一级结构是蛋白质分子结构的基础，它包含了决定蛋白质分子所有结构层次构象的全部 信息。蛋白质一级结构研究的内容包括蛋白质的氨基酸组成、氨基酸排列顺序和二硫键 的位置，肽链数目，末端氨基酸的种类等。 R R: -HN-CH-CONH- -CONH-CH-CO- e s-s -HN-CH-CONH-CH-CONH-CH-CO- R 图2-7蛋白质肽链内和肽链间二硫健示意图 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接起来的生物大分子，不同蛋白质的氨基酸种类、数 量和排列顺序都不同，这是蛋白质生物学功能多样性的基础。 一级结构是蛋白质的共价 键结合的全部情况，在生物化学及其相关领域中，许多问题都需要知道蛋白质的一级结 构。有些蛋白质不是简单的一条肽链，而是由2条以上肽链组成的，肽链之间通过二硫 键连接起来，还有的在一条肽链内部形成二硫键（图2-7）。二硫健在蛋白质分子中起者 稳定空间结构的作用 一般二硫键越多，蛋白质的结构越稳定。蛋白质的氨基酸排列顺 序对蛋白 的空间 结构以 生物功能起着决定作用 通常氨基酸的排列顺序是不能轻易 改变的，有的蛋白质分子只有个氨基酸的改变就可能改变整个蛋白质分子的空间结构 和功能，所以蛋白质的一级结构包含着决定其空间结构的因素。 (二)蛋白质一级结构的测定 蛋白质一级结构的测定就是测定蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，这是揭示生命 本质， 阐明结构与功能的关系。 研究酶的活性中心和酶蛋日 高级结构的基础 是基因 表达、克隆和核酸顺序分析的重要内容。蛋白质一级结构的测定主要包括以下基本步骤： 1.测定蛋白质的分子量和氨基酸组成 获取一定量纯的蛋白质样品，测定其分子量。将一部分样品完全水解，确定其氨基 酸种类、数目和每种氨基酸的含量。 2.进行末端分析，确定蛋白质的肽链数目及N端和C端氨基酸的种类 测定N-末端氨基酸的方法有多种，常用的有二硝基氟苯(DNFB)法和异硫氰酸苯酯(PTH 法（如氨基酸的化学性质中所介绍的）。其中异硫氰酸苯酯法应用广泛，并己根据其原理 设计制造出氨基酸顺序分析仪。此外，还可以用丹磺酰氯(dansyl chloiride,.DNS-CL)法 测定N末瑞氨基酸。其原理是：多肽链N瑞氨基酸的氨基可与5.二甲氨基萘.1磺酰气 (DNS)反应，生成丹磺酰肽(DNS-肽)，此产物经酸水解产生DNS氨基酸（具有荧光 和其它游离的氨基酸。用乙酸乙酯抽提，可得到DNS-氨基酸，然后可用色谱分析进行鉴 29 29 一级结构是蛋白质分子结构的基础，它包含了决定蛋白质分子所有结构层次构象的全部 信息。蛋白质一级结构研究的内容包括蛋白质的氨基酸组成、氨基酸排列顺序和二硫键 的位置，肽链数目，末端氨基酸的种类等。 图 2-7 蛋白质肽链内和肽链间二硫键示意图 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接起来的生物大分子，不同蛋白质的氨基酸种类、数 量和排列顺序都不同，这是蛋白质生物学功能多样性的基础。一级结构是蛋白质的共价 键结合的全部情况，在生物化学及其相关领域中，许多问题都需要知道蛋白质的一级结 构。有些蛋白质不是简单的一条肽链，而是由 2 条以上肽链组成的，肽链之间通过二硫 键连接起来，还有的在一条肽链内部形成二硫键（图 2-7）。二硫键在蛋白质分子中起着 稳定空间结构的作用。一般二硫键越多，蛋白质的结构越稳定。蛋白质的氨基酸排列顺 序对蛋白质的空间结构以及生物功能起着决定作用，通常氨基酸的排列顺序是不能轻易 改变的，有的蛋白质分子只有 个氨基酸的改变就可能改变整个蛋白质分子的空间结构 和功能，所以蛋白质的一级结构包含着决定其空间结构的因素。 （二）蛋白质一级结构的测定 蛋白质一级结构的测定就是测定蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，这是揭示生命 本质，阐明结构与功能的关系，研究酶的活性中心和酶蛋白高级结构的基础，也是基因 表达、克隆和核酸顺序分析的重要内容。蛋白质一级结构的测定主要包括以下基本步骤： 1．测定蛋白质的分子量和氨基酸组成 获取一定量纯的蛋白质样品，测定其分子量。将一部分样品完全水解，确定其氨基 酸种类、数目和每种氨基酸的含量。 2．进行末端分析，确定蛋白质的肽链数目及 N-端和 C-端氨基酸的种类 测定 N-末端氨基酸的方法有多种，常用的有二硝基氟苯（DNFB）法和异硫氰酸苯酯（PTH） 法（如氨基酸的化学性质中所介绍的）。其中异硫氰酸苯酯法应用广泛，并已根据其原理 设计制造出氨基酸顺序分析仪。此外，还可以用丹磺酰氯（dansyl chloiride, DNS-CL）法 测定 N-末端氨基酸。其原理是：多肽链 N 端氨基酸的氨基可与 5-二甲氨基萘-1-磺酰氯 （DNS）反应，生成丹磺酰肽（DNS-肽），此产物经酸水解产生 DNS-氨基酸（具有荧光） 和其它游离的氨基酸。用乙酸乙酯抽提，可得到 DNS-氨基酸，然后可用色谱分析进行鉴