在一般情况下,碱性蛋白质(等电点大于plH70)在pH小于等电点时带正电荷,被阳离子交换 剂吸附;酸性蛋白质(等电点小于pH70)在pH大于等电点时带负电荷,被阴离子交换剂吸附 离子交换剂的衬质(也称载体)常见的有树脂( resin)、纤维素( cellulose)、葡聚糖凝胶 ( Sephadex)、琼脂糖凝胶( Sepharose)、丙烯酸共聚物( Trisacryl)等。其中离子交换树脂物理 性能稳定,蛋白质吸附容量高,装柱时沉降迅速,洗脱时允许高流速,但它的高吸附力用于蛋白 质纯化时却往往是缺点,因为蛋白质可能经受不住从树脂上洗脱下来所必需的激烈条件,所以不 常用于蛋白质的纯化。离子交换纤维素价格低廉,交换容量较低,一般为离子交换树脂交换容量 的,,洗脱条件温和,是常用的离子交换剂。离子交换 Sephadex凝胶是在 Sephadex G-25或 Sephadex G-50上引入DEAE或CM基团制备成的。以 Sephadex G-50为衬质的离子交换凝胶具 有高蛋白容量,但它们较软,而且在缓冲液pH或离子强度改变时会收缩或膨胀,不宜用于柱层 析。把DEAE或CM基团引入交联琼脂糖或丙烯酸共聚物可得到离子交换 Sepharose和 Trisacryl 这两种类型的离子交换剂是由小而均匀的、能确保高流速的珠形颗粒组成,具有高蛋白容量。它 们在一般层析压力下不变形,更重要的是它们在离子强度改变时及极端pH下都不会收缩或膨胀 因此可在柱中再生。再生的方法是 阳离子交换剂0.5NHCl→05 NAoH→0.5NHCl→水→平衡 阴离子交换剂0.5 N NaOH→0.5NHCl→0.5 N NaOH→水→平衡 3.43凝胶过滤层析 凝胶层析也称凝胶过滤、分子筛层析、排阻层析。凝胶层析的原理可以用3-氯-1,2-环氧丙烷 交联的 Sephadex凝胶来说明。所用的葡聚糖是由肠膜明串珠菌产生的产物,葡萄糖残基主要以 α-1,6-糖苷键联结。交联程度受所用的3-氯-1,2-环氧丙烷含量控制,从而决定了凝胶基质的水合 (复得水)程度及凝胶的孔隙度。每单位干重凝胶复得的水越多,其孔隙度也越大,它所能分级 分离的分子也越大。葡聚糖/交联剂之比越大,孔隙度也越大,反之孔隙度小。若将一混合物上 样到柱的上端,洗脱时,大分子量的分子因不能进入凝胶颗粒内部的孔隙而最先流出,而小分子 量的分子因能进入凝胶颗粒内部,延长了行进的路线而后流出。不能进入凝胶颗粒内部的最小分 子的分子量称为该凝胶的排阻限度。在能进入凝胶颗粒内部的分子当中,分子量较大的先流出, 分子量较小的后流出,这样就能将不同分子量大小的物质分开。将洗脱液分部收集,找出酶活性7 在一般情况下，碱性蛋白质（等电点大于 pH7.0）在 pH 小于等电点时带正电荷，被阳离子交换 剂吸附；酸性蛋白质（等电点小于 pH7.0）在 pH 大于等电点时带负电荷，被阴离子交换剂吸附。 离子交换剂的衬质（也称载体）常见的有树脂（resin）、纤维素（cellulose）、葡聚糖凝胶 （Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、丙烯酸共聚物（Trisacryl）等。其中离子交换树脂物理 性能稳定，蛋白质吸附容量高，装柱时沉降迅速，洗脱时允许高流速，但它的高吸附力用于蛋白 质纯化时却往往是缺点，因为蛋白质可能经受不住从树脂上洗脱下来所必需的激烈条件，所以不 常用于蛋白质的纯化。离子交换纤维素价格低廉，交换容量较低，一般为离子交换树脂交换容量 的 10 1 ，洗脱条件温和，是常用的离子交换剂。离子交换 Sephadex 凝胶是在 Sephadex G-25 或 Sephadex G-50 上引入 DEAE 或 CM 基团制备成的。以 Sephadex G-50 为衬质的离子交换凝胶具 有高蛋白容量，但它们较软，而且在缓冲液 pH 或离子强度改变时会收缩或膨胀，不宜用于柱层 析。把 DEAE 或 CM 基团引入交联琼脂糖或丙烯酸共聚物可得到离子交换 Sepharose 和 Trisacryl。 这两种类型的离子交换剂是由小而均匀的、能确保高流速的珠形颗粒组成，具有高蛋白容量。它 们在一般层析压力下不变形，更重要的是它们在离子强度改变时及极端 pH 下都不会收缩或膨胀， 因此可在柱中再生。再生的方法是： 阳离子交换剂 0.5N HCl→0.5N NaOH→0.5N HCl→水→平衡 阴离子交换剂 0.5N NaOH→0.5N HCl→0.5N NaOH→水→平衡 3.3.4.3 凝胶过滤层析 凝胶层析也称凝胶过滤、分子筛层析、排阻层析。凝胶层析的原理可以用 3-氯-1,2-环氧丙烷 交联的 Sephadex 凝胶来说明。所用的葡聚糖是由肠膜明串珠菌产生的产物，葡萄糖残基主要以 α-1,6-糖苷键联结。交联程度受所用的 3-氯-1,2-环氧丙烷含量控制，从而决定了凝胶基质的水合 （复得水）程度及凝胶的孔隙度。每单位干重凝胶复得的水越多，其孔隙度也越大，它所能分级 分离的分子也越大。葡聚糖／交联剂之比越大，孔隙度也越大，反之孔隙度小。若将一混合物上 样到柱的上端，洗脱时，大分子量的分子因不能进入凝胶颗粒内部的孔隙而最先流出，而小分子 量的分子因能进入凝胶颗粒内部，延长了行进的路线而后流出。不能进入凝胶颗粒内部的最小分 子的分子量称为该凝胶的排阻限度。在能进入凝胶颗粒内部的分子当中，分子量较大的先流出， 分子量较小的后流出，这样就能将不同分子量大小的物质分开。将洗脱液分部收集，找出酶活性