1基本实验 1.1中药显微鉴定基本技术 内容提要 本实验包括显微测量、显微制片的基本技术、显微化学反应和显微特征描述的基本方法。 通过实验掌握显微测量、显微制片、显微化学反应的一般方法与技术,掌握常见显微特 征描述的一般方法。 原理 (1)显微测量使用标定的目镜测微尺,测定显微目的物的大小(以μm为计量单位)。 目镜测微尺是放在目镜内的直径为2cm的圆形玻片,其上有100等分格的刻度尺,每一小 格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是在载玻片上 封固有精细刻度的标尺,标尺的长度是1mm,分为100等分小格(每小格的长度为10um), 用于目镜量尺的标定。使用标定的目镜测微尺,才能测量显微镜下目的物的大小 (2)显微制片根据鉴定工作的需要,采用徒手制片和机械制片等手段,制备各种显 微制片供显微特征的观察和描述。根据制作方法和保存的需要,分为半永久制片、永久制片 和临时制片3大类。根据观察的目的和对供试品采取的制片方法也不同,分切片标本片、解 离组织标本片、表面标本片、粉末标本片和磨片等:其中横切片多用于观察组织的排列特征: 纵切片多用于观察茎、木类中药的某些细胞组织,如射线的特征:解离组织片用于观察某些 细胞的形状,如纤维、石细胞等:表面片多用于观察叶、花、全草、果实和种子等的表面特 征,一般取某一部分制片:粉末片多用于观察组织碎片、细胞、内含物或某些中药颗粒的特 征:磨片用于坚硬药材,如骨类、贝壳类及矿石类显微特征的观察。 (3)显微化学反应显微化学反应是指在药材的临时切片(新鲜的材料效果尤佳)或粉 末片上滴加某种化学试剂,观察细胞壁、细胞内含物以及所含化学成分的反应。 (4)显微描绘器 1
1 1 基本实验 1.1 中药显微鉴定基本技术 内容提要 本实验包括显微测量、显微制片的基本技术、显微化学反应和显微特征描述的基本方法。 通过实验掌握显微测量、显微制片、显微化学反应的一般方法与技术,掌握常见显微特 征描述的一般方法。 原理 (1)显微测量 使用标定的目镜测微尺,测定显微目的物的大小(以 μm 为计量单位)。 目镜测微尺是放在目镜内的直径为 2cm 的圆形玻片,其上有 100 等分格的刻度尺,每一小 格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是在载玻片上 封固有精细刻度的标尺,标尺的长度是 1mm,分为 100 等分小格(每小格的长度为 10μm), 用于目镜量尺的标定。使用标定的目镜测微尺,才能测量显微镜下目的物的大小 (2)显微制片 根据鉴定工作的需要,采用徒手制片和机械制片等手段,制备各种显 微制片供显微特征的观察和描述。根据制作方法和保存的需要,分为半永久制片、永久制片 和临时制片 3 大类。根据观察的目的和对供试品采取的制片方法也不同,分切片标本片、解 离组织标本片、表面标本片、粉末标本片和磨片等;其中横切片多用于观察组织的排列特征; 纵切片多用于观察茎、木类中药的某些细胞组织,如射线的特征;解离组织片用于观察某些 细胞的形状,如纤维、石细胞等;表面片多用于观察叶、花、全草、果实和种子等的表面特 征,一般取某一部分制片;粉末片多用于观察组织碎片、细胞、内含物或某些中药颗粒的特 征;磨片用于坚硬药材,如骨类、贝壳类及矿石类显微特征的观察。 (3)显微化学反应 显微化学反应是指在药材的临时切片(新鲜的材料效果尤佳)或粉 末片上滴加某种化学试剂,观察细胞壁、细胞内含物以及所含化学成分的反应。 (4)显微描绘器
(5)显微特征的描述显微特征的描述是在观察显微特征的基础上,对显微特征进行 的形态描述。描述的内容主要有组织排列、细胞形状、细胞的大小和数量、颜色等。粉末显 微特征的描述应遵循先多数后少数、先特殊后一般、先感观后测试的原则进行。 2
2 (5)显微特征的描述 显微特征的描述是在观察显微特征的基础上,对显微特征进行 的形态描述。描述的内容主要有组织排列、细胞形状、细胞的大小和数量、颜色等。粉末显 微特征的描述应遵循先多数后少数、先特殊后一般、先感观后测试的原则进行
仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器生物显微镜,目镜测微尺,镜台测微尺,显微描绘器,镊子,解剖针,载玻片, 盖玻片,酒精灯,剃须刀片,粉碎机,绘图板,铅笔等。 2)材料粉末:艾叶,巴戟天,半夏,穿心莲,黄芪,木香,肉桂,石韦,洋金花。绵 马贯众叶柄永久制片 (2)试剂-萘酚浓硫酸试液,碘试液,间苯三酚试液,水合氯醛试剂,苏丹Ⅲ试液, 稀甘油试剂,盐酸,硝酸,碘化秘钾试剂,氯化锌碘试液,硫酸,钉红试液,硝酸汞试液, 乙醚,石油醚,90%乙醇,70%乙醇,-萘酚乙醇溶液,稀盐酸,稀醋酸等。 操作步骤 (1)显微测量 1)显微目镜测微尺的标化取下显微镜的目镜,将目镜测微尺的刻度面向上放入目境 内的视场光阑上,再旋上上透镜。 将镜台测微尺盖片面朝上放在再载物台上,用低倍镜观察,调节焦距看清楚镜台测微尺 的刻度。 移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0” 点刻度线或某刻度线对齐,然后从左向右察看两尺刻度线另一重合线,记录重合线间目镜测 微尺和镜台测微尺的格数(参见附录显微测量)。用下列公式计算目镜测微尺每小格的实际 长度。 镜台测微尺的格数×10μm 目镜测微尺每小格的实际长度= 目镜测微尺的格数 2)物体的测量移去镜台测微尺,换上标本片(选取显微特征描述用粉末制片),用目 镜测微尺测量显微镜下细胞或内含物所占小格数并乘以目镜测微尺每小格代表的实际长度, 即为被测物体的实际长度。 (2)显微制片 1)徒手切片 取材、固定与切片:取较细小的牛膝和麦冬药材,用水浸软,选择 适当部位,切割成长2~3cm的小段,用拇
3 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 生物显微镜,目镜测微尺,镜台测微尺,显微描绘器,镊子,解剖针,载玻片, 盖玻片,酒精灯,剃须刀片,粉碎机,绘图板,铅笔等。 2)材料 粉末:艾叶,巴戟天,半夏,穿心莲,黄芪,木香,肉桂,石韦,洋金花。绵 马贯众叶柄永久制片 (2)试剂 α-萘酚浓硫酸试液,碘试液,间苯三酚试液,水合氯醛试剂,苏丹Ⅲ试液, 稀甘油试剂,盐酸,硝酸,碘化铋钾试剂,氯化锌碘试液,硫酸,钌红试液,硝酸汞试液, 乙醚,石油醚,90%乙醇,70%乙醇,α-萘酚乙醇溶液,稀盐酸,稀醋酸等。 操作步骤 (1)显微测量 1)显微目镜测微尺的标化 取下显微镜的目镜,将目镜测微尺的刻度面向上放入目境 内的视场光阑上,再旋上上透镜。 将镜台测微尺盖片面朝上放在再载物台上,用低倍镜观察,调节焦距看清楚镜台测微尺 的刻度。 移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0” 点刻度线或某刻度线对齐,然后从左向右察看两尺刻度线另一重合线,记录重合线间目镜测 微尺和镜台测微尺的格数(参见附录显微测量)。用下列公式计算目镜测微尺每小格的实际 长度。 镜台测微尺的格数×10μm 目镜测微尺每小格的实际长度= 目镜测微尺的格数 2)物体的测量 移去镜台测微尺,换上标本片(选取显微特征描述用粉末制片),用目 镜测微尺测量显微镜下细胞或内含物所占小格数并乘以目镜测微尺每小格代表的实际长度, 即为被测物体的实际长度。 (2)显微制片 1)徒手切片 取材、固定与切片:取较细小的牛膝和麦冬药材,用水浸软,选择 适当部位,切割成长 2~3cm 的小段,用拇
解离组织制片及滑走切片、冷冻切片、石蜡切片等机械制片略,参见附录。 (3)显微化学反应 选择显微特征描述使用的标本片,滴加规定显微化学试剂,在显微镜下观察细胞壁或细 胞内含物的颜色变化。 1)细胞壁性质的鉴定木栓化或角质化细胞壁: 4
4 解离组织制片及滑走切片、冷冻切片、石蜡切片等机械制片略,参见附录。 (3)显微化学反应 选择显微特征描述使用的标本片,滴加规定显微化学试剂,在显微镜下观察细胞壁或细 胞内含物的颜色变化。 1)细胞壁性质的鉴定 木栓化或角质化细胞壁:
2)细胞内含物的鉴定淀粉粒: 3)组织或细胞内化学成分的鉴定略。参见1.2中药的化学定性鉴别。 (4)描绘器的使用及绘图方法 1)取下显微镜的接目镜,按说明书装上描绘器(或描绘目镜)。 2)装上显微标本片,调节物像清晰度。 3)调整绘图板的角度与描绘器的角度相一致,用显微描绘器上的滤光片调节光线强度
5 2)细胞内含物的鉴定 淀粉粒: 3)组织或细胞内化学成分的鉴定 略。参见 1.2 中药的化学定性鉴别。 (4)描绘器的使用及绘图方法 1)取下显微镜的接目镜,按说明书装上描绘器(或描绘目镜)。 2)装上显微标本片,调节物像清晰度。 3)调整绘图板的角度与描绘器的角度相一致,用显微描绘器上的滤光片调节光线强度
使视野中的物象及绘图纸上铅笔均较清晰,选定描绘的目的物(使用描绘目镜可省略绘图 板)。 4)用目镜侧微尺测量描绘的目的物的大小,然后绘图。 5)绘图时,先用HB型铅笔轻轻依物像描出细胞或组织的轮廓,确定无误后,移开描 绘器,用H型铅笔按要求的线条表示方法绘图,用橡皮擦去草图的铅笔痕。绘图的线条要 流畅、粗细均匀。 5)放大倍数的计算按下列公式计算: 绘图纸上描绘的图像长度 放大倍数= 被描绘目的物的实际长度 也可以在描绘目的物的一侧画出目镜侧微尺每个小格(或几个小格)长度的线段,再 测其实际长度后计算。或在所画出目镜侧微尺每个小格(或几个小格)长度的线段上标注实 际长度即可,如1个小格的线段标注10mμ,2个小格的线段标注20mμ。 (5)显微特征的描述 分取牛膝、麦冬的徒手切片和各供试品药材粉末少许,分别用水制片或制水合氯醛透化 标本片,置显微镜下观察。根据观察的对象和目的物,可进行必要的显微化学反应(参见显 微化学反应项下的要求)。 1)组织特征取绵马贯众叶柄、牛膝、麦冬横切面永久制片或徒手切片,由外向内依 次观察其木栓层(或表皮、厚壁组织)、皮层、维管束等组织的排列情况及其特征。 2)粉末特征淀粉粒:取半夏水制片,淀粉粒的类型、形状,测量淀粉粒的大小,观 察脐点的形状、位置,层纹的有无。 草酸钙针晶:取半夏粉末少许,制水合氯醛透化片或用水制片,观察并描述草酸钙晶体 的类型、存在状态,测量草酸钙针晶的长度。 石细胞:取巴戟天粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述石细胞的形状、颜色,测 量石细胞的大小、观察细胞壁及孔沟的特征。用间苯三酚-浓盐酸制片,观察和描述石细胞 壁的木化情况 韧皮纤维:取肉桂粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述韧皮纤维的分布状态、形 状、颜色、细胞壁的特征,测量细胞的长度和直径。用间苯三酚浓盐酸制片,观察和描述 细胞壁的木化情况
6 使视野中的物象及绘图纸上铅笔均较清晰,选定描绘的目的物(使用描绘目镜可省略绘图 板)。 4)用目镜侧微尺测量描绘的目的物的大小,然后绘图。 5)绘图时,先用 HB 型铅笔轻轻依物像描出细胞或组织的轮廓,确定无误后,移开描 绘器,用 H 型铅笔按要求的线条表示方法绘图,用橡皮擦去草图的铅笔痕。绘图的线条要 流畅、粗细均匀。 5)放大倍数的计算 按下列公式计算: 绘图纸上描绘的图像长度 放大倍数= 被描绘目的物的实际长度 也可以在描绘目的物的一侧画出目镜侧微尺每个小格(或几个小格)长度的线段,再 测其实际长度后计算。或在所画出目镜侧微尺每个小格(或几个小格)长度的线段上标注实 际长度即可,如 1 个小格的线段标注 10mμ,2 个小格的线段标注 20mμ。 (5)显微特征的描述 分取牛膝、麦冬的徒手切片和各供试品药材粉末少许,分别用水制片或制水合氯醛透化 标本片,置显微镜下观察。根据观察的对象和目的物,可进行必要的显微化学反应(参见显 微化学反应项下的要求)。 1)组织特征 取绵马贯众叶柄、牛膝、麦冬横切面永久制片或徒手切片,由外向内依 次观察其木栓层(或表皮、厚壁组织)、皮层、维管束等组织的排列情况及其特征。 2)粉末特征 淀粉粒:取半夏水制片,淀粉粒的类型、形状,测量淀粉粒的大小,观 察脐点的形状、位置,层纹的有无。 草酸钙针晶:取半夏粉末少许,制水合氯醛透化片或用水制片,观察并描述草酸钙晶体 的类型、存在状态,测量草酸钙针晶的长度。 石细胞:取巴戟天粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述石细胞的形状、颜色,测 量石细胞的大小、观察细胞壁及孔沟的特征。用间苯三酚-浓盐酸制片,观察和描述石细胞 壁的木化情况。 韧皮纤维:取肉桂粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述韧皮纤维的分布状态、形 状、颜色、细胞壁的特征,测量细胞的长度和直径。用间苯三酚-浓盐酸制片,观察和描述 细胞壁的木化情况
碳酸钙晶体(钟乳体):取穿心莲粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述碳酸钙晶 体的分布状态、形状、颜色,测量钟乳体的大小。在制片边缘滴加少许盐酸,观察钟乳体的 变化和产生的现象。 木栓细胞:取黄芪粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述木栓细胞的存在状态、切 面观和表面观的形状、颜色,用间苯三酚-浓盐酸试液制片,观察和描述木栓细胞的木化情 况:用苏丹试液制片,观察和描述木栓细胞的木栓化情况。 菊糖:取木香粉末少许,用水或水合氯醛制片(不透化),观察并描述菊糖的分布状态、 形状、颜色,表面特征。在制片的边缘滴加-萘酚-浓硫酸试液,观察并描述其化学反应。 非腺毛:分别取石韦、艾叶、洋金花粉末或药材碎片少许,制水合氯醛透化片,观察并 描述非腺毛的分布状态、类型、形状、颜色、表面特征、细胞的数目和组成情况,测量非腺 毛的长度和直径。用间苯三酚-浓盐酸试液制片,观察和描述非腺毛的木化情况:用苏丹Ⅲ 试液制片,观察和描述非腺毛的角质层情况。 腺毛:分别取艾叶、洋金花粉末或药材碎片少许,制水合氯醛透化片,观察并描述腺毛 的分布状态、形状、颜色、表面特征、腺头和腺柄细胞的数目和组成情况,测量腺毛头部柄 部长度和直径。 腺鳞:取穿心莲粉末或药材碎片少许,制水合氯醛透化片,观察并描述腺鳞的分布状 态、形状、颜色、表面特征、腺头和腺柄细胞的数目和组成情况,测量腺毛头部柄部的直径。 要点及难点解答 (1)目镜测微尺的标定同一显微镜,在目镜固定的情况下,不同放大倍数的物镜, 目镜测微尺必须分别标定。 (2)显微特征描述要在充分观察和测试的基础上进行,至少重复制备3片显微制片, 并采用“之”字移动法观察,以防特征遗漏。描述特征的确定至少观察20个以上的目的物。 (3)一般情况下,粉末显微特征检出的难易程度主要与制片的质量、取样、供试品的 粉碎度等有关。 (4)显微特征图的放大倍数取决于显微镜本身的放大倍数和绘图距离,绘图距离越大, 放大倍数越大。显微特征图的绘制方法参见附录
7 碳酸钙晶体(钟乳体):取穿心莲粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述碳酸钙晶 体的分布状态、形状、颜色,测量钟乳体的大小。在制片边缘滴加少许盐酸,观察钟乳体的 变化和产生的现象。 木栓细胞:取黄芪粉末少许,制水合氯醛透化片,观察并描述木栓细胞的存在状态、切 面观和表面观的形状、颜色,用间苯三酚-浓盐酸试液制片,观察和描述木栓细胞的木化情 况;用苏丹Ⅲ试液制片,观察和描述木栓细胞的木栓化情况。 菊糖:取木香粉末少许,用水或水合氯醛制片(不透化),观察并描述菊糖的分布状态、 形状、颜色,表面特征。在制片的边缘滴加 α-萘酚-浓硫酸试液,观察并描述其化学反应。 非腺毛:分别取石韦、艾叶、洋金花粉末或药材碎片少许,制水合氯醛透化片,观察并 描述非腺毛的分布状态、类型、形状、颜色、表面特征、细胞的数目和组成情况,测量非腺 毛的长度和直径。用间苯三酚-浓盐酸试液制片,观察和描述非腺毛的木化情况;用苏丹Ⅲ 试液制片,观察和描述非腺毛的角质层情况。 腺毛:分别取艾叶、洋金花粉末或药材碎片少许,制水合氯醛透化片,观察并描述腺毛 的分布状态、形状、颜色、表面特征、腺头和腺柄细胞的数目和组成情况,测量腺毛头部柄 部长度和直径。 腺鳞:取穿心莲粉末或药材碎片少许,制水合氯醛透化片,观察并描述腺鳞的分布状 态、形状、颜色、表面特征、腺头和腺柄细胞的数目和组成情况,测量腺毛头部柄部的直径。 要点及难点解答 (1)目镜测微尺的标定 同一显微镜,在目镜固定的情况下,不同放大倍数的物镜, 目镜测微尺必须分别标定。 (2)显微特征描述要在充分观察和测试的基础上进行,至少重复制备 3 片显微制片, 并采用“之”字移动法观察,以防特征遗漏。描述特征的确定至少观察 20 个以上的目的物。 (3)一般情况下,粉末显微特征检出的难易程度主要与制片的质量、取样、供试品的 粉碎度等有关。 (4)显微特征图的放大倍数取决于显微镜本身的放大倍数和绘图距离,绘图距离越大, 放大倍数越大。显微特征图的绘制方法参见附录
习题与作业 (1)习题 1)常用显微制片的基本过程和所观察的对象。 2)常见细胞壁、内含物显微化学反应的常用试剂。 3)双子叶植物和单子叶植物根类中药的组织构造特点。 (2)作业 1)写出显微镜目镜测微尺的标定结果。 2)写出显微特征描述的结果并绘图。 1.2中药的化学定性鉴别 内容提要 本实验采用中药常用的化学定性鉴别(包括显微化学鉴别)方法与基本技术,对部分常 用中药进行品种鉴定或质量控制。 通过实验掌握中药化学定性鉴别的一般规律和方法,掌握部分常用中药化学定性鉴别的 主要特征。 原理 化学定性分析是指利用某些化学试剂能与中药中的某种或某类化学成分产生特殊的气 味、颜色、沉淀或结晶等反应,作为鉴别中药品种的手段。优质中药的专属性成分,也可作 为质量评价的特征之一。在对中药进行化学定性分析时,可用其提取液、粉末或切片等来进 行。如将化学试剂直接加到中药表面、切片或粉末上,观察产生的结晶(用显微镜观察)以 及特殊的颜色反应:取切片或粉末也可装置在玻片或滤纸上,滴加相应的试剂进行直接观察: 取适量中药粉末于小试管中,加适当溶剂提出其化学成分,然后将溶液滴于玻片上、滤纸上 或加入小试管中,再滴加一定的化学试剂并观察其现象:利用微量升华法,将中药中可升华 的成分分出,加适当的试剂观察其化学反应现象等。 8
8 习题与作业 (1)习题 1)常用显微制片的基本过程和所观察的对象。 2)常见细胞壁、内含物显微化学反应的常用试剂。 3)双子叶植物和单子叶植物根类中药的组织构造特点。 (2)作业 1)写出显微镜目镜测微尺的标定结果。 2)写出显微特征描述的结果并绘图。 1.2 中药的化学定性鉴别 内容提要 本实验采用中药常用的化学定性鉴别(包括显微化学鉴别)方法与基本技术,对部分常 用中药进行品种鉴定或质量控制。 通过实验掌握中药化学定性鉴别的一般规律和方法,掌握部分常用中药化学定性鉴别的 主要特征。 原理 化学定性分析是指利用某些化学试剂能与中药中的某种或某类化学成分产生特殊的气 味、颜色、沉淀或结晶等反应,作为鉴别中药品种的手段。优质中药的专属性成分,也可作 为质量评价的特征之一。在对中药进行化学定性分析时,可用其提取液、粉末或切片等来进 行。如将化学试剂直接加到中药表面、切片或粉末上,观察产生的结晶(用显微镜观察)以 及特殊的颜色反应;取切片或粉末也可装置在玻片或滤纸上,滴加相应的试剂进行直接观察; 取适量中药粉末于小试管中,加适当溶剂提出其化学成分,然后将溶液滴于玻片上、滤纸上 或加入小试管中,再滴加一定的化学试剂并观察其现象;利用微量升华法,将中药中可升华 的成分分出,加适当的试剂观察其化学反应现象等
仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器天平,试管,烧杯,锥形瓶,吸管,量筒,漏斗,分液漏斗,滤纸,水浴锅, 蒸发皿,载玻片,盖玻片,电吹风等。 2)材料粉末:安息香,白术,槟榔,薄荷,蟾酥,丁香,番泻叶,茯苓,附子,狗脊, 诃子,厚朴,黄连,黄芩,金樱子,决明子,鹿茸,没药,全蝎,人参,乳香,延胡索,知 母。 (2)试剂0.2%吲哚醌溶液,0.25moL硫酸溶液,0.5%硫酸铜溶液,1%三氯化铁溶 液,1%铁氰化钾溶液,10%醋酸铅试液,10%氢氧化钠溶液,2%醋酸溶液,2%茚三酮溶液, 2,4-二硝基苯肼,3%过氧化氢溶液,4%氢氧化钠溶液,5%对二甲基苯甲醛的10%硫酸溶液, 5%三氯化铁的甲醇溶液(11:),5%三氯化铁乙醇溶液,5%茚三酮丙酮溶液,50%硫酸,- 萘酚试液,苯酚,醋酐,醋酸,碘化铋钾试液,碘化汞钾试液,碘化钾碘试液,碘试液, 对二甲氨基苯甲醛,过氧化氢试液,甲醇,碱性酒石酸铜试液,氯仿,氯化钠明胶试液,镁 粉,硝酸汞试剂,明胶试液,浓硫酸,氢氧化钠试液,四氯化碳,铁氰化钾三氯化铁试液, 稀醋酸,稀硫酸,香草醛,3%氢氧化钠氯化钠的饱合溶液,硝酸,盐酸,乙醇,乙醚等。 操作步骤 (1)含生物碱类成分中药的鉴定 1)取附子粉末约0.1g置试管中,加乙醇5mL,在水浴上加热20min,时时振摇,滤过, 滤液蒸干,加2%醋酸溶液2L,搅拌,滤过,滤液中加碘化汞钾试液2滴,即发生黄色沉 淀。 2)取延胡索粉末2g置小烧杯中,加0.25mol/L疏酸溶液20mL,振摇片刻,滤过。取 滤液2mL,加1%铁氰化钾溶液0.4mL与1%三氯化铁溶液0.3mL的混合液,即显深绿色, 渐变深蓝色,放置后底部有较多深蓝色沉淀。 另取延胡索粉末0.2g,加稀醋酸5mL,在水浴上加热5min,滤过。取滤波lmL, 加碘化铋钾试液1~2滴,显红棕色:另取滤液1mL,加碘化汞钾试液1~2滴,显淡黄色 沉淀。 3)取黄连粉末置载玻片上,加乙醇1~2滴及30%硝酸1滴,加盖玻片,放置片刻, 9
9 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 天平,试管,烧杯,锥形瓶,吸管,量筒,漏斗,分液漏斗,滤纸,水浴锅, 蒸发皿,载玻片,盖玻片,电吹风等。 2)材料 粉末:安息香,白术,槟榔,薄荷,蟾酥,丁香,番泻叶,茯苓,附子,狗脊, 诃子,厚朴,黄连,黄芩,金樱子,决明子,鹿茸,没药,全蝎,人参,乳香,延胡索,知 母。 (2)试剂 0.2%吲哚醌溶液,0.25mol/L 硫酸溶液,0.5%硫酸铜溶液,1%三氯化铁溶 液,1%铁氰化钾溶液,10%醋酸铅试液,10%氢氧化钠溶液,2%醋酸溶液,2%茚三酮溶液, 2,4-二硝基苯肼,3%过氧化氢溶液,4%氢氧化钠溶液,5%对二甲基苯甲醛的 10%硫酸溶液, 5%三氯化铁的甲醇溶液(11׃,(5%三氯化铁乙醇溶液,5%茚三酮丙酮溶液,50%硫酸,α- 萘酚试液,苯酚,醋酐,醋酸,碘化铋钾试液,碘化汞钾试液,碘化钾-碘试液,碘试液, 对二甲氨基苯甲醛,过氧化氢试液,甲醇,碱性酒石酸铜试液,氯仿,氯化钠明胶试液,镁 粉,硝酸汞试剂,明胶试液,浓硫酸,氢氧化钠试液,四氯化碳,铁氰化钾-三氯化铁试液, 稀醋酸,稀硫酸,香草醛,3%氢氧化钠氯化钠的饱合溶液,硝酸,盐酸,乙醇,乙醚等。 操作步骤 (1)含生物碱类成分中药的鉴定 1)取附子粉末约 0.1g 置试管中,加乙醇 5mL,在水浴上加热 20min,时时振摇,滤过, 滤液蒸干,加 2%醋酸溶液 2mL,搅拌,滤过,滤液中加碘化汞钾试液 2 滴,即发生黄色沉 淀。 2)取延胡索粉末 2g 置小烧杯中,加 0.25mol/L 硫酸溶液 20mL,振摇片刻,滤过。取 滤液 2mL,加 1%铁氰化钾溶液 0.4mL 与 1%三氯化铁溶液 0.3mL 的混合液,即显深绿色, 渐变深蓝色,放置后底部有较多深蓝色沉淀。 另取延胡索粉末 0.2g,加稀醋酸 5 mL,在水浴上加热 5min,滤过。取滤波 lmL, 加碘化铋钾试液 1~2 滴,显红棕色;另取滤液 lmL,加碘化汞钾试液 1~2 滴,显淡黄色 沉淀。 3)取黄连粉末置载玻片上,加乙醇 1~2 滴及 30%硝酸 1 滴,加盖玻片,放置片刻
镜检,有黄色针状或针簇状结晶析出,加热或放置,结晶消失并显红色。 4)取槟榔粉末0.5g,加水3~4mL,加5%硫酸液1滴,微热数分钟,滤过,取滤液1 滴于载玻片上,加碘化铋钾试滴1滴,即显混浊,放置后,置显微镜下观察,有石榴红色的 球晶或方晶产生。 (2)含酚类和鞣质类成分中药的鉴定 1)取狗脊粉末2g,加水30mL,加热15min,滤过。分取滤液2mL,加1%三氯化铁 试液,呈淡绿色:加铁氰化钾-三氯化铁试液,呈蓝黑色沉淀:加明胶试液,产生混浊或沉 淀。 2)取金樱子粉末5g,加水50mL,置60℃水浴上加热15min,立即滤过。取滤液lmL, 加碱性酒石酸铜试液4~5滴,在水浴中加热5min,生成红棕色沉淀:取滤液1mL,加1% 三氯化铁溶液1~2滴,即显暗紫色。 3)取诃子果肉粉末3g,加水30mL,50℃水浴温热3-5min,滤过。取滤液2mL,加 三氯化铁试液1滴,呈深蓝色和生成沉淀。另取滤液2mL,加氯化钠明胶试液1滴,生成 白色沉淀。 (3)含黄酮类成分中药的鉴定 取黄芩粉末2g,置100mL锥形瓶中,加乙醇20mL,置水浴上回流15min,滤过。取滤 液1mL,加10%醋酸铅试液2~3滴,即发生橘黄色沉淀:另取滤液mL,加镁粉少量与 盐酸3~4滴,显红色。 (4)含蒽醌类成分中药的鉴定 1)取决明子粉末0.5g,加稀硫酸20mL与氯仿10mL,微沸回流15min,分取氯仿层, 加入氢氧化钠试液10mL,振摇,放置,碱液层显红色:若显棕色,则分取碱液层加过氧化 氢试液l~2滴,再置水浴中加热4min,即显红色。 2)取番泻叶粉末0.1g,加50%硫酸10mL,沸水浴上加热水解15min,放冷,用氯仿或 乙醚萃取,分取氯仿层或乙醚层,加4%氢氧化钠溶液提取,碱液加3%过氧化氢溶液2滴, 沸水浴上加热4min,出现明显的红色。 (5)含皂苷类成分中药的鉴定 1)取知母粉末2g,加乙醇5mL,振摇后放置20min,吸取上面清液lmL,于水浴 上蒸干,残渣加浓硫酸2滴,初显黄色,继变红色、紫堇色,最后呈棕色。 2)分别取人参和三七粉末少许,放于白瓷板上,然后滴加浓硫酸1~2滴,人参呈棕褐 色,三七呈血红色。 o
10 镜检,有黄色针状或针簇状结晶析出,加热或放置,结晶消失并显红色。 4)取槟榔粉末 0.5g,加水 3~4mL,加 5%硫酸液 1 滴,微热数分钟,滤过,取滤液 1 滴于载玻片上,加碘化铋钾试滴 1 滴,即显混浊,放置后,置显微镜下观察,有石榴红色的 球晶或方晶产生。 (2)含酚类和鞣质类成分中药的鉴定 1)取狗脊粉末 2g,加水 30mL,加热 15min,滤过。分取滤液 2mL,加 1%三氯化铁 试液,呈淡绿色;加铁氰化钾-三氯化铁试液,呈蓝黑色沉淀;加明胶试液,产生混浊或沉 淀。 2)取金樱子粉末 5g,加水 50mL,置 60℃水浴上加热 15min,立即滤过。取滤液 1mL, 加碱性酒石酸铜试液 4~5 滴,在水浴中加热 5min,生成红棕色沉淀;取滤液 1mL,加 1% 三氯化铁溶液 1~2 滴,即显暗紫色。 3) 取诃子果肉粉末 3g,加水 30mL,50℃水浴温热 3~5min,滤过。取滤液 2mL,加 三氯化铁试液 1 滴,呈深蓝色和生成沉淀。另取滤液 2mL,加氯化钠明胶试液 1 滴,生成 白色沉淀。 (3)含黄酮类成分中药的鉴定 取黄芩粉末 2g,置 100mL 锥形瓶中,加乙醇 20mL,置水浴上回流 15min,滤过。取滤 液 1mL,加 10%醋酸铅试液 2~3 滴,即发生橘黄色沉淀;另取滤液 lmL,加镁粉少量与 盐酸 3~4 滴,显红色。 (4)含蒽醌类成分中药的鉴定 1)取决明子粉末 0.5g,加稀硫酸 20mL 与氯仿 10mL,微沸回流 15min,分取氯仿层, 加入氢氧化钠试液 10mL,振摇,放置,碱液层显红色;若显棕色,则分取碱液层加过氧化 氢试液 1~2 滴,再置水浴中加热 4min,即显红色。 2)取番泻叶粉末 0.1g,加 50%硫酸 10mL,沸水浴上加热水解 15min,放冷,用氯仿或 乙醚萃取,分取氯仿层或乙醚层,加 4%氢氧化钠溶液提取,碱液加 3%过氧化氢溶液 2 滴, 沸水浴上加热 4min,出现明显的红色。 (5)含皂苷类成分中药的鉴定 1)取知母粉末 2 g,加乙醇 5 mL,振摇后放置 20min,吸取上面清液 1mL,于水浴 上蒸干,残渣加浓硫酸 2 滴,初显黄色,继变红色、紫堇色,最后呈棕色。 2)分别取人参和三七粉末少许,放于白瓷板上,然后滴加浓硫酸 1~2 滴,人参呈棕褐 色,三七呈血红色