安全瓶 干燥器（两级） 安全瓶（带真空表） 真空泵。目的是除去氨水、酒精和部分水。 （2）第二级真空浓缩 将一级浓缩液快速离心，真空度 740mmHg 以上、温度 50℃左右， 转速 3000r/min .然后蒸发去水分，其水分经干冰冷凝器，至干燥，安全瓶，最后经真空泵抽 出，结果使物料由液态浓缩成粘稠状。 然后对 Dcmp，调至 pH2.7，对其他三种核酸，则调至微碱性。再用酒精析出，析出时置于 0℃冷间，离心得到沉淀置于真空干燥器干燥，视色泽深浅采取进一步纯化措施（用酒精洗 涤），最后得到无定形结晶成品。 二、鱼精蛋白 （一）、概述 鱼精蛋白又名精蛋白，是分子最较小（约 4000-10000 道尔顿）的简单蛋白质。它存在 于雄性鱼类成熟精子中，常跟 DNA 较紧密地结合在一起。此种结合能被强酸解离。鱼精蛋 白按构成精蛋白分子中有几种碱性氨基酸不定分类。一元精蛋白质仅含精氨酸一种碱性氨基 酸；二元精蛋白除了含精氨酸外还有赖氨酸或组氨酸；三元精蛋白含有三种碱性氨基酸。 日本安藤锐郎最早分离了鲱精蛋白的三个组分并决定了他们各自的一级结构： YI 肽链 31 个氨基酸中精氨酸 20 个，脯氨酸 2 个，丝氨酸 3 个，丙氨酸 2 个，苏氨酸 2 个， 异亮和甘氨酸各 1 个。 YII 肽链 30 个氨基酸中也有 20 个精氨酸 21 个，脯氨酸 3 个，丝氨酸 2 个，缬氨酸 2 个， 苏氨酸 1 个。 Z 肽链 31 个氨基酸中精氨酸 21 个，丝氨酸 3 个，丙氨酸 3 个，脯氨酸 2 个，缬氨酸 2 个。 鲱鱼蛋白的三个组分初级结构见图 12-2。 在鱼精蛋白质中没有酪氨酸（故对 Mill on 反应呈阴性）、色氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸 和甲硫氨酸。它能和多种矿酸结合成盐。它能溶于水、稀氨水、酸和碱；加热不凝固且较为 稳定。它能与多种蛋白质结合形成复合物，因而可以被用来制造长效降血糖激素制剂——鱼 精蛋白胰岛素锌盐，也可制成抗生素复合物，抑制肿瘤周围血管的增长。还用于临床作肝素 制剂和人工合成的抗凝血剂的解毒剂等。此外，它对革兰氏阳性菌有明显的抑制作用，与其 他辅料一起，对水产品、淀粉类等食品有良好的防腐作用。其硫酸盐可用来分离、纯化核酸、 酸性和碱性蛋白。 鱼精蛋白提取工艺的研究起步较早，随着科技的进步工艺日趋成熟。经典的提取方法一 般是将提取过程分两大步：即先提取精子头，再从中提出鱼精蛋白。提取精子头，常用方法 有 Felix 分离法和 Ando。Felix 法是应用质壁分离原理使精子头部离尾丝和细胞质之后经离 心所得悬浊液中加入柠檬酸（最终浓度为 0.003%）,得精子头白色沉淀，然后复以有机溶剂 脱脂、干燥得到纯粹精子头。Ando 法是利用脱氧核糖蛋白即精子头成分在 0.14mol 与 1-2mol NaCL 溶液中不同溶解中的不同溶解度来分离，再用乙醇析出核精蛋白。此外，还有在等渗 盐中用创分段离心法也可分离得到。在取得精子头后，鱼精蛋白部分的提取无论经典的或现 代的方法，基本上是矿酸为主要抽提剂，以柠檬酸盐或有机溶剂为纯化剂。如拉斯姆森法， 将精子头在冷的 0.2mol 盐酸中研磨取得抽出液，再用 0.125mol 苦味酸钠溶液将鱼精蛋白转 换为苦味酸盐黄色沉淀，接着以丙酮法清洗，加 H2SO4 使转化为硫酸盐，最后用乙醇沉淀 得其硫酸盐产品。而 Ando 法则在精子头的 0.2mol 盐酸抽出液中用 Amberlite-400（HCO3- 型）中和酸度，将滤液冷冻干燥即可。 另有一种原苏联的有机溶剂法，它采用大量的有机溶剂（丙酮、乙醇、氯仿等）进行反 复脱水、脱脂、抽提、洗涤鱼精蛋白，其间辅以硫酸钠、氨水、过氧化氢、EDTA 二钠盐等 试剂，再经活性炭脱色，强强性苯乙烯阳离子交换树脂处理，其操作繁琐，成本高昂，虽然 产品质量好但成品得率低。 在最近几年中，鱼精蛋白的提取工艺有了较大的改进与简化，尤其是日本。如在得到鱼精蛋 白盐类的方法中，有将鱼精在稀矿酸液中处理，抽提出鱼精蛋白及混杂蛋白。然后在抽出液 中加入甲醇或乙醇之类的有机溶剂以沉淀上述蛋白，分离子干燥后的固体溶于温水中，再冷 却析出鱼精蛋白盐类。但是在该工艺中，有机溶剂同样也会沉淀杂蛋白，这就势必要进一步 设法除去杂蛋白。尽管在温水中溶解后能析出鱼精蛋白，但同时也一定程度地混入杂蛋白而 影响纯度，这样仍需补充精制步骤。也有在矿酸抽出剂中不用有机溶剂而用聚磷酸盐，使鱼 精蛋白以磷酸盐形式沉淀出来，然后将沉淀溶解在高浓度的硫酸铵中，复分解为精蛋白硫酸安全瓶 干燥器（两级） 安全瓶（带真空表） 真空泵。目的是除去氨水、酒精和部分水。 （2）第二级真空浓缩 将一级浓缩液快速离心，真空度 740mmHg 以上、温度 50℃左右， 转速 3000r/min .然后蒸发去水分，其水分经干冰冷凝器，至干燥，安全瓶，最后经真空泵抽 出，结果使物料由液态浓缩成粘稠状。 然后对 Dcmp，调至 pH2.7，对其他三种核酸，则调至微碱性。再用酒精析出，析出时置于 0℃冷间，离心得到沉淀置于真空干燥器干燥，视色泽深浅采取进一步纯化措施（用酒精洗 涤），最后得到无定形结晶成品。 二、鱼精蛋白 （一）、概述 鱼精蛋白又名精蛋白，是分子最较小（约 4000-10000 道尔顿）的简单蛋白质。它存在 于雄性鱼类成熟精子中，常跟 DNA 较紧密地结合在一起。此种结合能被强酸解离。鱼精蛋 白按构成精蛋白分子中有几种碱性氨基酸不定分类。一元精蛋白质仅含精氨酸一种碱性氨基 酸；二元精蛋白除了含精氨酸外还有赖氨酸或组氨酸；三元精蛋白含有三种碱性氨基酸。 日本安藤锐郎最早分离了鲱精蛋白的三个组分并决定了他们各自的一级结构： YI 肽链 31 个氨基酸中精氨酸 20 个，脯氨酸 2 个，丝氨酸 3 个，丙氨酸 2 个，苏氨酸 2 个， 异亮和甘氨酸各 1 个。 YII 肽链 30 个氨基酸中也有 20 个精氨酸 21 个，脯氨酸 3 个，丝氨酸 2 个，缬氨酸 2 个， 苏氨酸 1 个。 Z 肽链 31 个氨基酸中精氨酸 21 个，丝氨酸 3 个，丙氨酸 3 个，脯氨酸 2 个，缬氨酸 2 个。 鲱鱼蛋白的三个组分初级结构见图 12-2。 在鱼精蛋白质中没有酪氨酸（故对 Mill on 反应呈阴性）、色氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸 和甲硫氨酸。它能和多种矿酸结合成盐。它能溶于水、稀氨水、酸和碱；加热不凝固且较为 稳定。它能与多种蛋白质结合形成复合物，因而可以被用来制造长效降血糖激素制剂——鱼 精蛋白胰岛素锌盐，也可制成抗生素复合物，抑制肿瘤周围血管的增长。还用于临床作肝素 制剂和人工合成的抗凝血剂的解毒剂等。此外，它对革兰氏阳性菌有明显的抑制作用，与其 他辅料一起，对水产品、淀粉类等食品有良好的防腐作用。其硫酸盐可用来分离、纯化核酸、 酸性和碱性蛋白。 鱼精蛋白提取工艺的研究起步较早，随着科技的进步工艺日趋成熟。经典的提取方法一 般是将提取过程分两大步：即先提取精子头，再从中提出鱼精蛋白。提取精子头，常用方法 有 Felix 分离法和 Ando。Felix 法是应用质壁分离原理使精子头部离尾丝和细胞质之后经离 心所得悬浊液中加入柠檬酸（最终浓度为 0.003%）,得精子头白色沉淀，然后复以有机溶剂 脱脂、干燥得到纯粹精子头。Ando 法是利用脱氧核糖蛋白即精子头成分在 0.14mol 与 1-2mol NaCL 溶液中不同溶解中的不同溶解度来分离，再用乙醇析出核精蛋白。此外，还有在等渗 盐中用创分段离心法也可分离得到。在取得精子头后，鱼精蛋白部分的提取无论经典的或现 代的方法，基本上是矿酸为主要抽提剂，以柠檬酸盐或有机溶剂为纯化剂。如拉斯姆森法， 将精子头在冷的 0.2mol 盐酸中研磨取得抽出液，再用 0.125mol 苦味酸钠溶液将鱼精蛋白转 换为苦味酸盐黄色沉淀，接着以丙酮法清洗，加 H2SO4 使转化为硫酸盐，最后用乙醇沉淀 得其硫酸盐产品。而 Ando 法则在精子头的 0.2mol 盐酸抽出液中用 Amberlite-400（HCO3- 型）中和酸度，将滤液冷冻干燥即可。 另有一种原苏联的有机溶剂法，它采用大量的有机溶剂（丙酮、乙醇、氯仿等）进行反 复脱水、脱脂、抽提、洗涤鱼精蛋白，其间辅以硫酸钠、氨水、过氧化氢、EDTA 二钠盐等 试剂，再经活性炭脱色，强强性苯乙烯阳离子交换树脂处理，其操作繁琐，成本高昂，虽然 产品质量好但成品得率低。 在最近几年中，鱼精蛋白的提取工艺有了较大的改进与简化，尤其是日本。如在得到鱼精蛋 白盐类的方法中，有将鱼精在稀矿酸液中处理，抽提出鱼精蛋白及混杂蛋白。然后在抽出液 中加入甲醇或乙醇之类的有机溶剂以沉淀上述蛋白，分离子干燥后的固体溶于温水中，再冷 却析出鱼精蛋白盐类。但是在该工艺中，有机溶剂同样也会沉淀杂蛋白，这就势必要进一步 设法除去杂蛋白。尽管在温水中溶解后能析出鱼精蛋白，但同时也一定程度地混入杂蛋白而 影响纯度，这样仍需补充精制步骤。也有在矿酸抽出剂中不用有机溶剂而用聚磷酸盐，使鱼 精蛋白以磷酸盐形式沉淀出来，然后将沉淀溶解在高浓度的硫酸铵中，复分解为精蛋白硫酸