分钟左右DNA形成絮状沉淀 1l.用玻棒捞出DNA沉淀70%乙醇漂洗再在干净吸水纸上吸干。 12.将DNA重溶解于1mlTE,-20贮存。 13.取2μlDNA样品在0.7% Agarose胶上电泳,检测DNA的分子大小。同 时取15μl稀释20倍,测定OD260OD280,检测DNA含量及质量。 [注意]5g样品可保证获得500μgDNA,足供RFLP、PCR等分析之用 (二).从李(苹果)叶子提取基因组DNA 1.取3-5克嫩叶,液氮磨成粉状。 2.加入提取缓冲液Ⅱl0ml,再研磨至溶浆状。10000pm,10min。 3.去上清液沉淀加提取液Ⅰ20ml,混匀。65℃,30-60min,常摇动。 4.同本节(一)中步骤3-13操作。 第三节从动物组织提取基因组DNA 、材料 哺乳动物新鲜组织。 设备 移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。 三、试剂 1、分离缓冲液:10 mmol/ tris·ClpH74,10 mmol/L Nacl,25 mMoVL EDTA。 2、其它试剂:10%SDS,蛋白酶K(20mgml或粉剂),乙醚,酚:氯仿:异戊 醇(2524:1),无水乙醇及70%乙醇,5 mol/L Nacl,3 mo/L NaAc,TE 四、操作步骤: 1.切取组织5g左右,剔除结缔组织吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越 2.倒入液氮磨成粉末加10m分离缓冲液 3.加lmll0%SDS,混匀此时样品变得很粘稠。 4.加50ul或1mg蛋白酶K,37℃保温1-2小时,直到组织完全解体 5.加1m5 mol/L NaCl,混匀5000pm离心数秒钟。 6取上清液于新离心管,用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层分钟左右,DNA 形成絮状沉淀。 11. 用玻棒捞出 DNA 沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。 12. 将 DNA 重溶解于 1ml TE, -20 贮存。 13. 取 2μl DNA 样品在 0.7% Agarose 胶上电泳, 检测 DNA 的分子大小。同 时取 15μl 稀释 20 倍, 测定 OD260/OD280, 检测 DNA 含量及质量。 [注意] 5g 样品可保证获得 500μg DNA, 足供 RFLP、PCR 等分析之用。 （二）. 从李(苹果)叶子提取基因组 DNA 1. 取 3-5 克嫩叶, 液氮磨成粉状。 2. 加入提取缓冲液Ⅱ10ml, 再研磨至溶浆状。10000rpm, 10min。 3. 去上清液,沉淀加提取液Ⅰ20ml, 混匀。65℃, 30-60min, 常摇动。 4. 同本节（一）中步骤 3-13 操作。 第三节 从动物组织提取基因组 DNA 一、材料 哺乳动物新鲜组织。 二、设备 移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。 三、试剂 1、分离缓冲液：10mmol/L Tris·Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。 2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml 或粉剂)，乙醚，酚:氯仿:异戊 醇(25:24:1)，无水乙醇及 70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。 四、操作步骤: 1. 切取组织 5g 左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越 好)。 2. 倒入液氮,磨成粉末,加 10ml 分离缓冲液。 3. 加 1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。 4. 加 50ul 或 1mg 蛋白酶 K, 37℃保温 1-2 小时, 直到组织完全解体。 5. 加 1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm 离心数秒钟。 6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层