最低探测限可达10-7mol,其敏感性甚至超过放射免疫法 8.细胞因子检测技术。细胞因子的检测,近年来在中医临床及实验室中已广泛应用 1)LL-2的检测。I2的测定,可应用于研究淋巴细胞的活性、免疫调节剂作用机制、 临床对肿瘤患者疗效观察以及预后的判断、中医中药的疗效及作用和机理的观察等,也可用 于中药对实验动物的免疫调节作用的观察 (1)ⅡL-2依赖T细胞株的增殖试验。这是目前公认的常规方法。系利用LL-2依赖T 细胞株(CILL-2)只能在含有IL-2的培养液中才能维持增殖,且其增殖幅度与Ⅱ-2含量在 一定范围内成正比的特性,通过ⅢH-TdR掺入法测得CnLL-2细胞的增殖程度,以推知培养 系统内所含的I1-2量 (2)活化淋巴细胞增殖试验。先以ConA刺激 BALB/c小鼠的脾脏细胞,经一定时间 后,从被刺激细胞中分离出淋巴母细胞。将待检的ⅡL-2样品加入淋巴母细胞悬液共同培养 适时加入H-TdR,再培养一段时间。收集细胞,测定H-ldR掺入量,可推知样品中I-2 的含量。该法可以不用IL-2依赖细胞株,但其实验重复性不如上法。 2)I-4的检测。有关I-4的报道,见于与IgE有关的变态反应性疾病的研究。检测 方法有B细胞增殖试验。取BALB品系小鼠的脾脏细胞,以CDC法去除T细胞,再将纯 化的B细胞与待检的Il-4样品共同孵育。适时加入H-TdR,再经培养后收集细胞,测定 H-TdR掺入量,推知样品I-4含量。 3)IL-6的检测。临床已将IL-6检测用于烧伤等应激状态下兔疫系统改变的观察,以 及判断多发性骨髓瘤患者病情轻重和预后等方面。现已建立的ⅡL-6检测方法为I-6依赖细 胞株増殖试验。该法以含I-6的待测标本与LL6依赖株(B细胞株等)共冋孵育,适时加 入H-TdR,再培养一定时间后,收集细胞,测定H-dR掺入量,推知标本内的IL-6含 量。近来有些实验室以四甲基偶氮唑蓝(MTT)替代放射性核素掺入细胞内,通过细胞内 线粒体酶的作用,可在细胞内形成蓝色颗粒,然后溶解细胞,以分光光度计测量培养液内蓝 色颗粒含量,以推测样品内的Ⅱ-6含量。 4)干扰素(TNF)的检测。TNF测定主要应用于炎症性疾病和感染性休克等机制的 研究,也用于对肿瘤患者预后判断及疗效考核。此外,检测器官移植者血浆与尿液内TNF 含量也可作为一种移植免疫生物学指标和排斥反应的早期指征。目前TNF检测方法是选取 原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株、小鼠纤维母细胞L29株等作为靶细胞,定量后与TNF标本共 同孵育。经一定时间后,用显微镜直接观察细胞活性,或以染料染色后鉴定细胞活性,计算 出细胞毒作用百分率。以50%细胞毒作用的效价作为TNF的抗瘤活性单位。也有在孵育后 的细胞培养液中加入MII,通过溶解细胞后,以比色法测定蓝色颗粒来推知TNF的活性单 5)肿瘤坏死因子(IFN)的检测。IN测定除可确定临床使用的IFN制剂的含量外 测定血清内IFN水平或测定受体PHA刺激后淋巴细胞产生IFN的水平,均可反映机体细胞 免疫的状态。临床研究发现,IFN的产生能力和血清含量与某些变态反应性疾病的发病机制 有一定联系,也与肿瘤的预后相关。此检测也可应用于中药诱生干扰素的能力,以测定中药 作用原理。 测定IFN的经典方法是细胞病变抑制法。该法系先将IFN标本与病毒的靶细胞(如 Wish细胞等)共同孵育一定时间,然后加入攻击病毒。再经一定时间培养,当未加IFN的 照内75%~100%的细胞出现病变,而未加病毒的细胞对照依然完好时,通过显微镜观察 细胞病变情况。此时,若与某一稀释度的IFN标本共育的细胞仍有50%左右不出现病变 则表示该稀释度标本内含有保护细胞的足够的IFN,该稀释度即为标本中含有的IFN效价。 9.细胞受体的检测。受体是细胞表面标志之一,通过对受体的检测,可以了解细胞 的功能,并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。 1)补体受体(CR)。CR存在于许多细胞表面,在调节补体级联反应中起关键作用 并参与同细胞表面补体成分的结合。最常见的有CR1、CR2、CR3、CR4,它们存在于不同 的细胞上,分别识别不同的补体成分。如CR1可识别C3b和C4b,存在于人的红细胞、巨 噬细胞的B细胞上。CR1具有一系列不同的生物学活性,包括清除循环免疫复合物、对补 体系统的调节作用及识别补体覆盖的抗原等。CR2识别C3b,CR2和CR1在因子Ⅰ裂解灭 活的C3b(C3b)时有类似作用。CR3识别iC3b,主要存在于巨噬细胞上。CR4主要识别 C3dg。最低探测限可达 10-17mol，其敏感性甚至超过放射免疫法。 8．细胞因子检测技术。细胞因子的检测，近年来在中医临床及实验室中已广泛应用。 1）IL-2 的检测。IL-2 的测定，可应用于研究淋巴细胞的活性、免疫调节剂作用机制、 临床对肿瘤患者疗效观察以及预后的判断、中医中药的疗效及作用和机理的观察等，也可用 于中药对实验动物的免疫调节作用的观察。 （1）IL-2 依赖 T 细胞株的增殖试验。这是目前公认的常规方法。系利用 IL-2 依赖 T 细胞株（CTLL-2）只能在含有 IL-2 的培养液中才能维持增殖，且其增殖幅度与 IL-2 含量在 一定范围内成正比的特性，通过 3H-TdR 掺入法测得 CTLL-2 细胞的增殖程度，以推知培养 系统内所含的 IL-2 量。 （2）活化淋巴细胞增殖试验。先以 ConA 刺激 BALB/c 小鼠的脾脏细胞，经一定时间 后，从被刺激细胞中分离出淋巴母细胞。将待检的 IL-2 样品加入淋巴母细胞悬液共同培养， 适时加入 3H-TdR，再培养一段时间。收集细胞，测定 3H-TdR 掺入量，可推知样品中 IL-2 的含量。该法可以不用 IL-2 依赖细胞株，但其实验重复性不如上法。 2）IL-4 的检测。有关 IL-4 的报道，见于与 IgE 有关的变态反应性疾病的研究。检测 方法有 B 细胞增殖试验。取 BALB/c 品系小鼠的脾脏细胞，以 CDC 法去除 T 细胞，再将纯 化的 B 细胞与待检的 IL-4 样品共同孵育。适时加入 3H-TdR，再经培养后收集细胞，测定 3H-TdR 掺入量，推知样品 IL-4 含量。 3）IL-6 的检测。临床已将 IL-6 检测用于烧伤等应激状态下免疫系统改变的观察，以 及判断多发性骨髓瘤患者病情轻重和预后等方面。现已建立的 IL-6 检测方法为 IL-6 依赖细 胞株增殖试验。该法以含 IL-6 的待测标本与 IL-6 依赖株（B9 细胞株等）共同孵育，适时加 入 3H-TdR ，再培养一定时间后，收集细胞，测定 3H-TdR 掺入量，推知标本内的 IL-6 含 量。近来有些实验室以四甲基偶氮唑蓝（MTT）替代放射性核素掺入细胞内，通过细胞内 线粒体酶的作用，可在细胞内形成蓝色颗粒，然后溶解细胞，以分光光度计测量培养液内蓝 色颗粒含量，以推测样品内的 IL-6 含量。 4）干扰素（TNF）的检测。TNF 测定主要应用于炎症性疾病和感染性休克等机制的 研究，也用于对肿瘤患者预后判断及疗效考核。此外，检测器官移植者血浆与尿液内 TNF 含量也可作为一种移植免疫生物学指标和排斥反应的早期指征。目前 TNF 检测方法是选取 原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株、小鼠纤维母细胞 L929 株等作为靶细胞，定量后与 TNF 标本共 同孵育。经一定时间后，用显微镜直接观察细胞活性，或以染料染色后鉴定细胞活性，计算 出细胞毒作用百分率。以 50% 细胞毒作用的效价作为 TNF 的抗瘤活性单位。也有在孵育后 的细胞培养液中加入 MTT，通过溶解细胞后，以比色法测定蓝色颗粒来推知 TNF 的活性单 位。 5）肿瘤坏死因子（IFN）的检测。IFN 测定除可确定临床使用的 IFN 制剂的含量外， 测定血清内 IFN 水平或测定受体 PHA 刺激后淋巴细胞产生 IFN 的水平，均可反映机体细胞 免疫的状态。临床研究发现，IFN 的产生能力和血清含量与某些变态反应性疾病的发病机制 有一定联系，也与肿瘤的预后相关。此检测也可应用于中药诱生干扰素的能力，以测定中药 作用原理。 测定 IFN 的经典方法是细胞病变抑制法。该法系先将 IFN 标本与病毒的靶细胞（如 Wish 细胞等）共同孵育一定时间，然后加入攻击病毒。再经一定时间培养，当未加 IFN 的 对照内 75%～100% 的细胞出现病变，而未加病毒的细胞对照依然完好时，通过显微镜观察 细胞病变情况。此时，若与某一稀释度的 IFN 标本共育的细胞仍有 50% 左右不出现病变， 则表示该稀释度标本内含有保护细胞的足够的 IFN，该稀释度即为标本中含有的 IFN 效价。 9．细胞受体的检测。受体是细胞表面标志之一，通过对受体的检测，可以了解细胞 的功能，并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。 1）补体受体（CR）。CR 存在于许多细胞表面，在调节补体级联反应中起关键作用， 并参与同细胞表面补体成分的结合。最常见的有 CR1、CR2、CR3、CR4，它们存在于不同 的细胞上，分别识别不同的补体成分。如 CR1 可识别 C3b 和 C4b，存在于人的红细胞、巨 噬细胞的 B 细胞上。CR1 具有一系列不同的生物学活性，包括清除循环免疫复合物、对补 体系统的调节作用及识别补体覆盖的抗原等。CR2 识别 C3b，CR2 和 CR1 在因子Ⅰ裂解灭 活的 C3b（iC3b）时有类似作用。CR3 识别 iC3b，主要存在于巨噬细胞上。CR4 主要识别 C3dg