第四章单克隆杭体 泛。 一、大鼠杂交瘤技术特点 1.大鼠易于饲养，制各杂交瘤的原理及技术方法与小鼠体系相同。但大鼠体内诱生的 单克隆抗体腹水产量可大于小鼠的10余倍。一只大鼠可获取50-150mg单抗。作者曾用分 次抽取的方法，一只大鼠最多取得98ml腹水 2.大鼠单抗的纯化可采用免疫亲和层析技术（原理详述见后），特异高效，简便快速且 经济。这对贵重和（或）难以纯化的抗原尤其重要。提取免疫球蛋白所用的常规技术方法如 DEAE层析法、凝胶过滤、制备性电泳等虽可用，但所获取的单抗纯度及其收获率均有限。 3。大鼠抗体的多样性与小鼠不同。某些外源性抗原用大鼠研制单抗可行，而小鼠则否： 另外，非源于小鼠和大鼠的某些抗原诱生的免疫反应，大鼠明显比小鼠强。 4.大鼠免疫球蛋白的物理化学及生物学性质与小鼠不同，大gG1、1gG2a与gG2b 亚类的单抗很容易固定人或兔补体，其IgG2b类单抗可介导ADCC。基于上述特点，大鼠 杂交瘤体系确为小鼠的良好补充体系。此外，还可为研制独特型抗体提供一有效的手段。 5.大鼠及骨髓瘤细胞①LOU大鼠：目前采用的大鼠骨髓瘤细胞主要是LOU大鼠及 其同种异型(allotype)大鼠，这两种同种异型的大鼠仅仅在轻链上一个等位基因((allele-a、 allele-b)不同，除此以外具有完全相同的组织相容性。这一性状对建立特异的单克隆抗体纯 化体系提供了特别重要的基础条件。LOU大鼠性情温顺且容易饲养和繁殖，是一理想的实 验动物。②骨随瘤细胞：LOU/C大鼠常在结肠淋巴结部位自发地产生免疫细胞瘤，简称R (immunocytoma of rat),一般于第12-~15个月时产生自发瘤，雄性LOU/C肿瘤自发率平均 为28%~34%左右，最高可达57%。雕性大鼠为14%~17%左右，最高可达29%。而L0UM 的R自发率则很低。雄性大鼠在1%-5%左右，而醮性更低。IR好发部位在结肠淋巴结， 肿瘤细胞为未分化的淋巴样细胞。Bazin和Beckers发现其中多数具有分泌免疫球蛋白的功 能，且分泌的免疫球蛋白亚类有IgG1、gG2a、gG2b、lgG2c、lgM、lgD、lgE及gA等。 其中分泌IgG与gM的特性可保持数年之久。然而，其分泌1gE、IgD的特性不稳定，即使 经过反复克隆，其分泌特性也很容易丢失。 二、大鼠杂交瘤的技术方法 制备大鼠杂交瘤细胞的原理、操作程序与小鼠杂交瘤技术相同，不再赘述。在此仅就大 鼠技术体系的特点叙述如下。 (一)融合用骨南细胞 制备大鼠杂交瘤细胞用的骨髓瘤细胞系有210-RCY3-Agl2.3(简称为Y3)、YB2及 R983F(简称R983或983)。Y3自身仍分泌κ链免疫球蛋白。因此制备大鼠杂交瘤细胞均 采用983或YB2.1986年作者从比利时Ba2in教授实验室引进了IR983F细胞系及LOU/C、 LOU/CLgK-b及LOUM大鼠，IR983F细胞系由Bazin教授建立。983来源于LOU/C大鼠的 immunocytoma,所以称IR983,自身不分泌g,为对8-zaguanine有抗性的变异细胞株，不 -67 第四章 单克隆抗体 - 67 - 泛。 一、大鼠杂交瘤技术特点 ⒈ 大鼠易于饲养，制备杂交瘤的原理及技术方法与小鼠体系相同。但大鼠体内诱生的 单克隆抗体腹水产量可大于小鼠的 10 余倍。一只大鼠可获取 50~150mg 单抗。作者曾用分 次抽取的方法，一只大鼠最多取得 98ml 腹水。 ⒉ 大鼠单抗的纯化可采用免疫亲和层析技术（原理详述见后），特异高效，简便快速且 经济。这对贵重和（或）难以纯化的抗原尤其重要。提取免疫球蛋白所用的常规技术方法如 DEAE 层析法、凝胶过滤、制备性电泳等虽可用，但所获取的单抗纯度及其收获率均有限。 ⒊ 大鼠抗体的多样性与小鼠不同。某些外源性抗原用大鼠研制单抗可行，而小鼠则否； 另外，非源于小鼠和大鼠的某些抗原诱生的免疫反应，大鼠明显比小鼠强。 ⒋ 大鼠免疫球蛋白的物理化学及生物学性质与小鼠不同，大鼠 IgG1、IgG2a 与 IgG2b 亚类的单抗很容易固定人或兔补体，其 IgG2b 类单抗可介导 ADCC。基于上述特点，大鼠 杂交瘤体系确为小鼠的良好补充体系。此外，还可为研制独特型抗体提供一有效的手段。 ⒌ 大鼠及骨髓瘤细胞 ①LOU 大鼠：目前采用的大鼠骨髓瘤细胞主要是 LOU 大鼠及 其同种异型（allotype）大鼠，这两种同种异型的大鼠仅仅在轻链上一个等位基因（allele-a、 allele-b）不同，除此以外具有完全相同的组织相容性。这一性状对建立特异的单克隆抗体纯 化体系提供了特别重要的基础条件。LOU 大鼠性情温顺且容易饲养和繁殖，是一理想的实 验动物。②骨髓瘤细胞：LOU/C 大鼠常在结肠淋巴结部位自发地产生免疫细胞瘤，简称 IR （immunocytoma of rat），一般于第 12~15 个月时产生自发瘤，雄性 LOU/C 肿瘤自发率平均 为 28％~34％左右，最高可达 57％。雌性大鼠为 14％~17％左右，最高可达 29％。而 LOU/M 的 IR 自发率则很低。雄性大鼠在 1％~5％左右，而雌性更低。IR 好发部位在结肠淋巴结， 肿瘤细胞为未分化的淋巴样细胞。Bazin 和 Beckers 发现其中多数具有分泌免疫球蛋白的功 能，且分泌的免疫球蛋白亚类有 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgM、IgD、IgE 及 IgA 等。 其中分泌 IgG 与 IgM 的特性可保持数年之久。然而，其分泌 IgE、IgD 的特性不稳定，即使 经过反复克隆，其分泌特性也很容易丢失。 二、大鼠杂交瘤的技术方法 制备大鼠杂交瘤细胞的原理、操作程序与小鼠杂交瘤技术相同，不再赘述。在此仅就大 鼠技术体系的特点叙述如下。 (一) 融合用骨髓瘤细胞 制备大鼠杂交瘤细胞用的骨髓瘤细胞系有 210-RCY3-Agl.2.3（简称为 Y3）、YB2 及 IR983F（简称 IR983 或 983）。Y3 自身仍分泌κ链免疫球蛋白。因此制备大鼠杂交瘤细胞均 采用 983 或 YB2。1986 年作者从比利时 Bazin 教授实验室引进了 IR983F 细胞系及 LOU/C、 LOU/CIgκ-lb 及 LOU/M 大鼠，IR983F 细胞系由 Bazin 教授建立。983 来源于 LOU/C 大鼠的 immunocytoma，所以称 IR983，自身不分泌 Ig，为对 8- zaguanine 有抗性的变异细胞株，不