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以转化,其原因可能是线状DA在进入细胞溶质之前被细胞周质内的DNA酶消化, 缺乏这种DNA酶的大肠杆菌株能高效地转化外源线型DNA片段的事实证实了这 点。有关C2+诱导的机制目前还不十分清楚,一般认为可能与增加细胞的通透 性有关。 电穿孔法(electroporation)对真核生物和原核生物均适用。现在已用这种 技术对许多不能导入A的G和G+细菌成功的实现了转化。所谓电穿孔法是用 高压脉冲电流击破细胞膜或击成小孔,使各种大分子(包括DA)能通过这些小孔 进入细胞,所以又称电转化,该方法最初用于将NA导入真核细胞,后来也逐渐 用于转化包括大肠杆菌在内的原核细胞。在大肠杆菌中,通过优化各个参数(电 场强度、电泳冲长度和DNA浓度等),每微克DNM可以得到109-10转化体。但由 于C2+诱导法简便,价廉,因此仍为实验室中大肠杆菌转化的常用方法。 (二)转导 1952年,辛德和莱德伯格在实验鼠伤寒沙门氏杆菊能否进行接合作用时发 现了转导。 1.定义 转导:通过缺陷型噬菌体将供体菌的D小A片断携带到受体菌中,使后者获得 前者部分遗传性状的现象。 转导子:通过转导获得供体细胞部分遗传性状的重组受体细胞成为转导子。 转导可分为普遍性转导和局限性转导二种类型。在普遍性转导中,噬菌体可 以携带供体菌上的任何一段基因将它转导至受体细胞中:而在局限性转导中,噬 菌体总是携带少数同样的片段到受体细胞中。 2.普遍转导 噬菌体侵入寄主细胞后,通过复制和合成,将寄主DA降解成很多小片断, 进入装配阶段。正常情况下,噬菌体将自身的A包裹在衣壳中,但也有异常的 可能,它误将寄主细胞的D八A的某一片断包裹进去,这样的噬菌体叫缺陷噬菌体 体内仅含有供体DNA的缺陷噬菌体叫做完全缺陷噬菌体,同时含有两种DNA的叫 部分缺陷噬菌体。这种异常情况出现的几率是很低的,但由于噬菌体产生的子代 数量很多,所以这种情况还是时常出现的。当包裹有寄主D八A片断的噬菌体释放 后再度感染新的寄主,其中供体菌的DA片断进入受体菌,并通过基因重组使受
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