2选择实验 2.1中药的光谱鉴定 2.1.1荧光鉴定 内容提要 本实验采用荧光法对不同药用部位的19种中药进行品种鉴定。 通过实验掌握荧光鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药荧光鉴别 的特征。 原理 荧光鉴定是利用中药中所含的某些化学成分（通常具有共轭双键体系和芳香环分子）在 吸收自然光或紫外光后能发生荧光的性质，对中药及其所含成分进行鉴定。本实验主要是通 过荧光定性分析以鉴定中药的品种或质量。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器荧光分光光度计，紫外分析灯(365nm,254nm),试管，烧杯，吸管，漏斗， 滤纸，广口瓶，索氏提取器，超声波提取器，离心机，粉碎机，天平，电炉子等。 2)材料药材：牛膝，川牛膝，黄连，秦艽，麦冬，蜈蚣，珍珠。粉末或饮片：板蓝根， 葛根，白芷，川芎，丹参，苏木，厚朴，秦皮，木瓜，栀子，石韦，天麻。 (2)试剂1%氨水，乙醚，乙醇，氢氧化钠试液，盐酸，氯仿，三氯化铝试液，石 油醚(60-90℃)。 操作步骤 (1)荧光检查 55
55 2 选择实验 2.1 中药的光谱鉴定 2.1.1 荧光鉴定 内容提要 本实验采用荧光法对不同药用部位的 19 种中药进行品种鉴定。 通过实验掌握荧光鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药荧光鉴别 的特征。 原理 荧光鉴定是利用中药中所含的某些化学成分（通常具有共轭双键体系和芳香环分子）在 吸收自然光或紫外光后能发生荧光的性质，对中药及其所含成分进行鉴定。本实验主要是通 过荧光定性分析以鉴定中药的品种或质量。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 荧光分光光度计，紫外分析灯（365nm，254nm），试管，烧杯，吸管，漏斗， 滤纸，广口瓶，索氏提取器，超声波提取器，离心机，粉碎机，天平，电炉子等。 2)材料 药材：牛膝，川牛膝，黄连，秦艽，麦冬，蜈蚣，珍珠。粉末或饮片：板蓝根， 葛根，白芷，川芎，丹参，苏木，厚朴，秦皮，木瓜，栀子，石韦，天麻。 （2）试剂 1% 氨水，乙醚，乙醇，氢氧化钠试液，盐酸，氯仿，三氯化铝试液，石 油醚(60~90℃)。 操作步骤 （1）荧光检查
1)牛膝取牛膝断面，置紫外光灯下观察，显黄色荧光：滴加1%氨水后，显淡黄绿 色荧光（川牛膝新鲜断面置紫外光灯下显淡绿色荧光，滴加1%氨水后，显绿黄色荧光）。 2)黄连取黄连药材断面置在紫外光灯下观察，显金黄色荧光，木质部尤为显著。 3)板蓝根取板蓝根水煎液，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 4)葛根取葛根粉末少量在紫外光灯下观察，显亮蓝色荧光。 5)白芷取白芷粉末0.5g,加乙醚适量，冷浸，振摇，放置，取上清液2滴，点于滤 纸上，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 6)川芎取川芎横切面置紫外光灯下观察，显亮淡紫色荧光，外皮显暗棕色荧光。 7)秦艽取秦艽药材横切面，置紫外光灯下观察，显黄白色或金黄色荧光。 8)丹参取丹参粉末5g,加水50mL,煮沸15~20min,放冷，滤过，滤液置水浴 上浓缩至黏稠状，放冷后，加乙醇3~5L使溶解，滤过，滤液作如下试验：取滤液数滴， 点于滤纸条上，干后，置紫外光灯下观察，显亮蓝灰色荧光。将此纸条悬挂在氨水瓶中（不 接触液面)，20min后取出，置紫外光灯(365nm)下观察，显淡亮蓝绿色荧光。 9)麦冬取麦冬切片置紫外光灯下观察，显浅蓝色荧光。 10)苏木取苏木粉末10g,置带塞试管中，加水50mL,密塞，反复振摇并放置4h, 滤过，滤液显橘红色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 取滤液加氢氧化钠试液2滴，显猩红色，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光，再加盐酸使 成酸性后，溶液变为橙色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 11)厚朴取厚朴粗粉3g,加氯仿30mL,回流30min,滤过。取滤液，在紫外光灯下， 顶面观显紫色，侧面观显二层，上层黄绿色，下层黄绿色荧光。 12)秦皮取秦皮少许浸入水或乙醇中，浸出液在日光下可见碧蓝色荧光。 13)木瓜取木瓜粉末1g,加70%乙醇10mL,回流1h,滤过，取滤液备用。取滤液 滴于滤纸上，待干，喷三氯化铝试液，干燥后，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 14)栀子取栀子粉末0.2g,加水5mL,水浴加热3min,取上清液滴于滤纸上，挥干， 置紫外光灯下观察，显天蓝色荧光。 15)石韦取石韦粉末2g,加95%乙醇溶液20mL回流提取30min,取滤液加蒸馏水 6mL,再加石油醚(60-90℃)20mL抽提，分取乙醇层，在水浴上蒸干，残渣加95%乙醇溶液 8L溶解，取溶液滴于滤纸上，干后置紫外光灯下观察。庐山石韦显黄色荧光，石韦与有 柄石韦均显蓝色荧光。 16)蜈蚣取蜈蚣水浸液在紫外光灯(254m)下观察，呈现亮绿色荧光。 56
56 1）牛膝 取牛膝断面，置紫外光灯下观察，显黄色荧光；滴加 1% 氨水后，显淡黄绿 色荧光（川牛膝新鲜断面置紫外光灯下显淡绿色荧光，滴加 1%氨水后，显绿黄色荧光）。 2）黄连 取黄连药材断面置在紫外光灯下观察，显金黄色荧光，木质部尤为显著。 3）板蓝根 取板蓝根水煎液，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 4）葛根 取葛根粉末少量在紫外光灯下观察，显亮蓝色荧光。 5）白芷 取白芷粉末 0.5g，加乙醚适量，冷浸，振摇，放置，取上清液 2 滴，点于滤 纸上，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 6）川芎 取川芎横切面置紫外光灯下观察，显亮淡紫色荧光，外皮显暗棕色荧光。 7）秦艽 取秦艽药材横切面，置紫外光灯下观察，显黄白色或金黄色荧光。 8）丹参 取丹参粉末 5 g，加水 50 mL，煮沸 15～20min，放冷，滤过，滤液置水浴 上浓缩至黏稠状，放冷后，加乙醇 3～5 mL 使溶解，滤过，滤液作如下试验：取滤液数滴， 点于滤纸条上，干后，置紫外光灯下观察，显亮蓝灰色荧光。将此纸条悬挂在氨水瓶中（不 接触液面），20min 后取出，置紫外光灯（365nm）下观察，显淡亮蓝绿色荧光。 9）麦冬 取麦冬切片置紫外光灯下观察，显浅蓝色荧光。 10）苏木 取苏木粉末 10 g，置带塞试管中，加水 50 mL，密塞，反复振摇并放置 4 h， 滤过，滤液显橘红色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 取滤液加氢氧化钠试液 2 滴，显猩红色，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光，再加盐酸使 成酸性后，溶液变为橙色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 11）厚朴 取厚朴粗粉 3g，加氯仿 30mL，回流 30min，滤过。取滤液，在紫外光灯下， 顶面观显紫色，侧面观显二层，上层黄绿色，下层黄绿色荧光。 12）秦皮 取秦皮少许浸入水或乙醇中，浸出液在日光下可见碧蓝色荧光。 13）木瓜 取木瓜粉末 1g，加 70%乙醇 10mL，回流 1h，滤过，取滤液备用。取滤液 滴于滤纸上，待干，喷三氯化铝试液，干燥后，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 14）栀子 取栀子粉末 0.2g，加水 5mL，水浴加热 3min，取上清液滴于滤纸上，挥干， 置紫外光灯下观察，显天蓝色荧光。 15）石韦 取石韦粉末 2g，加 95%乙醇溶液 20mL 回流提取 30min，取滤液加蒸馏水 6mL，再加石油醚(60~90℃)20mL 抽提，分取乙醇层，在水浴上蒸干，残渣加 95%乙醇溶液 8mL 溶解，取溶液滴于滤纸上，干后置紫外光灯下观察。庐山石韦显黄色荧光，石韦与有 柄石韦均显蓝色荧光。 16）蜈蚣 取蜈蚣水浸液在紫外光灯（254nm）下观察，呈现亮绿色荧光
17)珍珠取珍珠横剖面置荧光灯下观察，天然珍珠显浅蓝色荧光，养殖珍珠显亮黄绿 色荧光，通常环周部分较明亮。 (2)荧光光谱取天麻粉末38mg,置具塞试管中，加乙醇10mL,密塞，超声波提 取60min,离心，取上清液作为供试品溶液。选择激发波长，-ex(max)254nm,用荧光分光光度 计测定。供试品在302nm和592nm波长处有特征峰。 要点及难点解答 (1)必须指出，并不是所有的中药或其成分都有发生荧光的性质。有些中药本身不发 生荧光，但若用酸、碱或荧光染色处理后，就可能使某些成分在紫外光线下变为可见色彩。 有的中药附有地衣或有多量霉菌生长，也可能有荧光出现，因此荧光鉴定还可用于检查某些 中药的变质情况。此外，在色谱分析应用上，也可能使吸附在吸附柱上、纸条上及薄层板上 的各种成分产生荧光色谱。 (2)中药荧光检查所用的紫外分析灯，在没有特殊注明的情况下，波长均为365m。 (3)荧光鉴定法灵敏度高，能够测定出104109mol/L浓度的荧光物质。 (4)荧光鉴定中药有直接荧光法和间接荧光法两种类型，直接荧光法是根据中药本身所 含物质产生荧光的特性直接观察或测定：间接荧光发是利用具有高灵敏度的荧光试剂使无荧 光或荧光很弱的中药产生荧光载测定，或通过化学反应使中药中的化学成分产生荧光基团再 进行测定。 习题与作业 (1)习题 1)用荧光法鉴定中药的原理与基本方法。 2)总结常用中药荧光定性鉴定的主要特征。 (2)作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.1.2可见-紫外光谱鉴定 57
57 17）珍珠 取珍珠横剖面置荧光灯下观察，天然珍珠显浅蓝色荧光，养殖珍珠显亮黄绿 色荧光，通常环周部分较明亮。 （2）荧光光谱 取天麻粉末 38mg，置具塞试管中，加乙醇 10mL，密塞，超声波提 取 60min，离心，取上清液作为供试品溶液。选择激发波长 λex(max)254nm，用荧光分光光度 计测定。供试品在 302nm 和 592nm 波长处有特征峰。 要点及难点解答 （1）必须指出，并不是所有的中药或其成分都有发生荧光的性质。有些中药本身不发 生荧光，但若用酸、碱或荧光染色处理后，就可能使某些成分在紫外光线下变为可见色彩。 有的中药附有地衣或有多量霉菌生长，也可能有荧光出现，因此荧光鉴定还可用于检查某些 中药的变质情况。此外，在色谱分析应用上，也可能使吸附在吸附柱上、纸条上及薄层板上 的各种成分产生荧光色谱。 （2）中药荧光检查所用的紫外分析灯，在没有特殊注明的情况下，波长均为 365nm。 （3）荧光鉴定法灵敏度高，能够测定出 10－4~10－9mol/L 浓度的荧光物质。 （4）荧光鉴定中药有直接荧光法和间接荧光法两种类型，直接荧光法是根据中药本身所 含物质产生荧光的特性直接观察或测定；间接荧光发是利用具有高灵敏度的荧光试剂使无荧 光或荧光很弱的中药产生荧光载测定，或通过化学反应使中药中的化学成分产生荧光基团再 进行测定。 习题与作业 （1）习题 1）用荧光法鉴定中药的原理与基本方法。 2）总结常用中药荧光定性鉴定的主要特征。 （2）作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.1.2 可见-紫外光谱鉴定
内容提要 本实验采用可见-紫外光谱法对不同药用部位的9种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握可见-紫外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中 药可见-紫外光谱鉴别的特征。 原理 本方法是用分光光度计测定中药中被测物质在紫外光区和可见光区特定的波长处或一 定的波长范围光的吸收度，对中药进行定性或定量分析。 (1)紫外光谱法是利用中药中所含成分有不饱和结构及共轭双键结构，在紫外光的照 射下，能引起物质内部原子、分子、运动状态的变化，消耗一部分能量后再透射出来，通过 棱镜或光栅分成按波长顺序排列的吸收光谱，不同物质产生的紫外吸收光谱各不相同。由于 不同中药所含不饱和成分的差异，即根据光谱图所提供的参数，如最大吸收波长、最小吸收 波长、肩峰及吸收系数等作为鉴定的依据。 (2)可见吸收度光谱法仅适用鉴定本身具有颜色或能与显色剂作用呈现颜色的中药及其 化学成分。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器紫外分光光度计，硅胶干燥器，分析天平，锥形瓶，滤纸，漏斗，容量瓶(10mL, 100mL,500mL),水浴锅，3号垂熔玻璃漏斗，样品筛，碘量瓶，分液漏斗，索氏提取器， 粉碎机等。 2)材料粉末或药材：红花，五味子，黄亲，半夏，天麻，蟾酥，附子，血竭，赤芍。 (2)试剂丙酮，无水乙醇，氯仿，甲醇，乙醇，乙醚，氨试液，0.25moL硫酸溶 液等。 操作步骤 1)红花 58
58 内容提要 本实验采用可见-紫外光谱法对不同药用部位的 9 种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握可见-紫外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中 药可见-紫外光谱鉴别的特征。 原理 本方法是用分光光度计测定中药中被测物质在紫外光区和可见光区特定的波长处或一 定的波长范围光的吸收度，对中药进行定性或定量分析。 （1）紫外光谱法是利用中药中所含成分有不饱和结构及共轭双键结构，在紫外光的照 射下，能引起物质内部原子、分子、运动状态的变化，消耗一部分能量后再透射出来，通过 棱镜或光栅分成按波长顺序排列的吸收光谱，不同物质产生的紫外吸收光谱各不相同。由于 不同中药所含不饱和成分的差异，即根据光谱图所提供的参数，如最大吸收波长、最小吸收 波长、肩峰及吸收系数等作为鉴定的依据。 （2）可见吸收度光谱法仅适用鉴定本身具有颜色或能与显色剂作用呈现颜色的中药及其 化学成分。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 紫外分光光度计，硅胶干燥器，分析天平，锥形瓶，滤纸，漏斗，容量瓶（10mL， 100mL，500mL），水浴锅，3 号垂熔玻璃漏斗，样品筛，碘量瓶，分液漏斗，索氏提取器， 粉碎机等。 2)材料 粉末或药材：红花，五味子，黄亲，半夏，天麻，蟾酥，附子，血竭，赤芍。 （2）试剂 丙酮，无水乙醇，氯仿，甲醇，乙醇，乙醚，氨试液， 0.25mol/L 硫酸溶 液等。 操作步骤 1）红花
黄色素吸收度测定：取本品置硅胶干燥器中干燥24h,研成细粉，精密称取0.1g,置锥 形瓶中，加水l50mL,浸泡1h,时时振摇，用滤纸滤过，滤液置500mL量瓶中，用水分数 次洗涤滤纸上的残渣至洗液无色，加水至刻度，摇匀，用分光光度法在401nm的波长处测 吸收度，不得低于0.40。 红色素吸收度测定：取上述细粉约0.25g,精密称定，置锥形瓶中，加80%丙酮溶液50mL, 置50℃水浴上温浸90min,放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100mL量瓶中，用 80%丙酮溶液25L分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80%丙酮溶液至刻度，摇匀，用分光光 度法测定在518nm的波长处测吸收度，不得低于0.20。 2)五味子称取本品粉末（阴干，水分10%~15%，过20-40目筛）2份，每份约1g, 分置于碘量瓶中，各加水、无水乙醇20.0mL,室温浸泡2h,振摇，滤过，作为供试品溶液。 先将供试品溶液上机扫描测试，吸收度上限超过3.0时，应将供试品溶液用相同溶剂稀释至 吸收度上限不超过3.0。水溶液在285.0nm、208.5nm处有最大吸收，无水乙醇溶液在 285.0nm、240.0nm处有最大吸收。 3)蟾酥取本品1%的氯仿提取液，蒸干后用甲醇溶解，测定其紫外光谱，在波长300nm 附近有最大吸收。 4)黄芩取本品粉末0.2g,加乙醇5mL,浸渍24h,滤过.取滤液，用乙醇稀释为1mgmL 的溶液，以乙醇为空白，用紫外分光光度计测定，于278nm、219nm、320±1nm处有吸收 峰。 5)半夏取本品粉末0.2g,加乙醇20mL,放置12h,滤过，滤液供测试用。样品在 212士3nm、220士2nm处有最大吸收。 6)附子取黑顺片或白附片粗粉4g,加乙醚30mL与氨试液5mL,振摇20min,滤过。 滤液置分液漏斗中，加0.25mol/L硫酸液20mL,振摇提取，分取酸液测定其紫外光谱，在 231nm与274nm波长处有最大吸收。 7)天麻取本品粉末0.2g,加乙醇10mL,加热回流1h,滤过。取滤液1mL,置10mL 容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用分光光度法测定，在270m的波长处有最大吸收或出 现1个肩峰。 8)血竭取本品粉末30.0mg,精密称量，置50mL量瓶中，加乙醇适量，浸泡10min 后用力振摇20min使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，置1cm石英吸收池中，以同批乙醇作空 白，照紫外分光光度法测定，在270±1nm处有最大吸收。 9)赤芍取本品粉末0.2g,加乙醇20mL,放置12h,滤过，滤液用乙醇稀释，制成 59
59 黄色素吸收度测定：取本品置硅胶干燥器中干燥 24h，研成细粉，精密称取 0.1g，置锥 形瓶中，加水 150mL，浸泡 1h，时时振摇，用滤纸滤过，滤液置 500mL 量瓶中，用水分数 次洗涤滤纸上的残渣至洗液无色，加水至刻度，摇匀，用分光光度法在 401nm 的波长处测 吸收度，不得低于 0.40。 红色素吸收度测定：取上述细粉约 0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加 80%丙酮溶液 50mL， 置 50℃水浴上温浸 90min，放冷，用 3 号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于 100mL 量瓶中，用 80%丙酮溶液 25mL 分次洗涤，洗液并入量瓶中，加 80%丙酮溶液至刻度，摇匀，用分光光 度法测定在 518nm 的波长处测吸收度，不得低于 0.20。 2）五味子 称取本品粉末（阴干，水分 10%~15%，过 20~40 目筛）2 份，每份约 1g， 分置于碘量瓶中，各加水、无水乙醇 20.0mL，室温浸泡 2h，振摇，滤过，作为供试品溶液。 先将供试品溶液上机扫描测试，吸收度上限超过 3.0 时，应将供试品溶液用相同溶剂稀释至 吸收度上限不超过 3.0。水溶液在 285.0nm 、 208.5nm 处有最大吸收，无水乙醇溶液在 285.0nm、 240.0nm 处有最大吸收。 3）蟾酥 取本品 1%的氯仿提取液，蒸干后用甲醇溶解，测定其紫外光谱，在波长 300nm 附近有最大吸收。 4）黄芩 取本品粉末 0.2g，加乙醇 5mL，浸渍 24h，滤过。取滤液，用乙醇稀释为 1mg/mL 的溶液，以乙醇为空白，用紫外分光光度计测定，于 278nm、219nm、320±1nm 处有吸收 峰。 5）半夏 取本品粉末 0.2g，加乙醇 20mL，放置 12h，滤过，滤液供测试用。样品在 212±3nm、220±2nm 处有最大吸收。 6）附子 取黑顺片或白附片粗粉 4g，加乙醚 30mL 与氨试液 5mL，振摇 20min，滤过。 滤液置分液漏斗中，加 0.25mol/L 硫酸液 20mL，振摇提取，分取酸液测定其紫外光谱，在 231nm 与 274nm 波长处有最大吸收。 7）天麻 取本品粉末 0.2g，加乙醇 10mL，加热回流 1h，滤过。取滤液 1mL，置 10mL 容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用分光光度法测定，在 270nm 的波长处有最大吸收或出 现 1 个肩峰。 8）血竭 取本品粉末 30.0mg，精密称量，置 50mL 量瓶中，加乙醇适量，浸泡 10min 后用力振摇 20min 使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，置 1cm 石英吸收池中，以同批乙醇作空 白，照紫外分光光度法测定，在 270±1nm 处有最大吸收。 9）赤芍 取本品粉末 0.2g，加乙醇 20mL，放置 12h，滤过，滤液用乙醇稀释，制成
1mg/mL溶液，测定其紫外吸收光谱，本品在277±2nm波长处有最大吸收。 要点及难点解答 (1)中药的紫外吸收光谱是多种成分特征吸收光谱叠加而成的，在一定的条件下，中 药多成分的复杂组合也有一定的规律性，从而在紫外叠加光谱上显示出一定的特异性和稳定 性。 (2)分光光度计紫外光区的波长范围200~400nm:可见光区的波长范围400-760nm。 (3)测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近必须符合下列要求： 溶剂和吸收池的吸收度在220~240nm范围内不得超过0.40：在241~250nm范围内不得超过 0.20:在251~300nm范围内不得超过0.10：在300nm以上不得超过0.05。 习题与作业 (1)习题 1)用可见-紫外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2)总结常用中药的紫外光谱定性鉴定的主要特征。 (2)作业 简述实验步骤，记录实验结果。 2.1.3红外光谱鉴定 内容提要 本实验采用红外光谱法对不同药用部位的6种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握红外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药红外 光谱鉴别的特征。 60
60 1mg/mL 溶液，测定其紫外吸收光谱,本品在 277±2nm 波长处有最大吸收。 要点及难点解答 （1）中药的紫外吸收光谱是多种成分特征吸收光谱叠加而成的，在一定的条件下，中 药多成分的复杂组合也有一定的规律性，从而在紫外叠加光谱上显示出一定的特异性和稳定 性。 （2）分光光度计紫外光区的波长范围 200~400nm；可见光区的波长范围 400~760nm。 （3）测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近必须符合下列要求： 溶剂和吸收池的吸收度在 220~240nm 范围内不得超过 0.40；在 241~250nm 范围内不得超过 0.20；在 251~300nm 范围内不得超过 0.10；在 300nm 以上不得超过 0.05。 习题与作业 （1）习题 1）用可见-紫外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2）总结常用中药的紫外光谱定性鉴定的主要特征。 （2）作业 简述实验步骤，记录实验结果。 2.1.3 红外光谱鉴定 内容提要 本实验采用红外光谱法对不同药用部位的 6 种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握红外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药红外 光谱鉴别的特征
原理 红外光谱法是以红外区域电磁波连续光谱作为辐射源照射供试品，记录供试品吸收曲线 的一种物理光学分析方法。中药的红外光谱鉴定是通过测定其粉末、提取物或化学单体的红 外吸收曲线反映中药所含各组分官能团的差异，以鉴别中药的品种和质量，主要用于中药的 定性鉴别。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器红外分光光度计，样品筛，试管，烧杯，容量瓶(5L),供试品瓶，粉碎机 等。 2)材料粉末：黄芩，赤芍，血竭（进口血竭）达马胶，松香，全蝎，蝉蜕，天麻。 (2)试剂溴化钾，乙醚，50%乙醇等。 操作步骤 1)黄芩取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱。本品在2927cm1、1614 cm1、1027cm1有特征峰，在1451cm、1360cm1、1247cm1处有3个小峰并列出现。 2)赤芍取本品粉末（过200目筛），采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在2930 cml、1622cm1、1050cm1、1317cm1、781cm1处有特征峰（图8-43）。 3)血竭取进口血竭乙醚提取物测定其红外光谱，特征吸收峰是1120cm1、1610cm (掺假物达马胶的红外吸收峰是1380cm、1460cm、1707cml,以1707cm1为特征吸 收峰：松香的特征吸收峰主要是1692cml、1280cm)。 4)全蝎取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在2925cm、2854cm1、 1658cml、1536cm'、1240cm1、1745cm处有特征峰。 5)蝉蜕取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在2962cm1、2930cml、 1656cm1、1546cm1、1259cm1、1031cm处有特征峰。 6)天麻取本品粉末2μg,采用溴化钾压片法测其红外光谱，供试品在1700~1600cm 有1个中强的宽吸收，峰位为1645cm'。 或取本品50%乙醇浸出物(10.0mg/2.0mL),供试品在1510cm1处有1明显的、尖锐的 6
61 原理 红外光谱法是以红外区域电磁波连续光谱作为辐射源照射供试品，记录供试品吸收曲线 的一种物理光学分析方法。中药的红外光谱鉴定是通过测定其粉末、提取物或化学单体的红 外吸收曲线反映中药所含各组分官能团的差异，以鉴别中药的品种和质量，主要用于中药的 定性鉴别。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 红外分光光度计，样品筛，试管，烧杯，容量瓶（5mL），供试品瓶，粉碎机 等。 2)材料 粉末：黄芩，赤芍，血竭（进口血竭）达马胶，松香，全蝎，蝉蜕，天麻。 （2）试剂 溴化钾，乙醚，50%乙醇等。 操作步骤 1）黄芩 取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱。本品在 2 927 cm-1、1 614 cm-1、1 027 cm-1 有特征峰，在 1 451 cm-1、1 360 cm-1、1 247 cm-1 处有 3 个小峰并列出现。 2）赤芍 取本品粉末（过 200 目筛），采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在 2 930 cm-1、1 622 cm-1、1 050 cm-1、1 317 cm-1、781 cm-1 处有特征峰 (图 8- 43) 。 3）血竭 取进口血竭乙醚提取物测定其红外光谱，特征吸收峰是 1 120 cm-1、1 610 cm-1 （掺假物达马胶的红外吸收峰是 1 380 cm-1、1 460 cm-1、1 707 cm-1，以 1 707 cm-1 为特征吸 收峰；松香的特征吸收峰主要是 1 692 cm-1、1 280 cm-1）。 4）全蝎 取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在 2 925 cm-1、2 854 cm-1、 1 658 cm-1、1 536 cm-1、1 240 cm-1、1 745 cm-1 处有特征峰。 5）蝉蜕 取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在 2 962cm-1、2 930 cm-1、 1 656 cm-1、1 546 cm-1、1 259 cm-1、1 031 cm-1 处有特征峰。 6）天麻 取本品粉末 2μg，采用溴化钾压片法测其红外光谱，供试品在 1 700～1 600cm-1 有 1 个中强的宽吸收，峰位为 1 645cm-1。 或取本品 50%乙醇浸出物(10.0mg/2.0mL)，供试品在 1 510 cm-1 处有 1 明显的、尖锐的
吸收峰，在1235cm1处有1个明显的宽吸收峰。 要点及难点解答 (1)用红外光谱法鉴定中药，实质上就是解析红外光谱或与标准光谱进行对照，从红外 光谱所提供的信息来确定未知中药的种类及其性质。红外光谱法主要用于中药的定性鉴定， 在定性分析中，应选用适宜的样品处理方法及测量条件，以便与标准光谱进行对照。 (2)红外区的波长范围是0.76~500um,在可见光与微波之间，习惯上按红外线的波 长将红外波谱分成3个区段，即近红外区、中红外区和远红外区，其中红外区是应用最广泛 的区段。进行红外光谱分析时，首先应根据对象不同，采用各种分离手段，保证被测样品的 纯度。供试品制备可根据物态的不同采用不同的方法进行，如液体样品采用液膜法和溶液法： 固体样品采用压片法、糊剂法、薄膜法、溶液法：气体样品纯化后可直接用气体池进行测定。 (3)采用红外光谱法鉴定生物类中药，一般应固定供试品的条件，如品种、产地、商品 规格或加工方法等。 (4)供试品的粉末均过200目筛。 习题与作业 (1)习题 1)用红外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2)总结常用中药的红外光谱定性鉴定的主要特征。 (2)作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.2中药的电泳鉴定 内容提要 本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法对苦杏仁等7种中药的进行品种或质量鉴 定。 62
62 吸收峰，在 1 235cm-1 处有 1 个明显的宽吸收峰。 要点及难点解答 （1）用红外光谱法鉴定中药，实质上就是解析红外光谱或与标准光谱进行对照，从红外 光谱所提供的信息来确定未知中药的种类及其性质。红外光谱法主要用于中药的定性鉴定， 在定性分析中，应选用适宜的样品处理方法及测量条件，以便与标准光谱进行对照。 （2）红外区的波长范围是 0.76～500μm，在可见光与微波之间，习惯上按红外线的波 长将红外波谱分成 3 个区段，即近红外区、中红外区和远红外区，其中红外区是应用最广泛 的区段。进行红外光谱分析时，首先应根据对象不同，采用各种分离手段，保证被测样品的 纯度。供试品制备可根据物态的不同采用不同的方法进行，如液体样品采用液膜法和溶液法； 固体样品采用压片法、糊剂法、薄膜法、溶液法；气体样品纯化后可直接用气体池进行测定。 （3）采用红外光谱法鉴定生物类中药，一般应固定供试品的条件，如品种、产地、商品 规格或加工方法等。 （4）供试品的粉末均过 200 目筛。 习题与作业 （1）习题 1）用红外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2）总结常用中药的红外光谱定性鉴定的主要特征。 （2）作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.2 中药的电泳鉴定 内容提要 本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）法对苦杏仁等 7 种中药的进行品种或质量鉴 定
通过实验掌握电泳鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药电泳鉴别 的特征。 原理 电泳是一种分离和鉴定混合物中带电离子的技术。本实验是利用中药含有蛋白质带电荷 的成分，在同一电场作用下，由于各组分所带电荷的性质、电荷数目以及分子质量不同，而 泳动方向和速度不同，在一定时间内，各成分的泳动率不同，结合谱带数和染色不同达到鉴 定的目的。聚丙烯酰胺凝胶电泳是由丙烯酰胺和N,N-亚甲基双丙烯酰胺在催化剂作用下聚 合交联成三维网状结构的凝胶，并以此为支持物的电泳技术。在电泳开始阶段，由于连续 pH梯度作用，将供试品压缩成1条狭窄的区带（浓缩效应），再加上整个电泳过程中存在的 分子筛效应和电荷效应，从而提高供试品的分离效果。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器SCR-稳压稳流电泳仪或CYYⅢ稳压稳流电泳仪，ZVS-100型垂直板电泳槽， 恒温培养箱，离心机，分析天平，扭力天平，真空干燥器，微量进样器，烧杯(100mL,500mL, 1000mL),量筒(10mL,100mL,1000mL),刻度吸管(1mL,2mL,10mL),试管，离心 管，大培养皿，玻璃注射器(5mL,10mL,20mL),剪刀，镊子，研体，滤纸，粉碎机等。 2)材料药材或粉末：苦杏仁，桃仁，蕲蛇，乌梢蛇，金钱白花蛇，小茴香，莳萝子。 (2)试剂分离胶缓冲液，分离胶贮液，浓缩胶缓冲液，浓缩胶贮液，电极缓冲液， 40%蔗糖溶液，过硫酸铵溶液，四甲基乙二胺，溴酚蓝指示剂，考马斯亮蓝染色液，脱色液 等。 操作步骤 (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本方法 1)供试品液的制备取纯净的供试品约1g,加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液（或电极缓 冲液、稀醇液等)0.5~1mL,研磨成匀浆，3500rpm离心15min,取上清液加等体积的40% 蔗糖溶液，4℃保存，供点样用。 2)电泳槽的安装垂直板电泳槽的式样很多，目前流行的是用有机玻璃做的由两个半 6⊙
63 通过实验掌握电泳鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药电泳鉴别 的特征。 原理 电泳是一种分离和鉴定混合物中带电离子的技术。本实验是利用中药含有蛋白质带电荷 的成分，在同一电场作用下，由于各组分所带电荷的性质、电荷数目以及分子质量不同，而 泳动方向和速度不同，在一定时间内，各成分的泳动率不同，结合谱带数和染色不同达到鉴 定的目的。聚丙烯酰胺凝胶电泳是由丙烯酰胺和 N,N-亚甲基双丙烯酰胺在催化剂作用下聚 合交联成三维网状结构的凝胶，并以此为支持物的电泳技术。在电泳开始阶段，由于连续 pH 梯度作用，将供试品压缩成 1 条狭窄的区带（浓缩效应），再加上整个电泳过程中存在的 分子筛效应和电荷效应，从而提高供试品的分离效果。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 SCR-稳压稳流电泳仪或 CYY-Ⅲ稳压稳流电泳仪，ZVS-100 型垂直板电泳槽， 恒温培养箱，离心机，分析天平，扭力天平，真空干燥器，微量进样器，烧杯（100mL，500mL， 1000mL），量筒（10mL，100mL，1000mL），刻度吸管（1mL，2mL，10mL），试管，离心 管，大培养皿，玻璃注射器（5mL，10mL，20mL），剪刀，镊子，研钵，滤纸，粉碎机等。 2)材料 药材或粉末：苦杏仁，桃仁，蕲蛇，乌梢蛇，金钱白花蛇，小茴香，莳萝子。 （2）试剂 分离胶缓冲液，分离胶贮液，浓缩胶缓冲液，浓缩胶贮液，电极缓冲液， 40%蔗糖溶液，过硫酸铵溶液，四甲基乙二胺，溴酚蓝指示剂，考马斯亮蓝染色液，脱色液 等。 操作步骤 （1）聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本方法 1）供试品液的制备 取纯净的供试品约 1g，加入稀释 4 倍的浓缩胶缓冲液（或电极缓 冲液、稀醇液等）0.5~1mL，研磨成匀浆，3500rpm 离心 15min，取上清液加等体积的 40% 蔗糖溶液[3]，4℃保存，供点样用。 2）电泳槽的安装 垂直板电泳槽的式样很多，目前流行的是用有机玻璃做的由两个半
槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子，模子的两侧形成正负2个槽，供 装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入1个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。 玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡，然后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗， 直立干燥，禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边，将两块玻璃板装入夹套内，然 后垂直地放入两半槽之间，长螺杆固定。上螺丝时，要按顺序逐步拧紧，均匀用力。 电泳槽装好后，将琼脂熔化，放冷后注入正极槽的小池内，使在凝胶模子的下部凝结成 约5mm厚的琼脂层。 3)分离胶与浓缩胶的制备将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按 1:2:1:4的比例(VN)混合，配成分离胶液16mL:将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过 硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按1：2：1：4的比例(VV)混合，配成浓缩胶液4mL。将配 好的两种胶液及20-50mL新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气20min。 分离胶液中加入四甲基乙二胺30L,混匀，立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中，注 意防止气泡。分离胶液上覆盖约3mm后的蒸馏水，静置1h以上，待分离胶与水层间界面 清晰时，用滤纸条小心吸净水层。插上电泳槽模板，使其底部距分离胶上层约1cm。向浓缩 胶液中加入四甲基乙二胺15uL,混匀后注入凝胶模子中，静置30min,浓缩胶变为乳白色， 垂直向上小心取出电泳槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约800L,两槽内液面 介于高低玻璃板之间。 4)点样用微量进样器吸取供试品溶液20~40μL,注入电泳槽底部即可。 5)电泳将正负极电泳槽分别与电泳仪的正负极相连，在负极槽电极缓冲液中加溴酚 蓝指示剂1~2滴，打开电源，开始电泳。电泳采用稳流控制，开始时电流15mA,当样品进 入分离胶后，电流25A。为防止温度过高，可将电泳槽放在冰箱内。当溴酚蓝前沿行至距 琼脂层约Icm时，停止电泳，整个过程约需3h。 6)染色与保存打开电泳槽，取出胶板，标记前沿。将凝胶板浸于考马斯亮蓝R250染 色液内，37℃染色1。染色后用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料，再用脱色液脱色。经常 更换脱色液，直到背景清晰为止。凝胶板可放入脱色液中长期保存。 (2)常用中药的电泳鉴定 1)苦杏仁及桃仁供试品溶液的制备：分取供试品粉末各约1.0g,分别加入25%浓 缩胶缓冲液1mL,超声提取30min,3500rpm离心20min,吸取上清液，加入40%蔗糖溶液 (11),混匀。 电泳方法：吸取上述2种溶液各20L,分别点样于同一聚丙烯酰胺凝胶胶片上，用溴 64
64 槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子，模子的两侧形成正负 2 个槽，供 装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入 1 个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。 玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡，然后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗， 直立干燥，禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边，将两块玻璃板装入夹套内，然 后垂直地放入两半槽之间，长螺杆固定。上螺丝时，要按顺序逐步拧紧，均匀用力。 电泳槽装好后，将琼脂熔化，放冷后注入正极槽的小池内，使在凝胶模子的下部凝结成 约 5mm 厚的琼脂层。 3）分离胶与浓缩胶的制备 将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按 1∶2∶1∶4 的比例（V/V）混合，配成分离胶液 16mL；将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过 硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按 1∶2∶1∶4 的比例（V/V）混合，配成浓缩胶液 4mL。将配 好的两种胶液及 20~50mL 新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气 20min。 分离胶液中加入四甲基乙二胺 30μL，混匀，立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中，注 意防止气泡。分离胶液上覆盖约 3mm 后的蒸馏水，静置 1h 以上，待分离胶与水层间界面 清晰时，用滤纸条小心吸净水层。插上电泳槽模板，使其底部距分离胶上层约 1cm。向浓缩 胶液中加入四甲基乙二胺 15μL，混匀后注入凝胶模子中，静置 30min，浓缩胶变为乳白色， 垂直向上小心取出电泳槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约 800mL，两槽内液面 介于高低玻璃板之间。 4）点样 用微量进样器吸取供试品溶液 20~40μL，注入电泳槽底部即可。 5）电泳 将正负极电泳槽分别与电泳仪的正负极相连，在负极槽电极缓冲液中加溴酚 蓝指示剂 1~2 滴，打开电源，开始电泳。电泳采用稳流控制，开始时电流 15mA，当样品进 入分离胶后，电流 25mA。为防止温度过高，可将电泳槽放在冰箱内。当溴酚蓝前沿行至距 琼脂层约 1cm 时，停止电泳，整个过程约需 3h。 6）染色与保存 打开电泳槽，取出胶板，标记前沿。将凝胶板浸于考马斯亮蓝 R250 染 色液内，37℃染色 1h。染色后用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料，再用脱色液脱色。经常 更换脱色液，直到背景清晰为止。凝胶板可放入脱色液中长期保存。 （2）常用中药的电泳鉴定 1）苦杏仁及桃仁 供试品溶液的制备：分取供试品粉末各约 1.0g，分别加入 25%浓 缩胶缓冲液 1mL，超声提取 30min，3 500rpm 离心 20min，吸取上清液，加入 40%蔗糖溶液 （1∶1），混匀。 电泳方法：吸取上述 2 种溶液各 20μL，分别点样于同一聚丙烯酰胺凝胶胶片上，用溴
