的盐浓度下有不同的蛋白质沉淀出来,离心可获得不同的蛋白质沉淀组分,这叫分级沉淀。常用 的盐是硫酸铵,因为它在低温下溶解度高,对大多数酶无毒,价廉,有时对酶还有稳定作用 2.有机溶剂沉淀 常用来沉淀蛋白质的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮。不同的蛋白质在不同的有机溶剂浓度下 沉淀出来。 3.三氯乙酸沉淀 尽快恢复到中性pHl 4.PEG沉淀 聚乙二醇对蛋白质有保护作用,用PEG分级沉淀纯化效果很好。PEG2000、4000、6000、 8000都可以用(平均分子量)。 沉淀法要注意酶溶液的pH、离子强度、蛋白质浓度、温度等条件。沉淀法还能起到浓缩的 作用。 对于耐热的酶还可以采用热变性的方法,高温下短时间处理,许多不耐热的蛋白质发生沉淀, 离心后耐热的目标酶保留在上清液中。 3.332透析与超滤 1.透析 将酶液装进透析袋中,置于适当的缓冲液中,在低温下搅拌,更换几次透析液,可除去酶液 中高浓度的盐及一些小分子杂质,也能起到换缓冲液的作用 在装有酶液的透析袋外加固体 Sephadex或PEG吸水,可浓缩酶液 2.超滤 超滤也是一种既可纯化又可浓缩的技术,他是利用不同孔径的超滤膜,截留下不同分子量的 蛋白质,从而使分子量不同的蛋白质分离开,从而达到浓缩和纯化的目的 超滤的方式有真空吸滤和离心超滤两种 蛋白质的超滤特性是可变的,这取决于许多因素。 Westmacott(1972)研究了大肠杆菌部分 纯化的青霉素酶制剂的超滤特性,他使用一种截留分子量30,000的各向异性膜,缓冲液的pH和 盐浓度不同,酶的通透量变化在16%到59%之间;最高通透量在pH51~62,接近酶的等电点; 在pH80时,把缓冲液的浓度从1mmoL提高到30 mmo/L,酶的通透量从16%增加到20%;加5 的盐浓度下有不同的蛋白质沉淀出来，离心可获得不同的蛋白质沉淀组分，这叫分级沉淀。常用 的盐是硫酸铵，因为它在低温下溶解度高，对大多数酶无毒，价廉，有时对酶还有稳定作用。 2．有机溶剂沉淀 常用来沉淀蛋白质的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮。不同的蛋白质在不同的有机溶剂浓度下 沉淀出来。 3．三氯乙酸沉淀 尽快恢复到中性 pH。 4．PEG 沉淀 聚乙二醇对蛋白质有保护作用，用 PEG 分级沉淀纯化效果很好。PEG2000、4000、6000、 8000 都可以用（平均分子量）。 沉淀法要注意酶溶液的 pH、离子强度、蛋白质浓度、温度等条件。沉淀法还能起到浓缩的 作用。 对于耐热的酶还可以采用热变性的方法，高温下短时间处理，许多不耐热的蛋白质发生沉淀， 离心后耐热的目标酶保留在上清液中。 3.3.3.2 透析与超滤 1．透析 将酶液装进透析袋中，置于适当的缓冲液中，在低温下搅拌，更换几次透析液，可除去酶液 中高浓度的盐及一些小分子杂质，也能起到换缓冲液的作用。 在装有酶液的透析袋外加固体 Sephadex 或 PEG 吸水，可浓缩酶液。 2．超滤 超滤也是一种既可纯化又可浓缩的技术，他是利用不同孔径的超滤膜，截留下不同分子量的 蛋白质，从而使分子量不同的蛋白质分离开，从而达到浓缩和纯化的目的。 超滤的方式有真空吸滤和离心超滤两种。 蛋白质的超滤特性是可变的，这取决于许多因素。Westmacott（1972）研究了大肠杆菌部分 纯化的青霉素酶制剂的超滤特性，他使用一种截留分子量 30,000 的各向异性膜，缓冲液的 pH 和 盐浓度不同，酶的通透量变化在 1.6%到 55%之间；最高通透量在 pH5.1～6.2，接近酶的等电点； 在 pH8.0 时，把缓冲液的浓度从 1mmol/L 提高到 30mmol/L，酶的通透量从 1.6%增加到 20%；加