正在加载图片...
槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子,模子的两侧形成正负2个槽,供 装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入1个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。 玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡,然后用水冲洗干净,最后用蒸馏水冲洗, 直立干燥,禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边,将两块玻璃板装入夹套内,然 后垂直地放入两半槽之间,长螺杆固定。上螺丝时,要按顺序逐步拧紧,均匀用力。 电泳槽装好后,将琼脂熔化,放冷后注入正极槽的小池内,使在凝胶模子的下部凝结成 约5mm厚的琼脂层。 3)分离胶与浓缩胶的制备将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按 1:2:1:4的比例(VN)混合,配成分离胶液16mL:将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过 硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按1:2:1:4的比例(VV)混合,配成浓缩胶液4mL。将配 好的两种胶液及20-50mL新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气20min。 分离胶液中加入四甲基乙二胺30L,混匀,立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中,注 意防止气泡。分离胶液上覆盖约3mm后的蒸馏水,静置1h以上,待分离胶与水层间界面 清晰时,用滤纸条小心吸净水层。插上电泳槽模板,使其底部距分离胶上层约1cm。向浓缩 胶液中加入四甲基乙二胺15uL,混匀后注入凝胶模子中,静置30min,浓缩胶变为乳白色, 垂直向上小心取出电泳槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约800L,两槽内液面 介于高低玻璃板之间。 4)点样用微量进样器吸取供试品溶液20~40μL,注入电泳槽底部即可。 5)电泳将正负极电泳槽分别与电泳仪的正负极相连,在负极槽电极缓冲液中加溴酚 蓝指示剂1~2滴,打开电源,开始电泳。电泳采用稳流控制,开始时电流15mA,当样品进 入分离胶后,电流25A。为防止温度过高,可将电泳槽放在冰箱内。当溴酚蓝前沿行至距 琼脂层约Icm时,停止电泳,整个过程约需3h。 6)染色与保存打开电泳槽,取出胶板,标记前沿。将凝胶板浸于考马斯亮蓝R250染 色液内,37℃染色1。染色后用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料,再用脱色液脱色。经常 更换脱色液,直到背景清晰为止。凝胶板可放入脱色液中长期保存。 (2)常用中药的电泳鉴定 1)苦杏仁及桃仁供试品溶液的制备:分取供试品粉末各约1.0g,分别加入25%浓 缩胶缓冲液1mL,超声提取30min,3500rpm离心20min,吸取上清液,加入40%蔗糖溶液 (11),混匀。 电泳方法:吸取上述2种溶液各20L,分别点样于同一聚丙烯酰胺凝胶胶片上,用溴 6464 槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子,模子的两侧形成正负 2 个槽,供 装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入 1 个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。 玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡,然后用水冲洗干净,最后用蒸馏水冲洗, 直立干燥,禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边,将两块玻璃板装入夹套内,然 后垂直地放入两半槽之间,长螺杆固定。上螺丝时,要按顺序逐步拧紧,均匀用力。 电泳槽装好后,将琼脂熔化,放冷后注入正极槽的小池内,使在凝胶模子的下部凝结成 约 5mm 厚的琼脂层。 3)分离胶与浓缩胶的制备 将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按 1∶2∶1∶4 的比例(V/V)混合,配成分离胶液 16mL;将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过 硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按 1∶2∶1∶4 的比例(V/V)混合,配成浓缩胶液 4mL。将配 好的两种胶液及 20~50mL 新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气 20min。 分离胶液中加入四甲基乙二胺 30μL,混匀,立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中,注 意防止气泡。分离胶液上覆盖约 3mm 后的蒸馏水,静置 1h 以上,待分离胶与水层间界面 清晰时,用滤纸条小心吸净水层。插上电泳槽模板,使其底部距分离胶上层约 1cm。向浓缩 胶液中加入四甲基乙二胺 15μL,混匀后注入凝胶模子中,静置 30min,浓缩胶变为乳白色, 垂直向上小心取出电泳槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约 800mL,两槽内液面 介于高低玻璃板之间。 4)点样 用微量进样器吸取供试品溶液 20~40μL,注入电泳槽底部即可。 5)电泳 将正负极电泳槽分别与电泳仪的正负极相连,在负极槽电极缓冲液中加溴酚 蓝指示剂 1~2 滴,打开电源,开始电泳。电泳采用稳流控制,开始时电流 15mA,当样品进 入分离胶后,电流 25mA。为防止温度过高,可将电泳槽放在冰箱内。当溴酚蓝前沿行至距 琼脂层约 1cm 时,停止电泳,整个过程约需 3h。 6)染色与保存 打开电泳槽,取出胶板,标记前沿。将凝胶板浸于考马斯亮蓝 R250 染 色液内,37℃染色 1h。染色后用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料,再用脱色液脱色。经常 更换脱色液,直到背景清晰为止。凝胶板可放入脱色液中长期保存。 (2)常用中药的电泳鉴定 1)苦杏仁及桃仁 供试品溶液的制备:分取供试品粉末各约 1.0g,分别加入 25%浓 缩胶缓冲液 1mL,超声提取 30min,3 500rpm 离心 20min,吸取上清液,加入 40%蔗糖溶液 (1∶1),混匀。 电泳方法:吸取上述 2 种溶液各 20μL,分别点样于同一聚丙烯酰胺凝胶胶片上,用溴
<<向上翻页向下翻页>>
©2008-现在 cucdc.com 高等教育资讯网 版权所有