(3)离心机：转速不低于4000rmin。 (4)超声波水浴。 (5)固相萃取装置】 (6)阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯 乙烯.二乙烯基苯高聚物，60mg,3mL,或相当者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活 化。 (7)氨气吹干仪 (8)氮气：纯度大于等于99.999% (9)涡旋混合器 (10)具塞塑料离心管：50mL。 (11)研体。 (12)定性滤纸。 (13)微孔滤膜：0.2m,有机相。 (四)分析步骤 1.样品处理 (1)提取 ①液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等：称取2g(精确至0.01g)试样于50mL具塞 塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10mim,再振荡提取10min 后，以不低于40o0min离心10min 上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙 酸溶液定 容至2 移取5mL滤液 ,加入5mL水混匀后做待净化液 ②奶酪、奶油和巧克力等：称取2g(精确至0.01g)试样于研体中，加入适量海砂 (试样质量的4倍~6倍)研磨成干粉状，转移至50mL具塞塑料离心管中，用15mL三氯乙 酸溶液分数次清洗研体，清洗液转入离心管中，再往离心管中加入5mL乙腈，余下操作同 个中“招声提取10mi .加入5mL水混匀后做待净化液”。 防含量较高。可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液：液分配除脂后再用SPE柱净化 (2)净化：将特净化液转移至周相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至 近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相茶取过程流速不超过1mL/mi。洗脱液于 50℃下用氮气吹干，残留物（相当于0.4g样品）用1mL流动相定容，涡旋混合1min,过微 A滤膜后，供HPLC测定。 2.高效液相色谱测定 (I)HPLC参考条件 ①色谱柱：C8柱，250mm×4.6mm(i.d.),5m,或相当者：C18柱，250mm×4.6 mm(i.d.),5um,或相当者。 ②流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈(85+15，体积比)，混匀：C18柱，离子 对试剂缓冲液-乙腈(90+10，体积比)，混匀。 回流 1.0 ml/min ④柱温：40℃。 ⑤波长：240nm。 ⑥进样量：20L。 (2)标准曲线的绘制：用流动相将三聚氯胺标准储各液深级稀释得到的浓度为08 gmL、 2 ug/mL 20 ue/mL、4 )ug/ml 80gmL的标准工作液，浓度由低到高进样检 测，以峰面积浓度作图 得到标准曲线回归方程 (3)定量测定：待测样液中三聚氰胺的响应值应在标淮曲线线性范围内，超过线性范 围则应稀释后再进样分析。 （3）离心机：转速不低于4 000 r/min。 （4）超声波水浴。 （5）固相萃取装置。 （6）阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯 乙烯-二乙烯基苯高聚物，60 mg，3 mL，或相当者。使用前依次用3 mL甲醇、5 mL水活 化。 （7）氮气吹干仪。 （8）氮气：纯度大于等于99.999％。 （9）涡旋混合器。 （10）具塞塑料离心管：50 mL。 （11）研钵。 （12）定性滤纸。 （13）微孔滤膜：0.2 μm，有机相。 （四） 分析步骤 1. 样品处理 （1）提取 ①液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等：称取2 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞 塑料离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和5 mL乙腈，超声提取10 min，再振荡提取10 min 后，以不低于4 000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙 酸溶液定容至25 mL，移取5 mL滤液，加入5 mL水混匀后做待净化液。 ② 奶酪、奶油和巧克力等：称取2 g（精确至0.01 g）试样于研钵中，加入适量海砂 （试样质量的4倍～6倍）研磨成干粉状，转移至50 mL具塞塑料离心管中，用15 mL三氯乙 酸溶液分数次清洗研钵，清洗液转入离心管中，再往离心管中加入5 mL乙腈，余下操作同 ①中“超声提取10 min，……加入5 mL水混匀后做待净化液”。 注：若样品中脂肪含量较高，可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。 （2）净化：将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3 mL水和3 mL甲醇洗涤，抽至 近干后，用6 mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。洗脱液于 50℃下用氮气吹干，残留物（相当于0.4 g样品）用1 mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微 孔滤膜后，供HPLC测定。 2. 高效液相色谱测定 （1）HPLC 参考条件 ① 色谱柱：C8柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或相当者；C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或相当者。 ② 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（85+15，体积比），混匀；C18柱，离子 对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混匀。 ③ 流速：1.0 mL/min。 ④ 柱温：40℃。 ⑤ 波长：240 nm。 ⑥ 进样量：20 μL。 （2）标准曲线的绘制：用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8 μg/mL、2 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检 测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。 （3）定量测定：待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范 围则应稀释后再进样分析