那些反应。在此者重介绍几种在蛋白质化学及结构测定中具有重要意义的化学反应。 (一)茚三酮反应 黄三酮反应(ninhydrin reaction)这是氨基酸的aNH,所引起的反应。a.氨基酸与水 合茚三酮一起在水溶液中加热，可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解 放出氨和二氧化碳，氨基酸生成醛，水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中 还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。反应过程如图23。 所有氨基酸及具有游离ā氨基的肽都产生蓝紫色，但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反 应产生黄色物质，因其á氨基被取代，所以产生不同的衍生物。此反应十分灵敏，根据 反应所生成的蓝紫色的深浅，在57Om波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。 也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。 OH +H,N-CH-COOH +RCHO+NH,+CO. 水合带三酮 还原韩三酮 ”++o 茚三酮 图23节三反应 (二)氨基酸与2,4-二硝基氟苯的反应 此反应又称桑格反应(Sanger reaction)。在弱碱性(pH89)、暗处、室温或40C条 件下，氨基酸的a-氨基很容易与2.4二硝基氯苯（缩写为FDNB)反应，生成黄色的24 硝基氨基酸(,简称DNP-氨基酸)。该反应由F.Sanger首先发 现。 多肽或蛋白质的N末端氨基酸的a-氨基也能与FDNB反应，生成一种二硝基苯肽 (DNP-肽)。由于硝基苯与氨基结合牢固，不易被水解，因此当DNP多肽被酸水解时， 所有肽键均被水解，只有N末端氨基酸仍连在DNP上，所以产物为黄色的DNP.氨基酸 和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯，所以可以用乙酸乙酯 抽提并将抽提液进行色谱分析，再以标准的DNP.氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种 23 23 那些反应。在此着重介绍几种在蛋白质化学及结构测定中具有重要意义的化学反应。 （一）茚三酮反应 茚三酮反应(ninhydrin reaction)这是氨基酸的α-NH2 所引起的反应。α-氨基酸与水 合茚三酮一起在水溶液中加热，可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解， 放出氨和二氧化碳，氨基酸生成醛，水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中， 还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。反应过程如图 2-3。 所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽都产生蓝紫色，但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反 应产生黄色物质，因其α-氨基被取代，所以产生不同的衍生物。此反应十分灵敏，根据 反应所生成的蓝紫色的深浅，在 570nm 波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。 也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。 茚三酮 图 2-3 茚三酮反应 （二）氨基酸与 2,4-二硝基氟苯的反应 此反应又称桑格反应（Sanger reaction）。在弱碱性（pH 8~9）、暗处、室温或 40℃条 件下，氨基酸的α-氨基很容易与 2,4-二硝基氟苯（缩写为 FDNB）反应，生成黄色的 2,4- 二硝基氨基酸（dinitrophenyl amino acid，简称 DNP-氨基酸）。该反应由 F. Sanger 首先发 现。 多肽或蛋白质的 N-末端氨基酸的α-氨基也能与 FDNB 反应，生成一种二硝基苯肽 （DNP-肽）。由于硝基苯与氨基结合牢固，不易被水解，因此当 DNP-多肽被酸水解时， 所有肽键均被水解，只有 N-末端氨基酸仍连在 DNP 上，所以产物为黄色的 DNP-氨基酸 和其它氨基酸的混合液。混合液中只有 DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯，所以可以用乙酸乙酯 抽提并将抽提液进行色谱分析，再以标准的 DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种