第四章单克隆杭保 1,抗体特异性的鉴定 除用免疫原（抗原）进行抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交 叉试验，方法可用ELISA、FA法。例如：①制备抗黑色素瘤细胞的MCAb,除用黑色素瘤 细胞反应外，还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性 或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。②制备抗重组的细胞因子的单克降抗体，应首先考虑是否与 表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其它细胞因子间有无交叉。 2.McAb的g类与亚类的鉴定 一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时己经基本上确定了抗体的g类型。 如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠1gG或1gM,则检测出来的抗体一般是1gG类或gM 类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心ELISA来确定。在作双扩试验时， 如加入适量的PEG(3%),更有利于沉淀线的形成。 3.McAb中和活性的鉴定 用动物或细胞的保护实验来确定McAb的生物学活性。例如，如果确定抗病毒McAb 的中和活性，则可用抗体和病毒同时接种于易感的动物或敏感的细胞，来观察动物或细胞是 否得到抗体的保护。 4.McAb识别抗原表位的鉴定 用竞争结合试验，测相加指数的方法，测定McAb所识别抗原位点，来确定MCAb的 识别的表位是否相同。 5.McAb亲合力的鉴定 用ELISA或RIA竞争结合试验来确定MAb与相应抗原结合的亲合力 第三节大鼠单克隆抗体的制备 作为小鼠杂交单克隆抗体的重要补充，20世纪80年代由比利时Louvain大学成功培 育了可用于制备杂交瘤的大鼠体系，简称Lou大鼠。在此基础上，Bazin和Beckers教授通 过基因导入及品系的筛选，成功培育了产生kappa-la和kappa-lb不同轻链的两种同种异型 大最，其区别仅在轻链上的一个等位基因，而组织相容性完全相同，这一特性提供了纯化大 鼠单克隆抗体的独特体系。如在免疫时使用产生kappa-la的大鼠，在制备腹水时使用产生 kap-pa-lb的大鼠，由于单抗的轻链为kappa-la,因此用针对kappa-la的单抗亲和层析柱进行 抗体纯化，可将特异单抗同宿主体内的抗体区别开来，使从腹水内获得单抗的纯度大大提高 而且大鼠产生单抗腹水量是小鼠的十几倍甚至更多。L0u大鼠极易自发产生骨随脑，故用于 融合的大鼠骨髓瘤细胞系较易建立，其诱变原理及杂交瘤的筛选均同小鼠体系 北京肿瘤防治研究所在1986年将大鼠杂交瘤体系从比利时Louvair大学引入国内，并 将其用于抗肿瘤抗体的研制。大鼠对抗原的免疫反应性与小鼠不尽相同，有些抗原难以致敏 小鼠，在此种情况下选用大鼠体系较易获得理想的单克隆抗体。因用小鼠系统制备单抗已能 满足绝大部分研究及临床检测对抗体的要求，故大鼠单抗杂交瘤体系的使用远不如小鼠广 -66-第四章 单克隆抗体 - 66 - 1．抗体特异性的鉴定 除用免疫原（抗原）进行抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交 叉试验，方法可用 ELISA、IFA 法。例如：①制备抗黑色素瘤细胞的 McAb，除用黑色素瘤 细胞反应外，还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性 或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。②制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体，应首先考虑是否与 表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其它细胞因子间有无交叉。 2．McAb 的 Ig 类与亚类的鉴定 一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的 Ig 类型。 如果用的是酶标或荧光素标记的兔抗鼠 IgG 或 IgM，则检测出来的抗体一般是 IgG 类或 IgM 类。至于亚类则需要用标准抗亚类血清系统作双扩或夹心 ELISA 来确定。在作双扩试验时， 如加入适量的 PEG（3%），更有利于沉淀线的形成。 3．McAb 中和活性的鉴定 用动物或细胞的保护实验来确定 McAb 的生物学活性。例如，如果确定抗病毒 McAb 的中和活性，则可用抗体和病毒同时接种于易感的动物或敏感的细胞，来观察动物或细胞是 否得到抗体的保护。 4．McAb 识别抗原表位的鉴定 用竞争结合试验，测相加指数的方法，测定 McAb 所识别抗原位点，来确定 McAb 的 识别的表位是否相同。 5．McAb 亲合力的鉴定 用 ELISA 或 RIA 竞争结合试验来确定 McAb 与相应抗原结合的亲合力。 第三节 大鼠单克隆抗体的制备 作为小鼠杂交瘤单克隆抗体的重要补充，20 世纪 80 年代由比利时 Louvain 大学成功培 育了可用于制备杂交瘤的大鼠体系，简称 Lou 大鼠。在此基础上，Bazin 和 Beckers 教授通 过基因导入及品系的筛选，成功培育了产生 kappa-la 和 kappa-1b 不同轻链的两种同种异型 大鼠，其区别仅在轻链上的一个等位基因，而组织相容性完全相同，这一特性提供了纯化大 鼠单克隆抗体的独特体系。如在免疫时使用产生 kappa-1a 的大鼠，在制备腹水时使用产生 kap-pa-l b 的大鼠，由于单抗的轻链为 kappa-la，因此用针对 kappa-la 的单抗亲和层析柱进行 抗体纯化，可将特异单抗同宿主体内的抗体区别开来，使从腹水内获得单抗的纯度大大提高， 而且大鼠产生单抗腹水量是小鼠的十几倍甚至更多。Lou 大鼠极易自发产生骨髓瘤，故用于 融合的大鼠骨髓瘤细胞系较易建立，其诱变原理及杂交瘤的筛选均同小鼠体系。 北京肿瘤防治研究所在 1986 年将大鼠杂交瘤体系从比利时 Louvain 大学引入国内，并 将其用于抗肿瘤抗体的研制。大鼠对抗原的免疫反应性与小鼠不尽相同，有些抗原难以致敏 小鼠，在此种情况下选用大鼠体系较易获得理想的单克隆抗体。因用小鼠系统制备单抗已能 满足绝大部分研究及临床检测对抗体的要求，故大鼠单抗杂交瘤体系的使用远不如小鼠广