国家自然科学基金申请书 2.项目的研究内容、研究目标以及拟解决的关键问题 2.1研究内容 (1)出血性血小板病的凝血酶受体研究: ①受体水平 A:出血性血小板病的GPIb-XV、GPba蛋白的表达及功能部位; B:出血性血小板病的PARI、PAR4的表达及功能部位。 C:在此基础上,研究患者血小板被PAR1、PAR4活化肽刺激过程中细胞骨架蛋白成 分肌球蛋白、肌动蛋白、肌动连接蛋白以及 GPIb a水平的动态变化,了解本病发病过 程中两类凝血酶受体对血小板活化的影响程度与途径,以揭示本病皮肤粘膜出血的部 分机制。 ②分子水平 对明显异常者,进行相应受体蛋白基因检测等后续分子生物学研究。包括出血性 血小板病的血小板 GPIb a、PARI、PAR4、mRNA的表达;出血性血小板病的血小 板GPba、PARⅠPAR4的转录水平 (2)益气活血方对出血性血小板病膜凝血酶受体的影响。 重点观察治疗前后患者GPIb-IX-V、 GPIb a蛋白的表达变化以及细胞骨架蛋白的 变化,以部分阐明中药治疗的疗效机理。 2.2研究目标 研究出血性血小板病的凝血酶受体的功能与活性等,拟从分子和受体水平探索该病 的发病机理,在此基础上运用益气活血方治疗,并重点观察中药对凝血酶受体的影响, 为中药治疗“受体性疾病”提供临床和理论依据 2.3拟解决的关键问题 (1)拟解决凝血酶受体的改变与出血性血小板病的发病关系。尤其是该病患者的凝血 酶受体是功能异常或是分子结构异常 (2)拟解决中药治疗本病的作用环节,是否与调节凝血酶受体的功能有关 3、拟采取的研究方案及可行性分析 3.1研究方案 (1)病例选择:临床上选择符合出血性血小板病诊断标准患者及对照者,分为4组: ①出血伴血小板聚集缺陷组 第8页 版本1003.094国家自然科学基金申请书 第 8 页 版本 1.003.094 2. 项目的研究内容、研究目标以及拟解决的关键问题 2.1 研究内容 （1）出血性血小板病的凝血酶受体研究： ① 受体水平 ： A：出血性血小板病的 GPIb-IX-Ⅴ、GPIbα蛋白的表达及功能部位； B：出血性血小板病的 PAR1、PAR4 的表达及功能部位。 C：在此基础上，研究患者血小板被 PAR1、PAR4 活化肽刺激过程中细胞骨架蛋白成 分肌球蛋白、肌动蛋白、肌动连接蛋白以及 GPIbα水平的动态变化，了解本病发病过 程中两类凝血酶受体对血小板活化的影响程度与途径，以揭示本病皮肤粘膜出血的部 分机制。 ② 分子水平 A：对明显异常者，进行相应受体蛋白基因检测等后续分子生物学研究。包括出血性 血小板病的血小板 GPIbα 、PARⅠ、PAR4、mRNA 的表达；出血性血小板病的血小 板 GPIbα、PARⅠPAR4 的转录水平。 （2）益气活血方对出血性血小板病膜凝血酶受体的影响。 重点观察治疗前后患者 GPIb-IX-Ⅴ、GPIbα蛋白的表达变化以及细胞骨架蛋白的 变化，以部分阐明中药治疗的疗效机理。 2.2 研究目标 研究出血性血小板病的凝血酶受体的功能与活性等，拟从分子和受体水平探索该病 的发病机理，在此基础上运用益气活血方治疗，并重点观察中药对凝血酶受体的影响， 为中药治疗“受体性疾病”提供临床和理论依据。 2.3 拟解决的关键问题 （1）拟解决凝血酶受体的改变与出血性血小板病的发病关系。尤其是该病患者的凝血 酶受体是功能异常或是分子结构异常。 （2）拟解决中药治疗本病的作用环节，是否与调节凝血酶受体的功能有关。 3、拟采取的研究方案及可行性分析 3.1 研究方案 （1）病例选择：临床上选择符合出血性血小板病诊断标准患者及对照者，分为 4 组： ①出血伴血小板聚集缺陷组