入指示剂后分装，121℃高压灭菌15min。冷至50℃~55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。 尿素的最终浓度为2%。分装于无菌试管内，放成斜面备用。 ③试验方法：挑取琼脂培养物接利 在36C±1℃培养24h,观察结果。尿素酶阳性者 由于产碱而使培养基变为红色。 (IO)氰化钾(KCN)培养基 ①成分：蛋白胨10.0g,氯化钠5.0g,磷酸二氢钾0.225g,磷酸氢二钠5.64g,蒸馏水 1000mL.05%氧化钾200mL ②制法：将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，分装后121℃高压灭菌15 min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度 为1：10000)，分装于无菌试管内，每管约4mL,立刻用无菌檬皮塞塞紧，放在4℃冰箱 内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。 ③试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释南液，挑取1环接种于氰化钾 (KCN)培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在36℃±1℃培养1d~2d,观察结 果。如有细菌生长即为阳性（不抑制） 经2d细菌不生长为阴性（抑制） 注：氰化钾是制毒药，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验 失败的主要原因是封口不严，额化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因 而造成假阳性反应，试验时对每一环节都要特别胜意。 (11)输氨酸脱羧酶试验培养基 ①成分：蛋白陈50g,酵母浸膏30g,葡萄糖1.0 蒸馏水1000mL,1.6%溴甲酚紫 乙醇溶液1.0mL,L-赖氨酸或DL-赖氨酸0.5g100mL或1.0g100mL ②制法：除赖氨酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100L,分别加入赖氨酸。L- 赖氨酸按0.5%加入，DL-赖氨酸按1%加入。调节pH6.8灶0.2。对照培养基不加賴氨酸。分 装于无菌的小试管内，每管0.5mL,上面滴加一层液体石错，115℃高压灭南10min。 ③试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36C±1℃培养18h一24h,观察结 果。氨 酸脱羧酶阳性者由 ，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产 酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。 (12)糖发酵管 ①成分：牛肉音50g,蛋白陈100g,氯化钠30g,磷酸氢二钠（含12个结品水） 2.0g,0.2%溴麝香草酚蓝溶液120mL 榴水1000ml ②制法：葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节pH7.402。按0.5%加入葡萄糖，分 装于有 一个倒置小管的小试管内，121C高压灭菌15min。 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min。另 将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以 无菌操作分步小试管。 转不纯， 加热后合自行水银者，应采用讨遗法除苗 试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般2d3d。 迟缓反应需观察14d30d。 (13)邻硝基酚B-D半乳糖苷(ONPG)培养基 ①成分：邻硝基酚B-D半乳糖苷(ONPG)60.0mg,0.01mo/L磷酸钠缓神液 (pH7.5)10.0mL,1%蛋白胨水(pH7.5)30.0mL ②制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白陈水，以过滤法除菌，分装于无菌的 试管内，每管0.5mL,用橡皮塞塞紧。 ③试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36℃±1℃培养1h~3h和24h 观察结果。如果B半乳糖苷酶产生，则于1h3h变黄色，如无此酶则24h不变色。入指示剂后分装，121℃高压灭菌15 min。冷至50℃～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。 尿素的最终浓度为2％。分装于无菌试管内，放成斜面备用。 ③ 试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36℃±1℃培养24 h，观察结果。尿素酶阳性者 由于产碱而使培养基变为红色。 （10）氰化钾（KCN）培养基 ① 成分：蛋白胨10.0 g，氯化钠5.0 g，磷酸二氢钾0.225 g，磷酸氢二钠5.64 g，蒸馏水 1 000 mL，0.5％氰化钾20.0 mL。 ② 制法：将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，分装后121℃高压灭菌15 min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL 培养基加入0.5％氰化钾溶液2.0 mL（最后浓度 为1:10 000），分装于无菌试管内，每管约4 mL，立刻用无菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱 内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。 ③ 试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1 环接种于氰化钾 （KCN）培养基。并另挑取1 环接种于对照培养基。在36℃±1℃培养1 d～2 d，观察结 果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2 d细菌不生长为阴性（抑制）。 注:氰化钾是剧毒药，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验 失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因 而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。 （11）赖氨酸脱羧酶试验培养基 ① 成分：蛋白胨5.0 g，酵母浸膏3.0 g，葡萄糖1.0 g，蒸馏水1 000 mL，1.6%溴甲酚紫 -乙醇溶液1.0 mL，L-赖氨酸或DL-赖氨酸0.5 g/100 mL或1.0 g/100 mL。 ② 制法：除赖氨酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100 mL，分别加入赖氨酸。L- 赖氨酸按0.5％加入，DL-赖氨酸按1％加入。调节pH 6.8±0.2。对照培养基不加赖氨酸。分 装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10 min。 ③ 试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36℃±1 ℃培养18 h～24 h，观察结 果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产 酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。 （12）糖发酵管 ① 成分：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化钠3.0 g，磷酸氢二钠（含12 个结晶水） 2.0 g，0.2%溴麝香草酚蓝溶液12.0 mL，蒸馏水1 000 mL。 ② 制法：葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节pH 7.4±0.2。按0.5%加入葡萄糖，分 装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15 min。 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100 mL，121℃高压灭菌15 min。另 将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5 mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以 无菌操作分装小试管。 注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。 ③ 试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般2 d～3 d。 迟缓反应需观察14 d～30 d。 （13）邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基 ① 成分：邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）60.0 mg，0.01mol/L磷酸钠缓冲液 （pH7.5）10.0 mL，1％蛋白胨水（pH7.5）30.0 mL。 ② 制法：将ONPG 溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于无菌的小 试管内，每管0.5 mL，用橡皮塞塞紧。 ③ 试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物1 满环接种，于36℃±1℃培养1 h～3 h和24 h 观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生，则于1 h～3 h变黄色，如无此酶则24 h不变色