3.32材料的收集与处理 3.321原材料的选择 生物体中酶含量一般很低,应选择含酶量髙的材料作为原料。选择适当的物种、器官、组织、 细胞,甚至细胞器作为酶的来源,还应注意材料处于适当的发育阶段。必要时还可以采用人工处 理(环境条件、试剂处理〕来提高酶的含量。材料来源应尽量方便、价廉,动物主要是选择器官 和组织(如兔肌、牛心等),植物要选择器官和发育阶段(如黄化幼苗、绿叶等),微生物要选择 菌株(还可以通过诱变来提高酶的含量)。 要注意,不同来源的同一种酶,其结构和性质可能会有差异。 3322细胞的破碎 动植物组织少量时可用研钵研磨或匀浆器匀浆,研磨前可用低温预冷或液氮速冻。大量组织 可用高速组织捣碎机。将组织制成丙酮粉,具有含水量低,脱脂,比较稳定等优点,往组织匀浆 中加入-15~-20℃的冷丙酮,抽滤,再加几次丙酮并抽滤,沉淀部分在室温下放置1小时左右 至无丙酮味,然后转移到盛有五氧化二磷的真空干燥器中干燥,干燥后的丙酮粉置于低温冰箱中 保存备用。丙酮粉中的脂肪已被除去,可以避免脂质的干扰,并使原来不溶的酶(膜结合酶)溶 于水。从丙酮粉中提取酶可往丙酮粉中加抽提液搅拌,过滤或离心即可 对于微生物细胞的破碎,可采用碱处理、溶菌酶加EDIA处理、渗透冲击、超声波破碎、固 体剪切、液体剪切等方法。 3.323酶的抽提 在破碎细胞时应加入抽提液。抽提液常由缓冲液、蛋白酶抑制剂(如苯甲磺酰氟PMSF) EDIA、巯基保护剂、甘油、Mg2等组成。若抽提的酶是膜结合酶,抽提液中还应含有非离子型 的表面活性剂( Triton x-100、 Tween20、 Tween80等)。 333酶的初步纯化 酶的分离纯化是把目标酶与其他杂质分离开,使目标酶的纯度提高。酶的纯度用比活性来衡 量,以电泳结果为单带,且进一步纯化不能提高比活性为达到均一。 3.33.1沉淀法 1.盐析法 不同的蛋白质在不同的盐浓度下溶解性不同,在低温下往酶溶液中慢慢加入某种盐,在不同4 3.3.2 材料的收集与处理 3.3.2.1 原材料的选择 生物体中酶含量一般很低，应选择含酶量高的材料作为原料。选择适当的物种、器官、组织、 细胞，甚至细胞器作为酶的来源，还应注意材料处于适当的发育阶段。必要时还可以采用人工处 理（环境条件、试剂处理）来提高酶的含量。材料来源应尽量方便、价廉，动物主要是选择器官 和组织（如兔肌、牛心等），植物要选择器官和发育阶段（如黄化幼苗、绿叶等），微生物要选择 菌株（还可以通过诱变来提高酶的含量）。 要注意，不同来源的同一种酶，其结构和性质可能会有差异。 3.3.2.2 细胞的破碎 动植物组织少量时可用研钵研磨或匀浆器匀浆，研磨前可用低温预冷或液氮速冻。大量组织 可用高速组织捣碎机。将组织制成丙酮粉，具有含水量低，脱脂，比较稳定等优点，往组织匀浆 中加入－15～－20℃的冷丙酮，抽滤，再加几次丙酮并抽滤，沉淀部分在室温下放置 1 小时左右 至无丙酮味，然后转移到盛有五氧化二磷的真空干燥器中干燥，干燥后的丙酮粉置于低温冰箱中 保存备用。丙酮粉中的脂肪已被除去，可以避免脂质的干扰，并使原来不溶的酶（膜结合酶）溶 于水。从丙酮粉中提取酶可往丙酮粉中加抽提液搅拌，过滤或离心即可。 对于微生物细胞的破碎，可采用碱处理、溶菌酶加 EDTA 处理、渗透冲击、超声波破碎、固 体剪切、液体剪切等方法。 3.3.2.3 酶的抽提 在破碎细胞时应加入抽提液。抽提液常由缓冲液、蛋白酶抑制剂（如苯甲磺酰氟 PMSF）、 EDTA、巯基保护剂、甘油、Mg 2＋等组成。若抽提的酶是膜结合酶，抽提液中还应含有非离子型 的表面活性剂（Triton x-100、Tween 20、Tween 80 等）。 3.3.3 酶的初步纯化 酶的分离纯化是把目标酶与其他杂质分离开，使目标酶的纯度提高。酶的纯度用比活性来衡 量，以电泳结果为单带，且进一步纯化不能提高比活性为达到均一。 3.3.3.1 沉淀法 1．盐析法 不同的蛋白质在不同的盐浓度下溶解性不同，在低温下往酶溶液中慢慢加入某种盐，在不同