核酸 实验五酵母RNA的提制 一、目的： 学习和掌握从酵母中提制RNA的原理和方法，从而加深对核酸性质的认识。 二、原理： 提取和制各RNA的首要问题是选RNA含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸 的原科，其中RNA的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%), DNA很少(0.03一O.516%),而且菌体容易收集，RNA也易于分离。此外，抽提后的菌体 蛋白质（占干菌体的50%）仍具有很高的应用价值。 RNA提制过程首先要使RNA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去。 再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将pH调至2.0~2.5，使RNA沉淀，进行离心 收集。然后运用RNA不溶于有机溶剂乙醇的特性，以乙醇洗涤RNA沉淀。 提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。稀碱法利用细胞壁 在稀碱条件下溶解，使RNA释放出来，这种方法提取时间短，但RNA在稀碱条件下不稳 定，容易被碱分解：浓盐法是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的诱性，使 RNA释放出来，此法易掌握，产品颜色较好。使用浓盐法提出RNA时应注意掌握温度 避免在20一0℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用的温度范围， 会使RNA因降解而降低提取率。在90~100℃条件下加热可使蛋白质变性，破坏磷酸二酯 南和磷酸单酯酶，有利于RNA的提取。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1.实验材料 活性干酵母：pH0.5~50的精密试纸：冰块。 2.仪器 (1)药物天平 (2)三角瓶(100mL) (3)量筒(50mL) (4)水浴锅 (5)由拉 (6)试管木夹 1616 核 酸 实验五 酵母 RNA的提制 一、目的： 学习和掌握从酵母中提制 RNA 的原理和方法，从而加深对核酸性质的认识。 二、原理： 提取和制备 RNA 的首要问题是选 RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸 的原料，其中 RNA 的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是 RNA（2.67～10.0%）， DNA 很少（0.03～0.516％），而且菌体容易收集，RNA 也易于分离。此外，抽提后的菌体 蛋白质（占干菌体的 50%）仍具有很高的应用价值。 RNA 提制过程首先要使 RNA 从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去。 再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将 pH 调至 2.0～2.5，使 RNA 沉淀，进行离心 收集。然后运用 RNA 不溶于有机溶剂乙醇的特性，以乙醇洗涤 RNA 沉淀。 提取 RNA 的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。稀碱法利用细胞壁 在稀碱条件下溶解，使 RNA 释放出来，这种方法提取时间短，但 RNA 在稀碱条件下不稳 定，容易被碱分解；浓盐法是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的透性，使 RNA 释放出来，此法易掌握，产品颜色较好。使用浓盐法提出 RNA 时应注意掌握温度， 避免在 20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用的温度范围， 会使 RNA 因降解而降低提取率。在 90～100℃条件下加热可使蛋白质变性，破坏磷酸二酯 酶和磷酸单酯酶，有利于 RNA 的提取。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 活性干酵母；pH0.5～5.0 的精密试纸；冰块。 2．仪器 （1）药物天平 （2）三角瓶（100mL） （3）量筒（50mL） （4）水浴锅 （5）电炉 （6）试管木夹