低水平下测 10min;到10.1min时,流动相B回到20%,流动定喹诺酮残留,荧光检测器是最常用的。用反相柱 相C回到70%,一直保持到17min。流速为0.2mL分离有较尖锐的峰和较低的噪音水平或拖尾,分离 min,进样量10u,所有分析样品在12min以前出度良好。这种 PL RPS聚合柱在使用0.02mol/L 峰。在浓度为5μg/kg(其中环丙沙星为10μgkg)磷酸乙腈四氢呋喃(68:17:15)流动相时对沙拉沙 以上时,回收率很高。根据样品的不同,FQNs的检星和恩诺沙星有良好的分离度。磷酸和乙腈比例的 测限为1μg/kg~3μg/kg。样品前处理:鱼样品,微小改变及选择合适的柱子都能获得满意的结果 201994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net20μg/ kg ,达氟沙星为 4μg/ kg。 2. 2 液相色谱法 液相色谱法(LC) 操作简单 ,方法灵活。J effer2 ry R M 等[8 ]报道了用 LC 法测定沙拉沙星在海峡 鲇鱼中的残留。先将样品用酸化乙醇抽提 ,再用离 子交换固相柱分离 ,最后用碱性甲醇洗脱 ,洗脱液上 机检测。色谱条件 :苯基柱 ,荧光检测器 (激发波长 278 nm ,发射波长 450 nm) ,流动相为乙腈22 %乙酸 (体积比 15 ∶85) 。Roybal J E [9 ]报道了牛奶中沙拉 沙星、双氟沙星、思诺沙星的 LC 检测法 ,但由于 FQNs 结构的叔胺基和羧基团能在水中发生解离 , 固定相表面的这些活性位点可通过氢键或离子交换 作用强烈吸附 FQNs ,出现色谱峰拖尾 ,保留值不稳 定或过长 ,甚至被长期保留在色谱柱上 ,导致峰形异 常和分离度下降 ,这些都影响了 FQNs 检测的准确 性。 2. 3 高效毛细管电泳法 高效毛细管电泳法 ( HPCE) 具有操作简单、色 谱柱不受样品污染、分析速度快、分离效率高、样品 用量少、运行成本低等优点 ,有利于实际样品的分 析。朱斌等[10 ] 报道了加替沙星含量测定的 HPCE 法。采用未涂层弹性石英毛细管柱 ,56 cm ×50μm (有效长度 50 cm) ;压力进样 ,压力 138 kPa ,进样时 间 15 h ,电压 15 kV ,柱温 25 ℃,检测波长 293 nm , 运行缓冲液 100 nmol/ L 磷酸二氢钠溶液2甲醇 (8515 ,用 1 mol/ L 氢氧化钠溶液调 p H 至 9. 0) ,运 行时 间 30 min。线 性 范 围 为 0. 05 mg/ mL ～ 2 mg/ mL ,平均回收率为 99. 3 % ,RSD = 0. 9 %。此 方法简便、准确 ,重现性良好。 2. 4 液相色谱2质谱2质谱法 Johnstont L 等[11 ] 采用反相高效液相色谱2质 谱2质谱法 ( HPLC2MS2MS) 同时分析了鲑鱼组织、 对虾和鲍鱼中的 8 种喹诺酮和 FQNs 的残留量。色 谱柱为 ZorbaxExtendC18 柱 ( Agilent , 150 mm × 2. 1 mm ,5μm) 。柱温为 30 ℃。流动相 A 为 2 %蚁 酸 ,流动相 B 为乙腈 ,流动相 C 为 Milli2Q 超滤水。 梯度洗脱条件 :前 3 min ,流动相中 A 为 10 % ,流动 相 B 为 20 % ,流动相 C 为 70 % ;到 3. 1 min 时 ,流动 相 B 升到 55 % , 流动相 C 降到 35 % , 并保持到 10 min ;到 10. 1 min 时 ,流动相 B 回到 20 % ,流动 相 C 回到 70 % ,一直保持到 17min。流速为 0. 2 mL min ,进样量 10μL ,所有分析样品在 12 min 以前出 峰。在浓度为 5μg/ kg (其中环丙沙星为 10μg/ kg) 以上时 ,回收率很高。根据样品的不同 ,FQNs 的检 测限为 1μg/ kg～3μg/ kg。样品前处理 :鱼样品 , 去掉皮和骨后 ,清洗 ,切成片状 ,搅碎混匀。鲍鱼和 对虾 ,去掉头和尾后 , 搅碎混匀。称取 1. 5 g ± 0. 01 g于聚丙烯离心管中 ,冷藏备用。经乙腈提取 , 两步固相提取纯化后 (SPE 和阴离子交换) 供液相 色谱分析。克伦特罗作为内标用于前 6 min 中出峰 的 FQNs 物质分析 ,6 min～12 min 用 penbutolol 作为内标分析其它物质。 施冰等[11 ] 建立了水产品 (鳗鱼、虾、鱼肉) 中 7 种氟喹诺酮类药物残留量的 LC2ESI2MS/ MS 液相 串联质谱测定方法[ 12 ] ,测定的 7 种氟喹诺酮类药物 包括诺氟沙星 (NOR) 、环丙沙星 (CIP) 、恩诺沙星 ( ENRO) 、氧氟沙星 (OFL) 、单诺沙星 (DANO) 、双 氟沙星(DIF) 、沙拉沙星(SARA) 。7 种氟喹诺酮抗 菌素标准在 1. 0 ng/ mL～200 ng/ mL 范围内 ,具有 良好的线性。该方法回收率高 ,样品检测限 (LOD) 0. 5μg/ kg～2. 9μg/ kg ,定量检测限 (LOQ) 分别为 9. 6 (NOR) 、6. 8 (CIP) 、1. 8 ( ENRO) 、2. 8 (OFL ) 、 8. 2 (DANO) 、5. 4 (SARA) 、2. 4 (DIF)μg/ kg ,可作 为原鳗、烤鳗、虾肉、鱼肉等样品的定量检测和确证 方法。 2. 5 液相色谱2质谱联用法 液相色谱2质谱联用法(LC2MS) 检测灵敏度高 , 能方便地对微量兽药残留组分进行检测 ,是目前检 测食品中 FQNs 残留确证检测的最佳方法之一。 Toussaint G 等[12 ] 建立了猪肾脏中 11 种 FQNs 残 留的 LC2MS 分析方法。样品用甲醇20. 2 %偏磷酸 (1 + 2) 提取和脱蛋白质 ,50 ℃下蒸去有机溶剂 ,C18 柱净化后测定。流动相为甲醇20. 1 mol/ L 乙酸胺 (40 + 60) ,流速 0. 8 mL/ min。检测限为 10μg/ kg。 LC2MS 具有很好的选择性和灵敏度 ,样品处理方法 简单。现在 ,几乎所有重要的 FQNs 已建立了 LC2 MS 分析法。 2. 6 薄层色谱法 薄层色谱法和液相色谱法相比灵敏度较低 (1 000 ×10 - 9 mol/ L 或 更 低 ) 。据 报 道 , 硅 胶 G60F254 荧光高效薄层色谱法测定组织中恩诺沙 星的检测水平接近 1 000 ×10 - 9 mol/ L 。因此 , TC 薄层色谱法对在残留限量 100 ×10 - 9 mol/ L 浓度下 的微量或痕量分析是没有意义的。在较低水平下测 定喹诺酮残留 ,荧光检测器是最常用的。用反相柱 分离有较尖锐的峰和较低的噪音水平或拖尾 ,分离 度良好。这种 PL RPS 聚合柱在使用 0. 02 mol/ L 磷酸乙腈四氢呋喃(68 ∶17 ∶15) 流动相时对沙拉沙 星和恩诺沙星有良好的分离度。磷酸和乙腈比例的 微小改变及选择合适的柱子都能获得满意的结果。 001 动物医学进展 2007 年 第 28 卷 第 3 期(总第 162 期)